全 文 ：类叶升麻苷在体内诱导血红素加氧酶-1 的表达
王洪权 王玉敏1 崔其福 赵伟丽1 王丽娜
(赤峰学院医学院 赤峰学院附属医院神经内科，内蒙古 赤峰 024005)
〔摘 要〕 目的 探讨类叶升麻苷(AS)是否在体内诱导血红素加氧酶-1(HO-1)的表达。方法 AS 12. 5 mg /kg 和 25 mg /kg以腹腔注射的方
式给予 SD大鼠，在特定时间处死大鼠，取大脑皮层和纹状体组织以及肾脏和肝脏组织。提取组织蛋白，Western印迹方法检测 HO-1。结果 与正常
对照组相比，AS可在皮层和纹状体中剂量依赖性诱导 HO-1 的表达上调，在外周肾脏和肝脏组织中 AS剂量依赖诱导 HO-1 的表达上调。结论 AS
可在体内诱导 HO-1 的表达。
〔关键词〕 类叶升麻苷;血红素加氧酶-1;神经退行性疾病;蛋白表达
〔中图分类号〕 Ｒ741. 05 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2015)02-0419-02;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2015. 02. 062
Acteoside induced heme oxygenase-1 expression in vivo
WANG Hong-Quan，WANG Yu-Min，CUI Qi-Fu，et al．
Chifeng Medical College，Chifeng University，Chifeng 024005，Inner Mongolia，China
【Abstract】 Objective To investigate whether Acteoide(AS)induce Heme oxygenase-1(HO-1)expression in vivo．Methods Male
Sprague-Dawley rats(220 ～ 250 g)were treated with a single injection with 12． 5，25 mg /kg body weight AS ． Animals brain tissue were re-
moved，and immunohistochemistry was carried out． Fresh brain，kidney and liver tissue were homogenized in lysis buffer，then the HO-1 levels
were determined by Western blot． Ｒesults AS induced the expression of HO-1 in a concentration-dependent in rat cortex and striatum，also
in liver and kidney． Conclusions AS could induce Heme HO-1 expression in vivo．
【Key words】 Acteoside;Heme oxygenase-1;Neurodegenerative disease;Protein expression
基金项目:国家自然科学基金项目(No． 81260196) ;内蒙古自治区高等
学校青年科技英才支持计划(No． NJYT-13-B20) ;内蒙古自治
区高等学校科学研究项目(No． NJZZ12306，NJZZ14271) ;国
家社科基金项目(No． 13CＲK009) ;内蒙古自然科学基金项目
(2014MS0892，2014BS0802，2014MS0814，2013MS1176) ;赤峰
学院科研创新团队建设计划
1 肿瘤内科
第一作者:王洪权(1979-) ，男，博士，副教授，主治医师，主要从事神经
退行疾病发病机制及其防治的临床与基础研究。
血红素加氧酶-1(HO-1)通过抗氧化损伤作用而发挥其神
经保护作用〔1〕。大量研究表明，体内活性氧(ＲOS)产生增加或
ＲOS清除能力的减低，从而破坏氧化还原稳态，最终导致细胞
内总的 ＲOS增加或氧化应激(OS)的发生。在 OS状态下，过多
的 ＲOS持续不断地攻击脂质、蛋白质和 DNA，导致严重不可逆
的氧化损伤。OS参与许多疾病的病理机制。包括神经退行性
疾病〔2〕。因此目前筛选出能够上调 HO-1 表达的天然化合物成
为氧化应激损伤的研究热点〔3，4〕。本研究探讨天然抗氧化剂类
叶升麻苷(AS)是否能够在体内上调 HO-1 的表达。为探讨 AS
作为治疗神经退行性疾病治疗奠定了基础。
1 材料与方法
1. 1 材料与仪器 HO-1 抗体(#SPA895)购自 Stressgen公司，
AS购自 Winherb Medical Technology Inc，免疫印迹化学发光试
剂(ECL)购自 Santa cruz公司，聚偏氟乙烯(PVDF)膜购自 Mill-
pore公司。Western印迹电泳仪(Bio-Ｒad 公司) ，酶标仪(Bio-
Ｒad公司) ，多用脱色摇床(上海新波无线电厂) ，超纯水净化仪
(Millipore公司) ，倒置相差显微镜(日本 Nikon公司)。
1. 2 Western印迹按照文献方法进行〔4，5〕 用冷磷酸盐缓冲液
(PBS)收集处理好的培养细胞，用 ＲIPA 裂解液匀浆提取蛋白
为总蛋白。10% + 二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶(SDS-
PAGE)凝胶电泳，将蛋白质从 SDS-PAGE 凝胶转移至 PVDF 膜
上，放入含 5%脱脂奶粉的盐酸缓冲液(TBS)中平衡 2 h;在膜
上滴加一抗，室温，翻转摇床上作用 2 h，然后移至 4℃冰箱中过
夜;TBST漂洗 3 次，15 min /次;在膜上滴加抗兔辣根过氧化物
酶-IgG二抗(1∶ 5 000) ，室温，翻转摇床上作用 1 h;TBST漂洗 3
次，15 min /次;ECL荧光显影液加膜上反应，暗室内正面朝下盖
于 X线胶片上，分别曝光，胶片显影，定影。结果用图像分析软
件(Quantity One)进行灰度值定量分析。以 β肌动蛋白作为内
参照，计算待测蛋白条带积分吸光度与 β 肌动蛋白的比值，表
示待测蛋白的相对表达水平。
1. 3 统计学方法 采用 GraphPad Prism 4. 0 software软件进行
t检验及单因素方差分析。
2 结 果
2. 1 AS在皮层和纹状体上调 HO-1 蛋白的表达 动物腹腔注
射 AS(25 mg /kg)6 h 后处死动物，提取大脑皮层和纹状体组
织，提取蛋白。免疫印记显示，AS可在大脑皮层和纹状体组织
诱导 HO-1 的表达。AS可以在神经系统内诱导 HO-1 的表达，
同时也表明 AS可通过血脑屏障进入大脑内。见图 1，图 2。
·914·王洪权等 类叶升麻苷在体内诱导血红素加氧酶-1 的表达 第 2 期
2. 2 AS在肝脏和肾脏诱导 HO-1 蛋白的表达 动物腹腔注射
AS(25 mg /kg)6 h后处死动物，提取肝脏和肾脏组织蛋白。免疫
印记显示，AS 同样也可在肝脏和肾脏组织诱导 HO-1 的表达。
这表明，AS也可在外周组织中上调 HO-1的表达。见图 3，图 4。
图 1 AS诱导大脑皮层 HO-1 表达
图 2 AS诱导纹状体 HO-1 表达
图 3 AS诱导肝脏 HO-1 表达
图 4 AS诱导肾脏 HO-1 表达
3 讨 论
HO-1 在体外培养细胞和体内均具有神经保护作用。各种
毒性刺激因素作用于神经或非神经脑细胞后，HO-1 的表达上
调，进而参与对氧化应激损伤的抑制作用。因此，筛选出能够
上调 HO-1 表达的天然抗氧化剂成为近年的研究热点。研究显
示 AS具有许多药理学活性，具有肝保护活性、抗凋亡活性和抗
氧化活性〔6 ～ 8〕。最近研究表明 AS 具有神经保护活性，其可以
抑制 1-甲基-4-苯基吡啶(MPP +)和谷氨酸诱导的神经损
伤〔9，10〕。另外，AS 也可抑制鱼藤酮致 SH-SY5Y 细胞损伤〔11〕，
并在 MPTP所致的帕金森病小鼠模型具有神经保护作用〔12〕。
AS可降低 tau蛋白的磷酸化而在冈田酸诱导的阿尔茨海默病
细胞模型中发挥其神经保护作用〔13〕。目前 AS 的保护作用机
制主要集中在其抗氧化〔14〕、抗凋亡活性〔7〕。其药理学活性机
制有待于进一步深入研究。本研究表明，AS 可以在神经系统
内诱导 HO-1 的表达，同时也表明 AS可通过血脑屏障进入大脑
内。而且 AS也可在外周组织中上调 HO-1 的表达。
综上所述，鉴定出 AS 为一个新的诱导 HO-1 表达的化合
物。本研究阐明了 AS的新的药理作用，为进一步探讨其神经
保护作用机制奠定了前期的基础。
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〔2013-09-15 修回〕
(编辑 袁左鸣)
·024· 中国老年学杂志 2015 年 1 月第 35 卷