全 文 ：neuronal apoptosis. Results　 HSP70 w as ove rex-
pressed in CGN coinfected w ith A dCMV /tTA and
AdTR5 /HSP70-GFP. HSP70 ove rexpression pro tec ted
CGN from apop to sis induced by low potassium. The
neuronal viab ility w as e levated from 45.5%±5.2% to
82.3%±5.2%(P <0.01), nuclear condensation /ag-
g regation w as reduced and a typ ica l apoptotic DNA lad-
de r almost disappeared. Conclusion　Adenov irus-me-
dia ted human inducib le HSP70 ove rexpression inhibits
apop to sis o f CGN induced by low potassium.
Key words: cerebe llar g ranule neurons; apoptosis;
adenov irus;HSP70
类叶升麻苷对MPTP所致帕金森病小鼠模型的神经保护作用
赵　磊 1, 3 ,蒲小平 1, 2
(1. 北京大学药学院分子与细胞药理学系;2. 北京大学天然药物和仿生药物
国家重点实验室 ,北京　100083;3. 河北工程大学医学院 ,河北 邯郸　056002)
中国图书分类号:R-332;R 284.1;R 322. 81;R 363-332;
R 745.705. 3;R 977.3;R 977. 6
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2007)01 - 0042 -05
摘要:目的　研究类叶升麻苷在 M PTP诱导的 C57小鼠的帕
金森病(PD)模型中的神经保护作用及机制。 方法　通过
自主活动实验和滚筒实验研究动物的行为表现 ,通过高效液
相电化学检测方法观察脑纹状体多巴胺的变化 ,通过脑黑质
酪氨酸羟化酶( ty roxine hydroxy lase, TH)免疫组化染色观察
多巴胺能神经元的损伤程度。并对黑质纹状体进行 α-突触
核蛋白(α-synuclein)的免疫印迹分析以探讨药物作用机制。
结果　①经 MPTP诱导的 C57小鼠 , 其自主活动次数 、滚筒
运动潜伏期均低于对照组(P <0.01);纹状体多巴胺含量明
显降低(P <0. 01);多巴胺能神经元数量明显减少;黑质纹
状体 α-synuc le in蛋白水平下降。 ②经类叶升麻苷(10、30 m g
kg- 1)预处理后能明显改善 M PTP诱导的 C57小鼠的行为
学表现 , 增加脑内多巴胺递质的含量 , 增加多巴胺能神经元
的数量 , 增加黑质纹状体 α-synuclein蛋白水平。结论　类叶
升麻苷具有神经保护作用 , 能对抗 MPTP诱导的 C57小鼠
PD模型中的神经损伤。其机制可能与上调 α-synucle in蛋白
水平有关。
关键词:类叶升麻苷;MPTP;PD模型;酪氨酸羟化酶;α-突触
核蛋白;神经保护
　　帕金森病 (Park insons d isease, PD)是一种常见
收稿日期:2006 - 08 - 01,修回日期:2006 - 10 - 13
基金项目:国家重点基础研究发展规划 (973规划)资助项目子课题
(No 2004CB518902);国家自然科学基金项目资助课题
(No 30472164)
作者简介:赵　磊(1965 -), 男 ,硕士生 ,讲师 , E-mai l:xn rzy@ sina.
com;
蒲小平(1956 -),女 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,通讯作者 ,
研究方向:帕金森病相关的分子机制及药物的干预作用 ,
Tel /Fax:010-82802431;E-m ai l:pxp123@ b jmu. edu. cn
的神经退行性疾病 ,其主要病理改变为黑质致密部
多巴胺能神经元的变性和坏死 ,导致神经递质多巴
胺的不足 ,最终造成 PD特有的运动功能障碍。由
于 PD的病因复杂 ,社会危害大 ,随着高龄化社会的
到来 ,寻找具有抗 PD功效的天然药物尤为重要 。
肉苁蓉(Herba Cistanches)为常用的传统补益中
药 ,具有补肾阳 、益精血 、润肠通便的功效 。其有效
成分为苯乙醇苷类化合物 (pheny le thanoid glyco-
sides, PhG s)。本实验室前期研究工作发现苯乙醇
总苷具有对抗 MPTP损伤 C57小鼠多巴胺能神经元
保护作用 [ 1] 。其总苷成分之一类叶升麻苷 (ac te-
oside)在其中的含量达 10%,在细胞水平上抗 PD细
胞凋亡的作用亦得到证实[ 2, 3] ,而其在整体动物水
平的抗 PD作用及对家族性 PD致病相关蛋白 α-sy-
nuclein的调节作用尚未见报道 。 α-synuc lein也叫
α-突触核蛋白 ,是近年来在 PD发病研究机制中得
到广泛关注的蛋白 ,它与遗传性 PD和散发性 PD都
有密切关系 , 已有的研究表明:α-synucle in可能是
PD发病的中心环节[ 4] 。观察在 MPTP损伤和药物
干预的情况下该蛋白的变化情况 ,将有助于揭示 PD
的发病机制和具有保护作用的药物的作用机制。因
此本实验进一步研究类叶升麻苷的神经保护作用及
其可能的机制 。为开发具有抗 PD作用的天然药物
提供初步实验依据 。
1　材料与方法
1. 1　动物　C57BL /6小鼠 , ♂,体重 20 ～ 25 g ,由
北京大学医学部实验动物中心提供 ,动物合格证号:
SCXK11 - 00 - 0004。
1. 2　药品　类叶升麻苷由北京大学药学院天然药
物学系屠鹏飞教授提供 ,相对分子量 624,易溶于
水 ,纯度达到 98%以上 。
42 中国药理学通报　ChinesePharmacologica lB ulletin　2007 Jan;23(1):42 ～ 6
1. 3　试剂 　1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶
(MPTP),为 S igma公司产品 。α-synucle in蛋白单克
隆抗体由北京宣武医院于顺教授提供 ,酪氨酸羟化
酶 ( ty rox ine hydroxy lase, TH )多克隆抗体为美国
Chem icon In te rnational公司产品 , H istostainTM-SP K its
为北京中山生物技术有限公司产品 , ECL试剂为北
京普利莱生物技术公司产品。
1. 4　仪器　XZ-4型小鼠自主活动仪 ,由中国医学
科学院药物研究所研制。 SD-2型小鼠滚筒仪 ,北京
大学医学部实验仪器厂生产。 ESA库仑电化学检测
器 5600A ,美国 Princeton Applied Research C orpora-
tion生产 , C18柱 ,迪马公司产品 。
1. 5　动物模型的建立及分组给药　60只小鼠随机
分 5组 ,每组 12只 ,分别为对照组 、模型组 、阳性药
金刚烷胺组 (40 mg kg -1)、以及类叶升麻苷给药
组 (10, 30mg kg -1)。连续灌胃给药 14 d,于第 11
天开始灌胃给药前 1 h腹腔注射 MPTP 30mg kg -1
(对照组给予等体积的生理盐水 ),连续 4 d ,最后 1
次给药后 1 d,进行行为学指标测试 , 4 d后脱颈处
死 ,分别取小鼠脑纹状体和黑质 ,于 - 80℃保存 ,用
于分别测定多巴胺含量以及免疫组化和 W estern
blot分析 。
1. 6　指标测定及方法
1. 6. 1　一般行为学观察　观察小鼠在腹腔给予
MPTP造模后的一般行为表现 ,有无异常反应 [ 5] ,比
较分析各组之间的差异。
1. 6. 2　自主活动实验　使用 XZ-4型小鼠自主活动
仪测定小鼠自发活动并记数 ,将小鼠放入自主活动
箱中(高:13 cm ,直径:25 cm ,每次同时测定 4只小
鼠 ,每个活动箱中 1只 )由记录仪自动记录小鼠活
动 ,测定每只小鼠 5 m in内的活动次数 [ 6] ,进行统计
学处理 。
1. 6. 3　滚筒实验　使用 SD-2型小鼠滚筒仪测试小
鼠的滚筒行为表现[ 7] 。测试前连续训练 3 d,每天 2
次 ,转速为 12 r m in-1 ,训练时间 120 s。将小鼠置
于滚筒仪的滚筒上 ,设置转速 35 r m in-1 ,测试小
鼠从滚筒开始旋转到离开滚筒的时间作为小鼠运动
潜伏期 ,测试时间为 120 s。每只小鼠测 3次取平均
值 。
1. 6. 4　高效液相 -电化学法 (HPLC-EC)分析　采
用 HPLC-EC测定纹状体内 DA的含量 。样品预处
理:将小鼠脱颈处死 ,取小鼠双侧纹状体置于冰浴
上 ,加入 100 μl溶液 A(0.4 mo l L -1 HC lO 4)冰浴
超声匀浆处理 , 4℃静置 1 h,注意避光保存 。然后离
心 15m in(15 000×g , 4℃),取上清加入 40 μl溶液
B(20mmol L- 1柠檬酸钠 , 300 mmo l L -1K 2HPO 4
和 2mmol L - 1 Na2EDTA),充分混匀后 4℃静置 1
h,条件同上。再离心 15m in(15 000×g , 4℃),得到
样品上清 , -80℃存放备用。
样品测定条件:施加电势:0 ～ 500 mV , 以 100
mV递增 。流动相:柠檬酸缓冲液 100mmol L - 1 ,
Na2EDTA 100mmol L- 1 ,八烷基硫酸钠 20 mmo l
L
-1 , 20%甲醇 。样品预处理液:0.4 mo l L - 1
HC lO 4 , 200 mmo l L - 1柠檬酸甲缓冲液 。 C18柱流
速:1 m l m in-1 ,温度 24℃ ±1℃。进样量:10 ～ 20
μl。多巴胺含量用 μg g -1湿组织重表示 。
1. 6. 5　免疫组化分析　将小鼠用戊巴比妥钠 (50
mg kg- 1 , ip)麻醉后 ,先用生理盐水灌注 ,再用 4%
的多聚甲醛缓冲液灌注 ,取出脑组织置于 4%多聚
甲醛缓冲液内 ,室温存放。对黑质进行石蜡切片
(厚 10μm),做 TH的免疫组化染色 。使用 TH多克
隆抗体以及 H istostainTM-SP K its试剂盒。 DAB显色
观察细胞的阳性反应。显微照相的放大倍数为 33
倍。
1. 6. 6　W estern blo t实验　样品预处理:将小鼠断
头处死 ,在冰浴的培养皿上迅速分离黑质和纹状体 ,
置于 Eppendo rf管内迅速称重 ,于 - 80℃冰箱存放。
加入匀浆缓冲液 (1 g:5 m l)冰浴制备匀浆 ,匀浆缓
冲液为 80 mmo l L -1 Tris-HC l缓冲液 (pH 7.4),
0.1 mmo l L -1 PM SF, 0.4 mmo l L -1 DTT, 0.1%
SDS(W /V), 2mmo l L- 1 Na2EDTA。将匀浆液离心
15m in(15 000×g , 4℃),收集上清 ,并使用 BCA试
剂盒测定蛋白浓度 ,以保证各电泳各上样总蛋白浓
度一致。得到的蛋白提取液经 12.5%SDS-PAGE变
性凝胶电泳后 ,以 250 mA恒流 1 h进行电转移 ,用
5%脱脂奶粉封闭 1 h。加入 α-synuclein的单克隆
抗体 (1 ∶1000稀释), 4℃孵育过夜。之后 ,加入辣
根酶标记二抗 37℃孵育 1 h。 ECL发光液曝光 , X
光片显影 、定影 。
1. 6. 7　统计学处理　所有数据均以 –x ±s表示。除
滚筒实验采用 Mann-Whitney U检验外 ,其余实验的
各组间比较采用单因素 ANOVA检验。
2　结果
2. 1　一般行为学　腹腔给予 MPTP(30 mg kg -1)
后 5 m in开始 ,与对照组相比 MPTP模型组小鼠的
一般行为表现异常 ,大多数出现下列变化:举尾 、竖
毛 、唾液分泌增多 、呼吸加快 、肌张力减退 、对外环境
刺激敏感以及牙颤等 ,其持续时间一般为 2 ～ 3 h。
而类叶升麻苷 (10、 30 mg kg- 1)和金刚烷胺 (40
mg kg- 1)组 ,其症状表现较轻 ,持续时间较短 。
43 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2007 Jan;23(1)
2. 2　自主活动实验　实验结果表明 MPTP模型组
与对照组相比活动次数明显减少(P <0.01),用 10、
30 mg kg -1类叶升麻苷预处理后 ,和 MPTP模型组
相比能明显增加其活动次数 (均为 P <0.01, F ig
1)。
2. 3　滚筒实验　实验结果表明 MPTP模型组与对
照组相比 ,运动潜伏期明显缩短 (P <0.01),用 10、
30 mg kg -1类叶升麻苷预处理后 ,和 MPTP模型组
相比能明显的增加滚筒运动潜伏期(均为 P <0.01,
Fig 2)。
2. 4　HPLC实验　实验结果表明 MPTP模型组与
对照组相比 , DA含量明显降低。给予 30 mg kg -1
类叶升麻苷预处理后 ,能够增加纹状体内 DA的含
量 (P <0.01, Fig 3)。
2. 5　免疫组化实验　TH的免疫组化染色结果如
Fig 4所示 ,对照组可见大量免疫染色阳性细胞 ,胞
质丰富 ,细胞轴突清晰 。模型组免疫染色阳性细胞
数明显减少 ,轴突断裂 ,用 30 mg kg-1类叶升麻苷
预处理后有改善作用 , TH阳性细胞数增加(Fig 4和
Tab 1)。
Tab 1　The number of imm unohistochem ical sta ining
of dopam inerg ic neurons w ith antibody for TH in
substantia n igra(–x±s, n=6)
T reatm ent Number of TH positive neu rons
C on trol 47±6. 0
M PTP 17±6. 4##
Acteoside (30m g kg- 1) +MPTP 31±3. 9**
　　##P<0. 01vs contro l, **P <0. 01 vsMPTP g roup
F ig 1　Spontaneousm ovem ent number o f
m ice in fivem inutes(–x±s, n=10)
1:C on trol;2:MPTP;3:Am an tad ine(40 m g kg- 1)+MPTP;4:
A cteoside (10 mg kg- 1) +M PTP;5:Acteoside (30 m g kg- 1) +
M PTP
##P<0. 01 vs con trol group;**P<0.01 vsMPTP group.
F ig 2　Latent period o fm ice on the rota ting rod(–x±s, n=10)
　　1:C on trol;2:MPTP;3:Am an tadine(40 m g kg- 1) +M PTP;
4:A cteoside (10 mg kg- 1) +MPTP;5:A cteoside (30m g kg- 1)
+MPTP
##P<0. 01 vs con trol group;**P <0. 01 vsMPTP g roup.
F ig 3　E ffects o f acteoside aga instMPTP-induced dep letion
of stria tal DA level(–x±s, n=6)
1:C on trol;2:MPTP;3:Am an tadine(40 mg kg- 1) +M PTP;
4:Acteosid e(10 mg kg- 1) +MPTP;5:Acteoside(30m g kg- 1) +
MPTP
##P<0. 01 vs con trol;*P <0. 05, **P <0. 01 vsMPTP group.
2. 6　W estern b lot实验　给予 MPTP后可看到黑
质和纹状体的 α-synucle in水平明显降低 ,而给予类
叶升麻苷后则可以增加 α-synuc le in水平 ,从而说明
类叶升麻苷能够对抗 MPTP诱导的多巴胺能神经元
α-synuc lein的降低 (Fig 5)。
3　讨论
肉苁蓉为补益中药研究的热点之一 ,除作为传
统的补肾壮阳中药外 ,更兼具有抗衰老 、增强记忆 、
提高免疫力等多种功能 ,近 20年来受到国内外的普
遍关注。类叶升麻苷是肉苁蓉提取物苯乙醇苷中的
单体成分 ,已有研究对类叶升麻苷在 PD动物模型
44 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2007 Jan;23(1)
F ig 4　 Imm unoh istochem ica l sta in ing of dopam inerg ic neurons w ith antibody for TH in substantia n igra(×33)
　　A. Control:a lot of dopam inergic neu rons cou ld be seen. B. M odel(MPTP 30m g kg - 1):on ly a few immunoreactive pos itive cells cou ld be seen.
C. Acteoside (30m g kg - 1) +M PTP:immunoreactive positive cellsw ere more than in jury m ode l sign ifican tly
F ig 5　W estern b lo t showedα-synuclein levels in the
striatum and sub stantia nig ra of each g roup
　　 1:C on trol;2:MPTP;3:A cteoside (10 m g kg- 1) +MPTP;4:
A cteoside (30 mg kg- 1) +MPTP
上抗细胞凋亡 ,抗氧化损伤等方面的作用进行了探
讨 [ 2, 3] ,本实验从整体动物水平进一步验证其神经
保护作用。MPTP对小鼠 、灵长类动物和人类多巴
胺能神经元具有选择性毒性 [ 8] ,是模拟环境因素导
致 PD模型的经典造模剂 ,因此本实验采用小鼠
MPTP损伤模型研究类叶升麻苷的神经保护作用 。
实验结果表明 , MPTP诱发小鼠出现帕金森病症状
的表现非常明显 ,在行为学方面 ,其肌肉震颤 ,随意
运动减少 ,运动协调能力下降可分别从一般行为学
表现 、自主活动实验 、滚筒实验中得到观察 。免疫组
化实验通过 TH阳性神经元的变化从形态学反映出
多巴胺能神经元的破坏。 TH是多巴胺合成代谢中
的限速酶 ,通过 TH抗体染色 ,可以明显观察到多巴
胺能神经元的变化 。HPLC-EC实验则从多巴胺神
经递质的含量变化 (直接反映多巴胺能神经元功能
的物质基础 )表明动物黑质 -纹状体多巴胺能神经
元功能的减弱 ,上述结果表明 PD小鼠模型的建立
是成功的。在此基础上 ,预先给予类叶升麻苷 ,并在
MPTP损伤过程中继续给药处理后的动物组 ,与模
型组比 ,其一般行为学表现显示中毒症状减轻 ,自主
活动能力增强 ,运动协调能力改善 ,多巴胺能神经元
数量增多 ,脑纹状体中多巴胺含量明显增加 ,表现出
对抗 MPTP损伤的作用。本研究参照细胞水平的实
验设计(用类叶升麻苷预处理细胞 ,对 PD细胞模型
具有保护作用 )[ 3] ,以预防性给药方式 ,在造模前和
造模中连续给药 ,实验结果反映了类叶升麻苷在整
体动物水平具有预防 PD的作用 。
已有研究表明 ,将小鼠 α-synuclein基因敲除后
可抵制 MPTP引起的神经毒性作用 [ 4] 。α-synucle in
在脑内的基因突变和异常代谢参与了 PD等神经系
统退行性疾病的发生 ,其在 PD等神经系统退行性
疾病发生过程中的作用机制已成为目前研究的焦
点[ 9 -12] 。
因此 ,本实验观察在 MPTP损伤的小鼠 ,其黑质
纹状体通路多巴胺能神经元 α-synuclein蛋白水平
如何变化 ,而类叶升麻苷对这种改变又会产生什么
影响 ,这既有利于探讨药物作用机制 ,又为 PD病因
的研究提供参考。本文采用亚急性给予 MPTP造
模 ,Weste rn blo t结果显示黑质纹状体 α-synuclein蛋
白水平降低 ,免疫组化实验表明黑质 α-synuclein蛋
白和 TH蛋白免疫反应阳性细胞数减少(α-synucle in
的免疫组化结果未提供 ),显示这二者在蛋白质水
平均呈下降趋势 ,与 Xu等 [ 13]的结果相似。而预先
给予类叶升麻苷后则可对抗这种改变。提示一种可
能的机制是类叶升麻苷具有对抗 MPTP的细胞保护
作用 ,从而减轻了 MPTP对细胞的氧自由基损伤 ,本
室已有研究发现类叶升麻苷可明显抑制鱼藤酮诱导
的自由基生成 [ 3] 。另外 ,类叶升麻苷的神经保护作
用还可能与上调 α-synuclein蛋白水平有关 ,其详细
的作用机制有待进一步探讨 。
参考文献:
[ 1] 　Geng X C, Song L W , Pu X P, et a.l Neuroprotective effects of
phenylethanoid g lycos ides from cis tan ches salsa against 1-m ethy l-4-
phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahyd ropyrid ine(M PTP)-indu ced dopam inergic
45 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2007 Jan;23(1)
toxicity in C 57m ice[ J] . B iol Pharm B u ll, 2004, 27(6):797 -
801.
[ 2] 　Sh eng G Q, Zhang J R, Pu X P, et a.l P rotection effect of verbas-
cosideon 1-m ethy-4-pheny l-pyridinium ion-induced neu rotox icity in
PC12 cells[ J] . E ur J Pharm acol, 2002, 451(2):119 - 24.
[ 3] 　杨芳艳 ,蒲小平. 类叶升麻苷对鱼藤酮致 SH-SY5Y细胞凋亡
的保护作用 [ J] .中国药理学通报 , 2006, 22(2):159 - 64.
[ 3] 　Yang F Y , Pu X P. P rotective effect of acteos ide on rotenon e-in-
duced apoptos is in SH-SY5Y ce lls [ J] . Ch in Pharm acol B u ll,
2006, 22(2):159 - 64.
[ 4] 　DauerW , Kho lod ilov N , V ilaM , et a.l Resistance of alph a-synu-
clein nu llm ice to the park insonian neuro toxinMPTP [ J] . Proc Nat l
Acad S ciUSA, 2002, 99:14524 - 9.
[ 5] 　L inder J C, K lem fu ssH , G roves P M. Acu te u ltrastructu ral and
behavioral effects of 1-m ethyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropy ri-
d ine (MPTP) inm ice[ J] . Neurosci Lett, 1987, 82:221 - 6.
[ 6] 　S edelisM , Schw art ing R , H uston J P. Behav ioral phenotyp ing of
th eMPTP m ou se m odel of park insons disease[ J] . B ehaviourB ra in
R es, 2001, 125:109 - 22.
[ 7] 　RozasG , López-M artín E, Guerra M J, et a.l Th e overal l rod per-
form an ce test in th e MPTP-treated-m ouse m odel of Parkinson ism
[ J] . Neu rosciM ethods, 1998, 83:165 - 75.
[ 8] 　Hung H C, Lee E H. The m esolim b ic dopam inergic p athw ay is
m ore resistan t th an the n igrostriatal dopam inergic pathw ay toM PTP
andM PP+ toxici ty:role of BDNF gene expression[ J] . B ra in R es
Mo lB ra in R es, 1996, 41(1 - 2):14 - 26.
[ 9] 　B ennettM C. The role ofα-synu clein in neu rodegenerative d isea-
ses[ J] . Pharm acol Ther, 2005, 105(3):311 -31.
[ 10] 戚　辰 ,刘振国. 帕金森病发病机制研究进展:α-synu clein与
氧化应激 [ J] .中国神经科学杂志 , 2004, 20(4):327 - 31.
[ 10] Q iC, Liu Z G. Recen t advances in the pathogenesis of park inson
d isease:α-synuclein and oxidative st ress[ J] . Ch in J Neurosci,
2004, 20(4):327 - 31.
[ 11] H ashimotoM , H su L J , X ia Y , et a.l O xidative stress indu ces
am ylo id-like aggregate form ation ofNACP / alpha-synuclein in vitro
[ J] . Neuroreport, 1999, 10:717 - 21.
[ 12] 罗海芸.自由基在神经毒素 MPTP致帕金森病中的作用机制
[ J] .昆明医学院学报 , 2003, ( 4):18 -21.
[ 12] Luo H Y. M echanism s of free radica l cau ses park in son disease a-
mong the neurotoxic M PTP [ J] . Acad J Kunm ing M ed Colleg e,
2003, ( 4):18 - 21.
[ 13] Xu Z, C aw thon D, M cC astlain K A, et a.l S elective alterations of
gene exp ress ion inm ice indu ced byM PTP[ J] . Synapse, 2005, 55:
45 -51.
Neuroprotective effect of acteoside againstMPTP-induced
mouse model of Parkinsons d isease
ZHAO Le i
1, 3 , PU X iao-ping1, 2
(1. D ept ofM olecular and Cellular Pharmacology, Pek ing University School of Pharm aceutica l Sciences;
2. StateKey Laboratory of Natural and B iom im eticD rugs, Pek ing Un iversity, B eijing　100083, Ch ina;
3. Hebei Engineering University School ofM ed icine, Handan Hebei　056002, China)
Abstract:Ami 　To study the neu ropro tective effect of
A cteo side againstMPTP-induced mouse mode l of Par-
k insons disease (PD) and its mechan ism. M ethods　
The behav ioral testing o f C57 m ice w as assessed using
spon taneous movement and ro tarod tes.t DA leve ls in
striatum we re measured using HPLC-EC. Dopam ine r-
gic neu rons in the substantia n ig ra w ere observed by
immunohistochem ical staining w ith an anti-Ty roxine
hydroxy lase (TH) antibody. M oreover, themechanism
of the neuroprotective effect o f acteoside was investiga-
ted usingWestern blo t analysisw ith an anti-α-synucle-
in antibody in the substan tia n ig ra and striatum. Re-
sults　① Compared w ith con trol, MPTP lesion signifi-
cantly reduced the number o f spontaneous movement
and laten t period ofm ice on the ro tating rod (bo thP <
0.01 and DA leve ls in the striatum (P <0.01 ). A lso
there we re less TH-immunoreactive signals in the sub-
stantia nigra, and α-synuc le in leve ls in the substantia
nig ra and striatum were marked ly decreased inM PTP-
lesioned C57 m ice. ② Compa red w ith MPTP mode l
g roup, the number of spon taneousmovemen t and laten t
pe riod ofm ice on the ro tating rod w ere significantly in-
creased (bo th P <0.01) and DA leve ls in striatum
raised (P <0.05 and P <0.01 respective ly) in ac te-
oside-pretreated g roups. M oreove r, there w ere more
TH-positive signals in the substantia nigra, and α-sy-
nuclein leve ls in the substantia nigra and stria tum were
sign ificantly inc reased inMPTP-lesioned C57m ice pre-
trea ted w ith acteoside (30 mg kg- 1). Conclusions
　A cteo side may be able to pro tect C57 m ice against
M PTP-induced neurona l damage. The neu ropro tective
e ffec tm ight be associa ted w ith the up-regula tion ofα-
synuc le in leve.l
Key words: ac teoside;MPTP;PD model; tyrox ine
hydroxy lase;α-synuclein;neuroprotection
46 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2007 Jan;23(1)