全 文 ：食品研究与开发 2006.Vol.27.NO.7
作者简介:凌育赵(1967-),男,实验师,主要从事实验教学及应用化
学研究工作。
咖啡碱、可可碱和茶碱是同时存在于茶叶中的嘌
呤类生物碱,它们都具有兴奋中枢神经、利尿强心、降
低血糖和血压的作用。其中咖啡碱的兴奋中枢神经作
用最强,可可碱的作用最小,几乎没有兴奋作用。饮用
富含可可碱的茶既能达到预期的治疗效果,又可避免
兴奋成分引起的失眠。因此不同生物碱成分结构的茶
叶有不同的保健及治疗效果[1,2]。
广东南昆山地处亚热带,气候温和,雨量充沛,对
南昆山茶叶的品味起着重要作用。根据人们长期饮用
这种白毛茶的功效分析,这种茶叶成分特殊,可能含有
较高的可可碱。为了进一步明确其特殊性,采用一种高
效、灵敏、简便的方法来测定白毛茶中可可碱的含量有
着重要的意义。目前测定嘌呤生物碱的方法有 HPLC
法[3]、电泳-扫描法[4]和微分脉冲伏安法[5]等,但大都以
普通茶叶为研究对象。本文以南昆山白毛茶为研究对
象,采用高效液相色谱法分析其主要嘌呤碱的成分结
构,在反复实验的基础上,筛选了最佳的色谱条件,成
功分离和测定了白毛茶中的3种嘌呤碱,取得了满意
结果。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
仪器:BEIFENSY5000型高效液相色谱仪 (北京分
析仪器厂);SB3200型超声波脱气装置 (上海必能信超
声有限公司);UV-754紫外分光光度仪(上海分析仪器
厂);SpherisorbC18柱(5μm,150mm×4.6mm内径)。
试剂:咖啡碱和可可碱 (上海试剂二厂生产);茶碱
(Sigma公司生产);甲醇(色谱纯);二氯甲烷;碱式醋酸铅;
硫酸。以上试剂均为分析纯,实验用水为二次重蒸水。
HPLC法测定广东南昆山白毛茶中的嘌呤碱
凌育赵 1,曾满枝 2
(1.仲恺农业技术学院化学化工系,广东 广州510225;2.华南农业大学理学院应用化学系,广东 广州510642)
摘 要:采用高效液相色谱法分析南昆山白毛茶嘌呤类生物碱成分。以市售 5个普通茶叶为对照样,在 Spherisorb
C18柱上,甲醇-水(10∶90)为流动相,柱温40℃,检测波长230nm,在12min内可全部出峰。检出限为pg/L级,回收率
98.24%～108.42%。结果表明,南昆山白毛茶的HPLC图谱具有特殊性,其生物碱成分结构异于普通茶叶,含有丰富
的可可碱,高达3.13%～4.76%,比普通对照样高出11.8倍～15.3倍。
关健词:高效液相色谱法;嘌呤碱;南昆山白毛茶
DETERMINATIONOFPURINEBASESINBAIMAOTEAFROMGUANGDONGNANKUN
MOUNTAINBYHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY(HPLC)
LINGYu-zhao1,ZENGMan-zhi2
(1.DepartmentofChemistryandChemicalEngineering,ZhongkaiAgrotechnicalColege,Guangzhou510225,Guangdong,
China;2.DepartmentofAppliedChemistry,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,Guangdong,China)
Abstract:AnalysecompositionofpurinetypeAlkaloidinBaimaoTeafromNankunmountainbyusingHPLC.
Withfivesortsofcommonteafrommarketascomparison,determinationoftheseanalysecanbeaccomplished
within12minbyusingSpherisorbC18columnat40℃,methanol-H2O(10:90)asthemobilephase,folowedwith
DADdetectionat230nm.Thedetectionlimitisofpg/Lleveland98.24%～108.42%recoverieswereobtained.
Showresult:HPLCChromatographyofNankunmountainBaimaoteahaveparticularity,itsalkaloidkindand
contentstructuralaremorediferentthanordinarytea,itcontainsplentyoftheheobromine,contentrange3.13%
～4.76%,itis11.8～15.3timeshigherthanCK.
Keywords:HPLC;purinebases;NankunmountainBaimaotea
检测分析
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食品研究与开发2006.Vol.27.NO.7
图1 标准色谱图
1.可可碱;2.茶碱;3.咖啡碱
表1 三种嘌呤碱线性关系和检出限
检测限
(S/N=3μg/L)
可可碱 2～15 A=0.0728C+0.0001 0.9999 4.4
茶碱 2～15 A=0.0588C+0.0068 0.9999 4.2
咖啡碱 2～15 A=0.0580C+0.0150 0.9997 5.4
图3英德叶尖茶生物碱色谱图
图2南昆山白毛茶A生物碱色谱图
峰
号
同
图
1
组分
线性范围
(mg/L)
回归方程 相关系数r
检测分析
材料样品:南昆山白毛茶A(2002年购)、B(2004年
购);对照样为福建武夷山乌龙茶、英德毛尖茶、中国荔
枝红茶、饶平岭头白叶单丛、龙门绿茶。以上茶样均为
市售品。
1.2 色谱条件
SpherisorbC18色谱柱(5μm,150mm×4.6mm内径);
流动相为甲醇∶水=10∶90;流速 0.3mL/min,柱温 40℃,
压力 16MPa～20MPa,进样量 20μL;紫外检测器检测
波长230nm。
1.3 实验方法
准确称取1.00g待测茶样,加沸水 50mL,在水浴
上浸提 30min,过滤,在滤液中边搅拌边滴加入 5mL
饱和碱式醋酸铅溶液至不产生沉淀;离心,倾出清液。
往清液中滴约 0.2mL9mol/L硫酸至不产生沉淀,过
滤,用少量蒸馏水洗涤沉淀,合并滤液和洗涤液。所得
合并液用二氯甲烷萃取5次,用量分别为 30、20、20、
20、10mL,合并萃取液,回收二氯甲烷,残余物用甲醇-
水(3∶7体积分数)溶解并定容至 25mL,再用 0.45μm
的滤膜过滤,滤液用于直接进样分析。
2 结果与讨论
2.1 色谱条件的选择
波长 在 200nm～280nm波长范围内选择不同波
长进行分析测试,发现在230nm处3种物质的检测灵
敏度最高,因此选择230nm为最佳检测波长。
柱温 柱温对样品测定有很大影响。温度低时,出
峰时间长,而且峰严重拖尾;温度太高,则出峰太快,待
测峰有部分重叠。实验发现,恒定柱温为40℃时,待测
峰的重现性和保留时间都比较理想。
流动相 分别用甲醇、乙腈和水以及不同比例的甲
醇与水作为流动相,进行分离检测实验,结果发现甲醇-
水(10∶90)为流动相时,3种待测物的分离效果最好。
3种生物碱标准色谱图见图1,色谱条件见1.2项。
由图1可见,3种嘌呤碱化合物可在12min内分离。
2.2 标准曲线
准确称取3种嘌呤碱对照品各50mg,加入甲醇-
水(3∶7体积分数)溶解并定容至 200mL,吸取对照品
溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL于 50mL的容量瓶,
加入甲醇-水(3∶7体积分数)至刻度,摇匀,按上述色谱
条件,进样 20μL,测出各色谱峰的面积,以峰面积积
分值对对照品进样质量浓度进行回归分析,得到 3条
通过原点的直线,其线性范围和求得的回归方程[其
中 A为峰面积(×104μV·s),C为质量浓度(mg/L)]以及
检测限见表 1。结果表明,线性相关系数为 0.997～
0.999,嘌呤碱质量浓度在 2mg～15mg/L范围内,峰面
积与质量浓度呈良好的线性关系。
2.3 样品测定
按1.3项方法处理后,吸取滤液20μL进行HPLC
分析,用外标法测定咖啡碱、可可碱和茶碱,测定结果
见表2。图2为南昆山白毛茶A生物碱色谱图,图3为
英德叶尖茶生物碱色谱图(普通对照样生物碱色谱代
表图)。
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表3 回收率测定结果
样品
名称 1 2 3 4 5
可可碱含量
(μg/mL)
加入量
(μg/mL)
测定量(μg/mL) 平均回
收率(%)
相对标准
偏差(%)
白毛茶A 10.70 10.00 12.36 12.40 12.38 12.36 12.30 98.67 0.47
5.00 12.29 12.35 12.38 12.35 12.26 108.42 4.28
白毛茶B 8.60 10.00 10.98 11.02 10.89 10.93 11.01 99.56 1.07
5.00 9.35 9.80 9.82 9.43 9.58 98.24 2.58
表2 茶叶样品中生物碱含量测定结果
4次测定结果(%) 相对标准偏差(%)
咖啡碱% 可可碱% 茶碱% 咖啡碱% 可可碱% 茶碱%
样品名称
白毛茶A 0.37 4.76 0.95 6.17 0.72 4.50
白毛茶B 0.58 3.13 0.86 4.21 0.52 4.12
福建乌龙茶 2.68 0.24 1.04 1.21 3.28 2.33
英德叶尖茶 1.92 0.19 1.06 3.36 7.12 2.50
荔枝红茶 1.13 0.35 0.22 2.36 6.44 3.37
白叶单丛 2.66 0.27 0.43 0.67 3.76 6.77
龙门绿茶 3.73 0.32 0.38 5.26 4.65 2.50
由图2、3可见,各茶样嘌呤碱能得到较好分离。南
昆山白毛茶含丰富的可可碱,高达3.13%～4.76%,比
对照样高出11.8倍～15.3倍。而对照样中可可碱含量
极少,主要为咖啡喊。
2.6 回收试验
准确称取南昆山白毛茶A,B各1g,分别加入对
照品可可碱10.0mg;另同样准确称取上述茶样各1g,
分别加入对照品可可碱5.0mg,按 1.3项操作,制得待
测液。稀释10倍后,取2μL进样分析,分别测定白毛
茶样品中可可碱的回收率,结果见表3。标准加入回收
率为98.24%～108.42%。
3 讨论
3.1 试验结果表明,广东南昆山白毛茶确具特殊性,
含可可碱的量达 3.13%～4.76%,比普通对照样高出
11.8倍～15.3倍,这决定了它特殊的药理功能。而普通
茶样可可碱含量在 0.1%～0.5%之间,与文献值一致。
3.2 茶叶中除含有嘌呤碱外,还含有多酚类物质(儿
茶素、没食子酸)和色素[2]。在样品处理时加入碱式
醋酸铅和用二氯甲烷萃取的方法除去多酚类等大
量杂质。
3.3 本实验旨在明确南昆山白毛茶中生物碱成分及
其含量的特殊性。至于不同茶样中可可碱含量不同,这
与采茶部位、季节、制作方法等条件有关,有待于进一
步探讨。
参考文献:
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[5] 湛英武.茶叶中可可碱的微分脉冲伏安法测定 [J].中国茶叶,
1989,6:32~33.
收稿日期:2006-01-05
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