全 文 ：分光光度法测定雪灵芝中总皂甙含量
彭光华
(西藏自治区质量技术监督局 ,西藏　拉萨　850008)
许倩兮　朱影
(华中农业大学食品科学技术学院 ,湖北　武汉　430070)
摘　要:采用分光光度法测定雪灵芝中总皂甙含量。通过比较确定显色条件为:5%香草醛 -冰乙酸
0.2mL,高氯酸 0.8mL, 70℃水浴加热 15min,检测波长 550nm。以人参皂甙 Rb1为对照品 ,绘制标准曲
线 ,回归方程 A=0.0094C-0.0035(R2 =0.9976),对照品在 0-167.8μg范围内线性良好 。平均加标
回收率为为 102.71%, RSD为 1.03%。该方法简便准确 ,重复性好 ,可用于雪灵芝总皂甙含量的测定 。
关键词:雪灵芝　总皂甙　分光光度法
中图分类号:Q94— 3
　　雪灵芝 (ArenariakansuensisMaxim), 属石竹科
(Caryophylaceae),蚤缀属植物 ,学名卵瓣蚤缀(Arene-
riakensuensisvarovatipetalatsui),藏语叫 “阿仲尕得 ”,为
多年生垫状草本 ,分布于昆仑山 、巴颜喀拉山及祁连
山 、大坂山 ,是多种藏成药的主要原料之一 。近代医学
研究表明 ,雪灵芝具有广泛的药理活性并含有多种生
物活性的化合物 ,如皂甙 、多糖 、黄酮等 。本文通过优
化显色条件 ,用分光光度法测定雪灵芝中的总皂甙含
量 ,旨在为雪灵芝产业的进一步开发和综合利用提供
理论依据和科学参考 。
1　材料与试剂
1.1　实验材料
雪灵芝由西藏自治区质量技术监督局提供 。去除
根部杂质后 ,常压烘干 ,粉碎后过 60目筛 ,用石油醚按
料液比 1∶10脱脂 2次 ,挥干溶剂备用 。
香草醛 ,高氯酸 ,冰乙酸等试剂均为分析纯;人参
皂甙 Rb1对照品购于中国药品生物制品检定所 。
1.2　主要仪器
AL204电子天平(梅特勒 -托利多仪器上海有限
公司);723型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公
司);UV-1700紫外可见分光光度计(日本 Shimadzu
公司);HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)。
2　实验方法
2.1　提取物的制备
称取适量脱脂后的雪灵芝粉末 ,置 250mL圆底烧
瓶中 ,加入 30倍量 75%乙醇溶液于 75℃恒温水浴锅
中水浴回流 4小时 ,将所得滤液减压浓缩成干浸膏 ,并
用等体积正丁醇萃取三次 ,合并萃取液并减压浓缩 ,以
无水乙醇定容后备用 。
2.2　标准曲线的绘制
精确称取人参皂甙 Rb1对照品 1.08mg,加无水乙
醇溶解后定容到 100mL,质量浓度为 0.108mg/mL。
精密吸取对照品溶液 0.2mL、 0.6mL、1.0mL、1.4mL、
1.8mL、2.2mL、2.6mL,分别置于具塞比色管中 ,加热
挥去溶剂 ,加入新配制的 5%香草醛 -冰乙酸溶液(w/
v)0.2mL作为显色剂 ,再加入高氯酸 1.0mL,于 70℃
恒温水浴中加热 15min,冰浴冷却 ,加入冰乙酸 5mL,
摇匀后在 550nm处测定吸光度 。以试剂空白为参比
液 ,绘制标准曲线 。通过线性回归计算 ,得到的回归方
程为 A=0.0094C-0.0035(R2 =0.9976),结果表明
人参皂甙 Rb1对照品在 0 ～ 167.8μg范围内呈良好
线性。
3　结果与讨论
3.1　体系最佳检测波长选择
将对照品溶液加显色剂后 ,在紫外可见分光光度
计上扫描 ,得吸收光谱图 ,结果见图 1。从图中可见 ,
人参皂甙 Rb1显色溶液在 550nm处有一最大吸收峰 ,
故确定 550nm为体系的测定波长。
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《西藏科技 》2009年 3期(总第 192期)　　　　　　　　　　　　　　　　　动植物研究
图 1　人参皂甙 Rb1对照品显色溶液的吸收光谱
3.2　显色剂用量的选择
选用 5%香草醛 -冰乙酸溶液作为显色剂。精密
移取样品溶液 0.8mL,水浴挥干溶剂 ,改变显色剂用
量 ,分别加入高氯酸 1.0mL后 70℃水浴 15分钟 ,冰浴
冷却后加入冰乙酸 5mL,以试剂空白为参比 ,在 550nm
处测定吸光度 ,结果见图 2。由图可知 ,显色剂用量为
0.2mL时 ,吸光度较大 ,而继续增加显色剂对吸光度影
响不大 。因此 ,选择显色剂 5%香草醛 -冰乙酸用量
为 0.2mL。
图 2　显色剂用量对样品吸光度的影响
3.3　酸体系的选择和用量
常用的体系有香草醛 -高氯酸体系和香草醛 -硫
酸体系。采用 2.2方法 , 仅改变酸的种类 ,以水为参
比 ,试剂空白 1为使用高氯酸体系的空白 ,试剂空白 2
为使用硫酸体系的空白 ,每隔一定时间测定吸光度 ,结
果见表 1。
从显色结果看 ,硫酸体系显色较深 ,但放置时间越
久 ,吸光度越大。从试剂空白值来看 ,也是硫酸体系的
高 ,考虑香草醛 -冰乙酸是无色溶液 ,高氯酸也是无色
液体 ,故本实验选择高氯酸体系。精密移取样品溶液
0.8mL,水浴挥干溶剂 ,分别加入 0.2mL, 5%香草醛 -
冰乙酸 ,加入不同体积的高氯酸 , 70℃水浴 15分钟 ,冰
浴冷却后加入冰乙酸 5mL,以试剂空白为参比 , 在
550nm处测定吸光度 ,结果见图 3。由结果可知 ,当高
氯酸用量在 0.8mL时 ,吸光度较大 ,继续增大高氯酸
用量对吸光度影响不大 ,故选择高氯酸用量为 0.8mL。
表 1 酸体系的选择
ABSTime
(min)
Reagent
blank1
Perchloric
acid
Reagent
blank2
Sulfuric
acid
0 0.070 1.114 0.063 1.125
10 0.056 1.085 0.056 1.085
20 0.085 1.101 0.078 1.124
30 0.081 1.059 0.121 1.084
40 0.089 1.055 0.124 1.137
50 0.102 1.062 0.136 1.105
60 0.125 1.040 0.162 1.237
图 3　高氯酸用量对样品吸光度的影响
3.4　加热温度的选择
精密移取样品溶液 0.8mL,水浴挥干溶剂后 ,分别
加入 5%香草醛 -冰乙酸 0.2mL, 0.8mL高氯酸 ,分别
以不同温度水浴加热 15min,冰浴冷却后加入冰乙酸
5mL,以试剂空白为参比 ,在 550nm处测定吸光度 ,结
果见图 4。
图 4　加热温度对样品吸光度的影响
由图 4可知 ,随温度升高 ,体系吸光度增加 , 70℃
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动植物研究　　　　　　　　　　　　　　　　　《西藏科技 》2009年 3期(总第 192期)
时吸光值较大 ,随后温度的升高对吸光值变化影响不
明显 ,但当水浴温度超过 80℃时 ,空白液开始变色 ,因
此选择水浴温度为 70℃。
3.5　显色稳定性试验
精密吸取样品溶液 0.8mL共 5份 ,置于 10mL具
塞磨口比色管中 ,按 2.2方法操作 ,每隔一定时间分别
测定溶液的吸光度值 ,计算相对标准偏差 RSD%并绘
制该 5份显色溶液的 ABS-t曲线和 RSD%-t曲线 ,
结果见图 5、6所示 。
由图 5可知 ,显色 15分钟后体系开始稳定 ,此后
40分钟内基本无变化 ,但 4小时后其吸光度平均降低
12.51%.因此选择显色 15分钟后立即测定其吸光
度 ,所得结果的相对标准偏差最小。
3.6　加标回收率试验
精密吸取已测总皂甙含量的雪灵芝皂甙溶液 5
份 ,分别加入不同量的人参皂甙 Rb1对照品溶液适
量 ,按照 2.2的方法操作 ,测定吸光值 ,计算加标回收
率 ,结果见表 2。样品平均加标回收率为 102.71%,
RSD为 1.03%,表明此法测定的结果准确可靠 。
表 2 加标回收率试验结果
序号 样品平均含量(μg)
加标量
(μg)
测得量
(μg)
计算值
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 77.48 21.60 99.78 22.30 103.24
2 77.48 32.40 111.62 34.14 105.37
3 77.48 43.20 121.38 43.90 101.62 102.71 1.03
4 77.48 54.00 131.29 53.81 99.65
5 77.48 64.80 144.67 67.19 103.69
图 5　雪灵芝皂甙显色溶液稳定性
图 6　RSD%与时间关系曲线
4　结论
采用紫外—可见分光光度法测定雪灵芝总皂甙含
量 。以人参皂甙 Rb1为对照品 ,确定的最佳条件为:
依次加入 0.2mL, 5%香草醛 -冰乙酸(w/v)、 0.8mL
高氯酸 , 70℃水浴 15分钟 ,冰浴冷却后在 550nm处测
定雪灵芝中总皂甙含量 。所得标准曲线在 0 ～
167.8μg/L线性关系良好 , 平均回收率为 102.71%
(RSD=1.03%),表明该法结果稳定 ,重现性好 ,且操
作简便快捷 ,为进一步开发和利用雪灵芝中皂甙类物
质提供了定量依据。
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编校　白玛普赤
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