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(收稿日期:2007—08—17;修回日期:2007—08—17)
藏药蕨麻高效液相色谱指纹图谱研究
侯陆星1 , 2 , 蔡光明1＊ , 张雅铭1 , 黄媛3 , 张卓勇2 (1.解放军第 302医院全军中药研究所 , 北京　100039;2.首
都师范大学化学系 , 北京 100037;3.沈阳药科大学 , 沈阳　110016)
摘要:目的　建立蕨麻药材 H PLC 指纹图谱分析方法。方法　采用 Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm , 5 μm)色谱
柱 , 以乙腈-水梯度洗脱 , 流速:1.0 mL ·min -1 , 检测波长:208 nm , 柱温:30 ℃。结果　共有 9个共有峰。共有
峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD均<3%, 符合指纹图谱相关要求。结论　此方法准确 、 可靠。该指纹图谱能
够用于蕨麻药材的鉴定及质量评价。
关键词:蕨麻;高效液相色谱法;指纹图谱
中图分类号:R284.O23　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2007)06-0555-04
HPLC Fingerprint of Potentilla anserine anserina
HOU Lu-xing 1 , 2 , CAI Guang-ming1＊ , ZHANG Ya-ming1 , HUANG Yuan3 , ZH ANG Zhuo-yong2 (1.Instituteo f Chi-
nese Materia Medica , No.302 Hospital of the P LA , Beijing 100039;2.Department o f Chemistry , Capital Normal U-
niversity , Beijing 100037;3.Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016)
Abstract:Objective　To establish the method of fingerprint analysis of Potentilla anserina by HPLC.Methods　Kromasil C18
(4.6 mm ×250 mm , 5μm) column was used.The mobile phase was composed of acetonitrile and w ater with a linear gradi-
ent elution.The flow rate was 1.0 mL·min-1 with DAD detected at 208 nm..The column temperature was 30 ℃.Results
　Nine peaks were gained on the HPLC fingerprint.The RSDs of relative retention time and area of common peaks which exis-
ted in all samples w ere less than 3%.The results were in accordance w ith the request of fingerprinting.Conclusion　This
　　基金项目:“十五” 国家科技攻关计划 “西部开发科技行动” 重大项目 , No.2004BA901A250。
作者简介:侯陆星 , 硕士 , 主要从事中药制剂及分析研究 , Tel:(010) 66933324 , E-mail:houlu xing810620@163.com。 　　＊通讯作
者:蔡光明 , 男 , 研究员 , 硕士生导师 , 主要从事中药制剂及分析研究 , Tel:(010) 66933323 , E-mai l:cgm1004@vip.sina.com。
555
中南药学 2007年 12月第 5卷第 6期　Cent ral S ou th Pharmacy.December 2007 , Vol.5 No.6
method is accurate and reliable.The fingerprint can be used for the identification and quality contro l of Potentilla anserina.
Key words:Po tentilla anserina;H PLC;fingerpr int
　　藏药蕨麻为蔷薇科植物鹅绒委陵菜 (Potentilla anseri-
na L.)的块根 , 主产于青海及甘肃甘南等地区 , 其在民间
被作为营养进补药和抗肿瘤用药广泛应用。近年来研究结果
表明 , 蕨麻具有抑制乙肝病毒 、 保肝降酶 、 提高免疫力 、 增
强肝脏解毒和代谢等作用 , 其有效成分为皂苷类成分[ 1-7] 。
目前 , 蕨麻素 (蕨麻总皂苷类成分 , 简称 JMS)已按新药中
药制剂———蕨麻总苷片开发并获得 SFDA 批准进入抗肝炎
新药Ⅱ期临床试验。为更好的控制和保证产品质量的稳定
性 , 作者采用 H PLC 法对不同产地的蕨麻药材进行了指纹
图谱测定和相似度计算。这一研究将有助于蕨麻药材以及提
取物和制剂的质量控制。
1　仪器和试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪 (配有二极管阵列检测器 ,
美国惠普公司)。对照品:蕨麻苷 (JMG)、 蕨麻苷Ⅰ(JMGⅠ)
(均由解放军 302 医院全军中药研究所制备 , 纯度>98%)。
乙腈和甲醇均为色谱纯 , 水为纯净水。蕨麻样品共 10 批, 经
解放军 302医院中药研究所肖小河研究员鉴定为蔷薇科植物
鹅绒委陵菜 (Potentilla anserina L.)的块根 , 见表 1。
表 1　蕨麻样品来源
Tab 1　Sources of Potentilla anserina sample
样品号
(No.)
样品来源
(sam ple sou rces)
样品号
(No.)
样品来源
(sample sources)
1 青海贵德 6 青海海北
2 青海海南 7 甘肃永登
3 甘肃天祝 8 青海果洛
4 青海玉树 9 青海湟中
5 甘肃皋兰 10 青海黄南
2　方法和结果
2.1　色谱条件
Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm , 5 μm)色谱柱 , 水
(A)-乙腈 (B)为流动相 , 采用线性梯度洗脱程序:0 ～ 30
min (20%～ 40%B), 30～ 40 min (40%～ 55%B), 40 ～ 60
min (55%～ 80%B), 流速:1.0 mL · min-1 , 柱温:30
℃, 检测波长:208 nm。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取 JMG、 JMGⅠ对照品适量 , 加甲醇分别制成每
mL 含 JMG 320 μg 、 JMGⅠ 200 μg 的溶液 , 用 0.45μm 的微
孔滤膜滤过 , 备用。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取蕨麻药材粗粉 2.0 g , 置于具塞三角瓶中 , 加
70%乙醇 50 mL , 浸泡 12 h , 超声提取 1.0 h , 回收 70%乙醇
蒸干 , 用适量 30%乙醇溶解 , 通过 D101 大孔树脂柱 (湿重
约 15 g 树脂), 以水洗至无色澄清 (约 150 mL), 再以 70%
乙醇洗脱至无色澄清 (约 150 mL), 收集洗脱液蒸干 , 以甲
醇溶解定容至 10 mL , 用 0.45 μm 的微孔滤膜滤过 , 备用。
2.4　方法学考察
2.4.1　空白试验　吸取甲醇空白溶液 20 μL , 注入高效液
相色谱仪 , 记录色谱图 , 38 min 以后为溶剂峰 , 分析时间
定为 38 min。
2.4.2　对照试验　吸取参照物溶液 20 μL , 注入高效液相
色谱仪 , 记录色谱图及保留时间 , 即得。
2.4.3　精密度试验　 取同一批次供试品溶液 , 按 “ 2.1”
项下色谱条件连续进样 6 次 , 以 JMG 色谱峰 (指纹图谱中
S 峰)为参照峰 , 计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面
积。结果表明 , 各共有峰相对保留时间和相对峰面积稳定 ,
RSD<3%, 符合指纹图谱分析要求 , 精密度良好。
2.4.4　重复性试验　取同一批次供试品药材粗粉 6 份 , 按
“ 2.3” 项下方法制备供试品溶液 , 按 “ 2.1” 项下色谱条件
分别测定 , 记录指纹图谱。以 JMG 色谱峰 (指纹图谱中 S
峰)为参照峰 , 计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面
积。结果表明 , 各共有峰相对保留时间和相对峰面积稳定 ,
RSD<3%, 符合指纹图谱分析要求 , 重复性良好。
2.4.5　稳定性试验　 取供试品溶液按 “ 2.1” 项下色谱条
件 , 分别于 0 、 4、 8 、 12 、 24 h 进样分析 , 记录指纹图谱。
以 JMG 色谱峰 (指纹图谱中 S 峰)为参照峰 , 计算各共有
峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明 , 各共有峰相对
保留时间和相对峰面积稳定 , RSD<3%, 表明供试品溶液
在 24 h 内基本稳定。
2.5　蕨麻指纹图谱的测定
分别精密吸取参照物溶液及 10批供试品溶液各 20 μL ,
注入液相色谱仪 , 按 “2.1” 项下色谱条件 , 记录 38 min 的
色谱图 (见图 1 ～ 3)。供试品色谱图中 , 以 JMG 色谱峰 (S
峰)的保留时间和峰面积为 1 , 计算各共有峰的相对保留时
间和相对峰面积比值 (分别见表 2、 3)。
图 1　JMG Ⅰ 、 JMG 对照品色谱图
Fig 1　Fingerp rint of JMG Ⅰ and JMG reference subs tance
1.蕨麻苷Ⅰ (JMG Ⅰ);2.蕨麻苷 (JMG)
图 2　蕨麻 (9号样品)色谱图
Fig 2　Fingerp rint of P otent i l la anserina (No.9)
5.蕨麻苷Ⅰ (JMG Ⅰ);S.蕨麻苷 (JMG)
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C ent ral S outh Ph arm acy.December 2007 , Vol.5 No.6　中南药学 2007年 12月第 5卷第 6期
图 3　10批蕨麻药材的指纹图谱
Fig 3　Fingerprint of th e 10 bateh es of P otent i l la anserina
2.6　指纹图谱相似性评价
利用 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统 , 2004A 版” ,
经过数据导入 , 峰点校正和数据匹配 , 以中位数法建立对照
指纹图谱。各样品与对照色谱图相比较 , 采用夹角余弦法计
算相似度 , 进行整体相似度评价 。通过相似度分析发现 , 10
批样品的相似度均在 0.95 以上 (见表 4)。
3　结论
作者用梯度洗脱的方法使蕨麻药材提取物得到了较好的
分离。通过对 10 批药材的测定分析 , 发现其峰面积差异较
大 , 但整体特征相似 , 由此标定了 9个共有峰 , 非共有峰占
总峰面积的 10%以下。 同时计算了这些药材的相似度均在
表 2　10批蕨麻药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
Tab 2　Relative retention time of common peaks for the 10batches of Potenti lla anserina
峰号
(peak)
相对保留时间 (relat ive retent ion time)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值　　　RSD
(average value)/ %
1 0.208 0.208 0.207 0.206 0.206 0.207 0.208 0.207 0.206 0.207 0.207 　0.078
2 0.345 0.346 0.347 0.345 0.345 0.346 0.347 0.345 0.345 0.346 0.346 　0.078
3 0.378 0.380 0.381 0.378 0.378 0.379 0.379 0.378 0.377 0.379 0.379 　0.11
4 0.709 0.709 0.708 0.707 0.707 0.708 0.710 0.707 0.707 0.707 0.708 　0.10
5 0.953 0.953 0.953 0.952 0.953 0.953 0.952 0.953 0.953 0.953 0.953 　0.040
S 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 　0
6 1.392 1.392 1.387 1.388 1.386 1.389 1.389 1.390 1.389 1.389 1.389 　0.18
7 1.420 1.412 1.414 1.415 1.413 1.416 1.417 1.417 1.416 1.416 1.416 　0.22
8 1.608 1.605 1.600 1.602 1.600 1.602 1.604 1.605 1.605 1.604 1.604 　0.24
表 3　10批蕨麻药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
Tab 3　Relative area of common peaks for the 10batches of Potenti lla anserina
峰号
(peak)
相对保留面积 (relative reten tion area)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值　　　RSD
(average value)/ %
1 0.077 0.076 0.009 0.047 0.034 0.023 0.012 0.019 0.011 0.016 0.032 　2.5
2 0.017 0.012 0.011 0.079 0.046 0.015 0.012 0.016 0.026 0.012 0.025 　2.1
3 0.020 0.021 0.006 0.041 0.040 0.025 0.024 0.016 0.025 0.018 0.024 　1.0
4 0.071 0.057 0.052 0.133 0.062 0.046 0.105 0.068 0.105 0.047 0.075 　2.8
5 0.453 0.452 0.527 0.354 0.377 0.433 0.354 0.482 0.356 0.468 0.426 　5.9
S 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 　0.00
6 0.347 0.349 0.380 0.469 0.362 0.287 0.297 0.373 0.291 0.320 0.348 　5.2
7 0.021 0.020 0.042 0.051 0.043 0.041 0.057 0.030 0.057 0.028 0.039 　1.3
8 0.023 0.021 0.028 0.031 0.036 0.013 0.035 0.028 0.031 0.019 0.027 　0.70
表 4　相似度计算结果
Tab 4　Similarity degree of samples
批号
(No.)
相似度
(degree of similarit y)
批号
(No.)
相似度
(degree of simi lari ty)
1 0.998 6 0.996
2 0.998 7 0.997
3 0.996 8 0.998
4 0.989 9 0.997
5 0.999 10 0.999
0.95 以上 , 说明了各产地之间虽然存在差异但同时具有较
好的相关性。通过实验证实该测定方法稳定可靠 , 可用于蕨
麻药材的指纹检测。
4　讨论
按照国家药典委员会关于 “中药注射剂指纹图谱研究的技
术要求(暂行)通知” , 以乙腈-水梯度洗脱法对蕨麻药材进行
了指纹图谱研究。实验证明, 该方法可操作性强 、 重复性好,
为有效地控制蕨麻药材提取物的质量提供了科学的依据。
对质量分数为 0.5%磷酸水-乙腈 、 甲醇-水 、 乙腈-水体
系进行了考察 , 结果表明乙腈-水系统分离良好 , 故选择乙
腈-水系统进行梯度洗脱 。由于对照品 JMG 、 JMGⅠ是紫外
末端吸收 , 因此比较了 203、 208 、 220 、 250、 280 nm 5 个
波长下的色谱图 , 发现 220 nm 以后峰信号强度明显减小 ,
且有很多峰消失没有吸收 , 而 203 nm 与 208 nm 相比 , 208
nm 处的信号强度大且峰数多。在 30 ℃柱温以及 1.0 mL ·
min-1的流速下 , 各主要色谱峰在 38 min 内达到很好的分
离 , 且同时分析了 JMG 、 JMGⅠ 2 个指标成分 , 这使蕨麻药
材指纹图谱分析效率大大提高。
本实验按 “2.1” 项下色谱条件记录了样品 9 的 2 h 的
色谱图 , 38 min以后为溶剂峰 , 60 min 以后没有特征峰的
出现 , 为了照顾样品的产地 、 采集时间 、 加工方法等的差异
性 , 保证所有样品的特征峰都能够被检出 , 因此选择38 min
作为分析时间。
蕨麻药材中含有的有效成分为皂苷类成分类化合物。鉴于
557
中南药学 2007年 12月第 5卷第 6期　Cent ral S ou th Pharmacy.December 2007 , Vol.5 No.6
指纹图谱的目的是鉴别药材和成药的质量, 选定蕨麻药材活性
成分中含量较高的 JMG作为本指纹图谱技术要求的参照物。
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(收稿日期:2007—07—10;修回日期:2007—08—14)
全定性全定量相似度法评价甜瓜蒂的毛细管电泳指纹图谱
孙国祥1 , 刘金丹1 , 侯志飞2 , 邓意辉1 (1.沈阳药科大学药学院 , 沈阳 110016;2.河北化工医药职业技术学院制药工
程系, 石家庄 050026)
摘要:目的　建立甜瓜蒂的毛细管电泳指纹图谱 (CEFP), 考察全定性全定量相似度法评价甜瓜蒂 CEFP 的可行性
和特征。方法　采用毛细管区带电泳法 , 以 50 mmol· L-1硼砂 (含 5%乙腈)为背景电解质 , 运行电压 12 kV , 紫
外检测波长 228 nm , 以 10个不同产地药材的电泳图谱建立了甜瓜蒂的对照 CEFP 。用全定性相似度 SF 和 S′F 、 全
定量相似度 C%和 P%分别评价甜瓜蒂 CEFP。分别考察在大峰缺失和小峰缺失 2 种情况下 , 4 个相似度指标变化特
征。结果　以葫芦素 B 为参照物峰 , 确定 11 个共有峰 , 建立了甜瓜蒂 CEFP , 并用 “中药色谱指纹图谱超信息特
征数字化评价系统 3.0” 计算 2组全定性相似度。结果 , SF 能反映化学成分分布比例的相似度 , 受大峰影响严重 ,
无法灵敏反映小峰的丢失;S′F 对所有指纹峰等权 , 反映小峰缺失灵敏 , 两者构成全定性相似度。 C%能反映样品
总体含量 , 受大峰影响严重;P%对所有峰积分值等权 , 能较好反映小峰变动 , 两者构成全定量相似度。 2 组全相
似度非常好地解决了中药色谱指图谱的评技术问题 , 毫无疑问其构成了中药色谱指纹图谱评价的技术核心。结论　
由 SF 和 S′F 、 C%和 P%构成的全定性全定量相似度法 , 能同时监测大峰和小峰的变动与缺失 , 能准确地解决色谱
指纹图谱的宏观定性和定量评价的核心技术问题 , 所建立的 CEFP 可用于甜瓜蒂质量控制。
关键词:甜瓜蒂;毛细管电泳;指纹图谱;全定性相似度;全定量相似度
中图分类号:R284O23　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2007)06-0558-06
Quality assessment of capillary electrophoresis fingerprints of
Pedicellus Melo by the overall qualitative similarity
and overall quantitative similarity method
SUN Guo-xiang 1 , LIU Jin-dan1 , HOU Zhi-fei2 , DENG Yi-hui(1.College of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical
University , Shenyang 110016;2.Pharmaceutical Engineering Department , Hebei Chemical and Pharmaceutial
College , Shij iazhuang , 050026)
Abstract:Objective　To establish the capilla ry elec trophore sis fing erprint(CEFP)of Pedice llus Melo , and to investi-
gate both the feasibility and char acte ristic va riances o f the overall qualitativ e simila rities and the overall quantitative
similarities that was applied in the quality asse ssment o f the CEFP of Pedicellus Melo.Methods　The CEFPs were ob-
tained by capillary zone electrophore sis , in which the backg round electroly te w as 50 mmo l/ L sodium borate containing
5% acetonitrile.The vo ltag e wa s 12 kV and the wave leng th w as 228 nm a t room temperature.The CEFPs w ere pro-
　　基金项目:国家自然科学基金重大研究计划课题。
作者简介:孙国祥 , 男 , 博士 , 副教授 , 硕士生导师 , 主要从事中药指纹图谱学体系及其信息学研究 , T el:(024) 23986286 , E-mai l:
gxswmw ys@163.com。
558
C ent ral S outh Ph arm acy.December 2007 , Vol.5 No.6　中南药学 2007年 12月第 5卷第 6期