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云南红药和同类产品对大鼠功血模型子宫内膜修复机制的实验研究



全 文 :◇ 基础研究 ◇
中国临床药理学与治疗学
中国药理学会主办
CN 34-1206/R,ISSN 1009-2501
http://www.cjcpt.com
2013Feb;18(2):132-136
2012-09-18收稿 2012-11-06修回
吕小波,男,博士在读,研究方向:分子药理学及新药开发。
Tel:025-83271108 E-mail:lvxiaobo_007@163.com
云南红药和同类产品对大鼠功血模型
子宫内膜修复机制的实验研究
吕小波1,周 敏2,黄春球2,刘云梅2
1中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009,江苏;
2云南植物药业有限公司研发中心,昆明650109,云南
摘要 目的:研究云南红药和5个治疗功血的同
类产品对子宫出血模型大鼠子宫组织血管内皮生
长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)含
量的影响,探讨该类药物修复子宫内膜的作用机
制。方法:采用妊娠大鼠灌胃米非司酮和米索前
列醇,造成早孕大鼠不完全流产复制功能性子宫
出血模型,观察云南红药对子宫出血模型大鼠的
治疗作用,并检测子宫组织中 VEGF和 MMP-1
的含量。结果:与正常对照组大鼠比较,模型组
大鼠在造模后,凝血时间明显延长,而云南红药和
5个同类产品能明显缩短子宫出血模型大鼠的凝
血时间,与模型组相比有统计学差异(P<0.01)。
与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠在造模后,子
宫组织的VEGF含量明显降低,而 MMP-1的含
量明显升高(P<0.01)。云南红药+戊酸雌二醇
片组能明显降低子宫出血模型大鼠子宫组织
MMP-1的含量,与模型组相比有统计学差异(P
<0.05),而云南红药胶囊组、戊酸雌二醇片组、宫
血宁胶囊组、云南白药胶囊组、茜芷胶囊组及五加
生化胶囊组对子宫组织 MMP-1的含量没有明显
影响(P>0.05)。云南红药胶囊组、云南红药+
戊酸雌二醇片组、宫血宁胶囊组及五加生化胶囊
组能明显增加子宫出血模型大鼠子宫组织VEGF
的含量,与模型组相比有统计学差异(P<0.01或
P<0.05),而戊酸雌二醇片组、云南白药胶囊组
及茜芷胶囊组对子宫组织 VEGF的含量没有明
显影响(P>0.05)。结论:云南红药和5个同类
产品对功能性子宫出血有明显的治疗作用,其中
云南红药胶囊、宫血宁胶囊及五加生化胶囊对子
宫内膜有明显的修复作用,其作用机制可能与上
调VEGF有关;云南红药胶囊和戊酸雌二醇片合
用可以增强其修复子宫内膜的作用。
关键词 云南红药;功能性子宫出血;子宫内膜;
修复;血管内皮生长因子;基质金属蛋白酶-1
中图分类号:R965.2
文献标识码:A
文 章 编 号:1009-2501(2013)02-0132-05
功能失调性子宫出血(Dysfunctional uterine
bleeding,DUB)是指下丘脑-垂体-卵巢轴神经内
分泌调节机制失常所致的子宫异常出血,国外报
道其发病率为22% [1]。云南红药处方中主要药
物为云南特产的民间中草药,主要由三七、重楼、
紫金龙、制黄草乌、玉葡萄根、滑叶跌打等10味中
药组成,具有止血镇痛、活血散瘀、祛风除湿等功
效,对风湿性关节炎、胃溃疡出血、功能性子宫出
血等多种病症有显著的疗效。本实验用妊娠大鼠
灌胃米非司酮和米索前列醇,造成早孕大鼠不完
全流产模型 [1-2],观察云南红药和5个同类产品
对子宫出血模型大鼠的治疗作用及其对大鼠子宫
组织血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白
酶-1(MMP-1)含量的影响,进一步探讨该类药物
修复子宫内膜的作用机制,为该类药物的临床用
·231·
药提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 SD大鼠,雌性(未孕),体重250
~300g,由昆明医学院实验动物中心提供,动物
合格证号:SCXK(滇)2005-0008。
1.2 药物与试剂 云南红药胶囊,云南植物药业
有限公司,批号:20120104;宫血宁胶囊,云南白药
集团股份有限公司,批号:ZC12004;云南白药胶
囊,云南白药集团股份有限公司,批号:ZL11017;
五加 生 化 胶 囊,多 多 药 业 有 限 公 司,批 号:
1112251;茜芷胶囊,甘肃新兰药药业有限公司,批
号:111101;戊酸雌二醇片,拜耳医药保健有限公
司广州分公司,批号:226A;米非司酮片,浙江仙
琚制药股份有限公司,批号:090503;米索前列醇
片,浙江仙琚制药股份有限公司,批号:100201;大
鼠VEGF酶联免疫分析试剂盒,上海蔚宏生物科
技有限公司,货号:DZE30634;大鼠 MMP-1酶联
免疫分析试剂盒,上海蔚宏生物科技有限公司,货
号:DZE30502。
1.3 仪器 LXJ2I型离心机:上海医用分析仪器
厂;三用电热恒温水浴箱:北京长安科学仪器厂;
旋涡混合器:浙江乐城电器厂;Bio-Rad 550酶标
仪,美国 Bio-Rad公司产品;瑞士产 METTLER
AT250 1/10万电子天平;玻璃匀浆器。
1.4 剂量设计 根据说明书,云南红药胶囊人每
天最大用量为2.25g;戊酸雌二醇片人每天最大
用量为0.15g;宫血宁胶囊人每天最大用量为
0.78g;云南白药胶囊人每天最大用量为2.0g;
茜芷胶囊人每天最大用量为6.0g;五加生化胶
囊人每天最大用量为4.8g。如人体重以60kg
计,上述药物人用最大剂量分别为 0.0375、
0.0025、0.013、0.0333、0.1、0.08g/kg。按体表
面积换算,大鼠等效剂量以5倍计算,则上述药物
大鼠剂量分别为 0.188、0.0125,0.065、0.167、
0.5、0.4g/kg。
1.5 大鼠DUB模型的制备 参照文献方法[1-2]
将大鼠按雌∶雄2∶1合笼,次晨检查雌鼠阴栓与
阴道涂片,以发现阴栓或阴道涂片有精子为妊娠
第1天,于怀孕第7天上午8时灌胃米非司酮
8.3mg/kg,下 午 6 时 灌 胃 米 索 前 列 醇
100μg/kg,造成早孕大鼠不完全流产模型。本实
验从妊娠第8天开始给药,每天1次,连续7d。
1.6 分组与给药 将健康未孕的SD雌性大鼠
120只与雄性大鼠于5∶00PM 按2∶1比例合
笼,次日上午8∶00进行阴道检查,以涂片镜检发
现精子为妊娠第1天,取受孕大鼠90只,随机分
为9组,每组10只,分别为:正常对照组,模型组,
云南红药胶囊组,戊酸雌二醇片组,云南红药+戊
酸雌二醇片组,宫血宁胶囊组,云南白药胶囊组,
茜芷胶囊组,五加生化胶囊组。除正常对照组外,
其余各组动物均按上述方法造模,于怀孕第7天
上午8时灌胃米非司酮8.3mg/kg,下午6时灌
胃米索前列醇100μg/kg,正常对照组灌胃给予
等量生理盐水,1mL/100g。造模成功后,于妊
娠第8天各组动物开始灌胃给药,每天1次,连续
7d。云南红药胶囊组灌胃给予云南红药胶囊
0.188g/kg,戊酸雌二醇片组灌胃给予戊酸雌二
醇片0.0125g/kg,云南红药+戊酸雌二醇片组
灌胃给予云南红药胶囊0.188g/kg和戊酸雌二
醇片0.0125g/kg,宫血宁胶囊组灌胃给予宫血
宁胶囊0.065g/kg,云南白药胶囊组灌胃给予云
南白药胶囊0.167g/kg,茜芷胶囊组灌胃给予茜
芷胶囊0.5g/kg,五加生化胶囊组灌胃给予五加
生化胶囊0.4g/kg,正常对照组、模型组灌胃给
予等量生理盐水,1mL/100g。大鼠妊娠第14
天,末次给药后1h,乙醚麻醉,股动脉放血处死
大鼠,取血检测凝血指标,并取子宫组织用玻璃匀
浆器制成匀浆,冷冻离心,取上清液,按试剂盒方
法检测VEGF和 MMP-1的含量。
1.7 指标检测方法 大鼠全血凝血时间采用毛
细管法测定;子宫组织 VEGF和 MMP-1用试剂
盒测定,采用固相夹心法酶联免疫吸附实验进行
检测。
1.8 统计学处理 数据以均数±标准差(x±s)
表示,组间比较采用SPSS 11.5统计软件,进行
Independent-Samples T 检验(组间进行t检验比
较,P<0.05表示差异有统计学意义)。
2 结果
2.1 云南红药和同类产品对子宫出血模型大鼠
凝血时间的影响 模型组大鼠的全血凝血时间与
正常对照组相比有统计学差异(P<0.05);与模
型组相比较,云南红药胶囊组、云南红药+戊酸雌
·331·中国临床药理学与治疗学2013Feb;18(2)
二醇片组、宫血宁胶囊组、云南白药胶囊组、茜芷
胶囊组及五加生化胶囊组能明显缩短子宫出血模
型大鼠的凝血时间(P<0.01或P<0.05);而戊
酸雌二醇片组对子宫出血模型大鼠的凝血时间没
有明显影响(P>0.05)。结果见表1。
表1 云南红药和同类产品对子宫出血模型大鼠凝血时间的影响(x±s,n=10)
组别 剂量(g/kg) 凝血时间(s)
正常对照组 -  70±16 
模型组 - 87±15b
云南红药胶囊组 0.188  62±15f
戊酸雌二醇片组 0.0125  75±16 
云南红药+戊酸雌二醇片组 0.188+0.0125  57±13f
宫血宁胶囊组 0.065  62±11f
云南白药胶囊组 0.167  56±14f
茜芷胶囊组 0.5  62±16f
五加生化胶囊组 0.4  67±21e
与正常对照组比较b P<0.05;与模型组比较e P<0.05,f P<0.01
2.2 云南红药和同类产品对子宫出血模型大鼠
子宫组织VEGF和 MMP-1含量的影响 与正常
对照组大鼠比较,模型组大鼠在造模后,子宫组织
的VEGF含量明显降低,而 MMP-1的含量明显
升高(P<0.01)。云南红药+戊酸雌二醇片组能
明显降低子宫出血模型大鼠子宫组织 MMP-1的
含量,与模型组相比有统计学差异(P<0.05),而
云南红药胶囊组、戊酸雌二醇片组、宫血宁胶囊
组、云南白药胶囊组、茜芷胶囊组及五加生化胶囊
组对子宫组织 MMP-1的含量没有明显影响(P>
0.05)。云南红药胶囊组、云南红药+戊酸雌二醇
片组、宫血宁胶囊组及五加生化胶囊组能明显增
加子宫出血模型大鼠子宫组织VEGF的含量,与
模型组相比有统计学差异(P<0.01或 P<
0.05),而戊酸雌二醇片组、云南白药胶囊组及茜
芷胶囊组对子宫组织 VEGF的含量没有明显影
响(P>0.05)。结果见表2。
表2 云南红药和同类产品对子宫出血模型大鼠子宫组织VEGF和 MMP-1含量的影响(x±s,n=10)
组别 剂量(g/kg) MMP-1(pg/mL) VEGF(pg/mL)
正常对照组 - 47.4±1.5  139±7
模型组 - 50.5±2.5c  127±6c
云南红药胶囊 0.188  47.9±3.0  134±7e
戊酸雌二醇片 0.0125  48.4±3.2  127±4
云南红药+戊酸雌二醇片 0.188+0.0125  47.9±2.4e  138±9f
宫血宁胶囊 0.065  48.1±2.6  132±5e
云南白药胶囊 0.167  49.5±1.2  130±11
茜芷胶囊 0.5  52.9±4.1  133±7
五加生化胶囊 0.4  50.0±1.6  135±7e
与正常对照组比较c P<0.01;与模型组比较e P<0.05,f P<0.01
3 讨论
功能失调性子宫出血为妇科常见病。西医传
统的观点认为,功血与内分泌失调有关。现代研
究表明[3-4]:功血是在激素作用下,子宫局部微环
境发生改变的结果,如生长因子、血管活性物质、
细胞外基质和性激素受体、子宫内膜腺上皮细胞
凋亡等。在众多止血环节中,上皮和血管的再生
是子宫内膜出血彻底终止的重要机制,血管生成
是子宫内膜修复的最基本因素,受到不同激素和
生长因子的调节,其中以bFGF、VEGF及其受体
最为重要[5-8]。而基质金属蛋白酶家族(MMPs)
·431· Chin J Clin Pharmacol Ther 2013Feb;18(2)
是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解
酶,主要的生理作用是降解细胞外基质,破坏肿瘤
细胞侵袭的组织学屏障,在肿瘤侵袭转移中起关
键性作用。MMPs在生理状态下参与胚胎形成、
新生血管的形成及伤口的愈合。有研究报道[9],
子宫内膜 MMP-1明显升高可能与子宫异常出血
有关。
本实验发现,造成子宫出血模型后,大鼠子宫
组织VEGF的含量明显降低而 MMP-1的含量明
显增加,说明VEGF和 MMP-1与子宫内膜异常
出血密切相关。实验中,云南红药和5个同类产
品对子宫出血模型大鼠有明显的治疗作用,能明
显缩短其凝血时间。其中,云南红药胶囊、云南红
药胶囊和戊酸雌二醇片合用、宫血宁胶囊及五加
生化胶囊能明显增加子宫出血模型大鼠子宫组织
VEGF的含量,说明这些药物对子宫内膜有明显
的修复作用,其作用机制可能与上调 VEGF有
关。另外,我们在实验中发现,模型组大鼠子宫组
织 MMP-1的含量明显增加,但各给药组 MMP-1
的含量与模型组相比无统计学差异,只有云南红
药胶囊和戊酸雌二醇片合用组能明显降低 MMP-
1的含量,这一类治疗功血的药物与雌激素(戊酸
雌二醇片)合用后可能会下调 MMP-1,而起到协
同增效的作用。
参 考 文 献
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aloproteinase-1and 3and mast cels are present in
the endometrium of women using progestin-only
contraceptives[J].Hum Report,2000,15(1):123
-126.
Experimental study of Yunnan hongyao and like product on repair-
mechanism of endometrium in dysfunctional uterine bleeding rats
LV Xiao-bo1,ZHOU Min2,HUANG Chun-qiu2,LIU Yun-mei 2
1 School of Life Science and Technology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,Jian-
gsu,China;2 Department of Research and Development,Yunnan Phytopharmaceutical CO.,LTD,
Kunming 650109,Yunnan,China
ABSTRACT AIM:To study the effect of Yun-
nan hongyao and other 5like products on VEGF
and MMP-1levels of uterine tissue in dysfunc-
tional uterine bleeding(DUB)rats.And explore
the repair-mechanism of endometrium of these
drugs.METHODS:The models of DUB were es-
tablished by administering intragastricaly with
mifepristone and misoprostol to pregnant rats.
After management,the clotting time were ob-
served,and the VEGF and MMP-1levels of
·531·中国临床药理学与治疗学2013Feb;18(2)
书◇ 基础研究 ◇
中国临床药理学与治疗学
中国药理学会主办
CN 34-1206/R,ISSN 1009-2501
http://www.cjcpt.com
2013Feb;18(2):136-141
2012-08-20收稿 2013-01-14修回
浙江省医药卫生科技计划项目(2009A170);杭州市医药卫生科
技计划项目(2009A023)
王福根,男,硕士,副主任药师,研究方向:肝病药物的研发和基础
研究。
Tel:0571-85463955 E-mail:wfg85463955@126.com
乙酰半胱氨酸纳米微球药动学及药效学评价
王福根,庄让笑,沈益琴,方红英,席建军
浙江中医药大学附属西溪医院,杭州310023,浙江
摘要 目的:对制备乙酰半胱氨酸纳米微球进行
药动学和药效学评价。方法:尾静脉注射乙酰半
胱氨酸纳米微球和乙酰半胱氨酸,不同时间检测
血浆和各脏器的乙酰半胱氨酸。通过皮下注射
CCl4 建立大鼠肝损伤模型,不同剂量乙酰半胱氨
酸纳米微球进行治疗,检测血清学指标和肝组织
各项指标评价纳米微球治疗慢性肝损伤的疗效。
结果:乙酰半胱氨酸纳米微球改变了药物在体内
的分布,肝组织中药物浓度明显提高,半衰期显著
增加。药效实验显示,纳米微球能降低血清学指
标,提高肝组织抗氧化功能,减轻肝细胞脂肪变
性、细胞浸润和坏死。结论:乙酰半胱氨酸纳米微
球具有明显肝靶向性,有利于肝损伤的药物治疗,
是一种比较理想的乙酰半胱氨酸新剂型。
关键词 乙酰半胱氨酸;纳米微球;药动学;药效

中图分类号:R969.1
文献标识码:A
文 章 编 号:1009-2501(2013)
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02-0136-06
uterine tissue were determined with ELISA
method.RESULTS:Compared with the model
group,the clotting time were significantly de-
creased(P<0.01)in Yunnan hongyao and 5like
products groups.In addition,the level of VEGF
of uterine tissue was significantly decreased and
the level of MMP-1was significantly increased in
model group.Compared with the model group,
the levels of VEGF were significantly increased
in Yunnan hongyao,Gong xuening and Wujia
shenghua groups(P<0.01or 0.05),and the
level of MMP-1 was significantly decreased in
Yunnan hongyao+estradiol valerate group(P<
0.05).CONCLUSION:Yunnan hongyao and 5
like products have significant therapeutic effect
on DUB rats.Yunnan hongyao,Gong xuening
and Wujia shenghua can repair endometrium.
The mechanism is relevant to increasing the lev-
els of VEGF.
KEY WORDS Yunnan hongyao;Dysfunctional
uterine  bleeding; Endometrium; Repair;
VEGF;MMP-1
本文编辑:余文涛
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