全 文 ：［收稿日期］ 20120220(015)
［基金项目］ 广西自然科学基金项目(桂科自 0991068)
［通讯作者］ * 刘吉成，主管药师职称，硕士学位，从事食品药
品分析及药品质量标准研究，Tel:13877502503，
E-mail:liujichenggood@ 126. com
HPLC测定黑草中木犀草素和芹菜素的含量
刘吉成 *
(广西玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱测定黑草药材中木犀草素和芹菜素的含量的方法。方法:样品用甲醇回流提取 90 min，
用 Agilent Extend-C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱分离，以乙腈-0. 7%冰醋酸(30∶ 70)为流动相，流速 1. 0 mL·min
－ 1，检测
波长 350 nm;柱温 35 ℃，进样量 10 μL，以外标法定量。结果:木犀草素在 1. 126 ～ 112. 6 mg·L － 1呈良好的线性关系(r =
0. 999 7) ，平均回收率 101. 3%，RSD 1. 2% (n = 6) ;芹菜素在 0. 886 ～ 88. 6 mg·L － 1呈良好的线性关系(r = 0. 999 5) ，平均回收
率 99. 4%，RSD 2. 2%(n = 6)。结论:该法操作简便，结果准确可靠，重复性及稳定性良好，可作为控制黑草药材质量的方法。
［关键词］ 黑草;木犀草素;芹菜素;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)20-0072-03
Determination of the Content of Luteolin and Diosmetin
in Buchnera cruciata by HPLC
LIU Ji-cheng*
(Yulin of Guangxi Institute For Food and Drug Control，Yulin 537000，China)
［Abstract］ Objective: To develop a HPLC method for determination of the content of luteolin and
diosmetin in Buchnera cruciata． Method:Samples were extracted for 90 minutes with methanol，a Agilent Extend-
C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)was used for composition separation and the mobile phase consisted of
acetonitrile-0. 7% acetic acid (30∶ 70)with a flow rate of 1. 0mL·min － 1 ． The detection wavelength was at 350
nm，column temperature was at 35 ℃ ． Sample volume is 10 μL，The content of luteolin and diosmetin in B．
cruciata was determined by external standard method． Result:The linear of luteolin and diosmetin concentrations
were within 1. 126-112. 6 mg·L － 1 (r = 0. 999 7) ，0. 886-88. 6μg·ml － 1 (r = 0. 999 5) ，the average recoveries
of luteolin and diosmetin were 101. 3% (RSD 1. 2%，n = 6) ，99. 4% (RSD 2. 2%，n = 6)． Conclusion:The
method is simple，accurate and reproducible with good stability，can be used as quality control methods for B．
cruciata medicinal materials．
［Key words］ Buchnera cruciata;luteolin;diosmetin;HPLC;determination
黑草系玄参科植物鬼羽箭属植物 Buchnera
cruciata Hamlt．干燥的全草，又名幼克草、克草、黑骨
草、羽箭草［1］，分布于广西、湖南、江西、福建、云南、
广东、海南等省区［2］。其味微苦、寒，性凉，具有清
热、凉血、解毒等功效，用于治疗流行感冒、中暑腹
痛、蛛网膜下腔出血、暑热口渴、腹痛、荨麻疹等疾
患［1-2］。钟正贤等［3］报道黑草具有抗凝、抗炎、镇
痛、抗过敏等药理作用;卢文杰［4］已经从黑草中分
离出有木犀草素、芹菜素、香叶木素、d-甘露醇、β-谷
甾醇、正二十七烷醇等 11 种化学成分，陈家源等［5］
已经鉴定出 33 种长链脂肪烃和脂肪酸类化合物;目
前还没有发现有关黑草的质量标准方面的研究。为
了有效的控制黑草的质量，本文采用 HPLC 对其主
要成分木犀草素和芹菜素进行含量测定。
1 材料
Agilent 1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公
·27·
第 18 卷第 20 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 20
Oct．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.20.003
司) ;XS-205Du 型电子分析天平(瑞士梅特勒公
司) ;KQ-250DB 型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司) ;Millipore Synergy-UV 型超纯水机
(美国密理博公司)。
黑草药材采集于广西桂林、柳州、河池、南宁和
贵州等地，经广西中医药研究院卢文杰教授鉴定为
玄参科鬼羽箭属植物黑草 Buchnera cruciata Hamit．
的干燥全草，使用前粉碎过 2 号筛。
木犀草素对照品(批号 111520-200201，购自中
国生物制品检定所)。芹菜素对照品，由广西中医
药研究院卢文杰教授提供。
甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适应性试验 Agilent Extend-
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相乙腈-
0. 7%冰醋酸(30 ∶ 70) ，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波
长 350 nm，柱温 35 ℃，进样量 10 μL。在此条件下，
木犀草素的理论塔板数 ＞ 7 000。对照品及样品色
谱图见图 1。
A．对照品;B．样品;1-木犀草素;2-芹菜素
图 1 对照品及黑草样品的 HPLC
2. 2 对照品储备液的制备 精密称取木犀草素对照
品 11. 26 mg，芹菜素对照品 8. 86 mg，置同一 100 mL
量瓶中，加甲醇适量，超声 10 min 并用甲醇稀释至
刻度，即为对照品储备液，质量浓度木犀草素
0. 112 6 g·L － 1，芹菜素0. 088 6 g·L － 1。
2. 3 供试品溶液的制备 取粉碎的药材约 1 g，精
密称定其质量，再精密加入 50 mL 甲醇，称定质量，
放水浴上回流 90 min，放冷，再称定质量，用甲醇补
足减失的质量，混匀，过滤，取续滤液作为供试品
溶液［6］。
2. 4 线性关系考察 分别精密量取对照品储备液
0. 1，1. 25，2. 5，5，7. 5，10 mL 分别置 10 mL 的量瓶
中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，分别取上述 6 个
不同浓度的对照品溶液 10 μL，注入高效液相色谱
仪，以对照品溶液的质量浓度为横坐标，以色谱峰
峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得木犀草素线性
方程A = 4 220. 6 C + 27. 98(r = 0. 999 7) ;芹菜素
的线性方程 A = 13. 85C － 5. 52(r = 0. 999 5)。结
果表明木犀草素对照品溶液在质量浓度为 1. 126
～ 112. 6 mg·L － 1呈良好的线性关系;芹菜素在质
量浓度为 0. 886 ～ 88. 6 mg·L － 1 呈良好的线性
关系。
2. 5 精密度试验 精密量取混合对照品 10 μL(木
犀草素质量浓度为 56. 3 mg·L － 1，芹菜素质量浓度
为 44. 3 mg·L － 1) ，注入高效液相色谱仪，按 2. 1 的
色谱条件，连续进样 6 次，测定木犀草素和芹菜素峰
面积。结果木犀草素峰面积 RSD 0. 3%，芹菜素的
峰面积的 RSD 0. 6%，结果表明所用液相色谱仪的
精密度非常好。
2. 6 稳定性试验 取黑草药材粗粉约 1 g，精密称
定，按照 2. 3 项下供试品溶液的制备方法制备，室温
下保存，分别在 0，2，4，8，12，24 h 精密吸取供试品
溶液 10 μL，注入液相色谱仪，按照 2. 1 项下的色谱
条件测定，考察其稳定性，木犀草素的峰面积的
RSD 0. 89%，芹菜素峰面积的 RSD 0. 68%。结果表
明供试品溶液在 24 h 内保持稳定。
2. 7 重复性试验 取黑草药材粗粉约 1 g(产地为
桂林荔浦) ，共取 6 份，精密称定，按照 2. 3 项下供试
品溶液的制备方法制备，精密吸取供试品溶液 10
μL，按照 2. 1 项下的色谱条件进行测定，计算木犀
草素和芹菜素的含量，木犀草素的含量为 1. 48 mg·
g － 1，RSD 0. 84%;芹菜素的含量为 0. 51 mg·g － 1，
RSD 1. 23%。结果表明，用上述方法重复性良好。
2. 8 加样回收试验 精密加入混合对照品溶液
(木犀草素质量浓度为 1. 493 g·L － 1，芹菜素质量浓
度为0. 536 5 g·L － 1)0. 5 mL 至 100 mL 的具塞三角
瓶中，水浴上挥干溶剂，平行制备 6 份，再在每一份
中加入已知含量的黑草药材粗粉约 0. 5 g，按照 2. 3
项下供试品溶液的制备方法制备，精密吸取供试品
溶液 10 μL，按照 2. 1 项下的色谱条件分别测定其
木犀草素和芹菜素的含量，计算回收率(黑草药材
含量以 1. 48 mg·g － 1计，芹菜素的含量以 0. 51 mg·
g － 1计) ，结果见表 1。
·37·
刘吉成:HPLC 测定黑草中木犀草素和芹菜素的含量
表 1 黑草药材木犀草素和芹菜素加样回收试验
成分
取样量
/ g
样品
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
木犀草素 0． 503 3 0． 744 9 0． 746 5 1． 501 2 101． 31 101． 3 1． 2
0． 500 4 0． 740 6 1． 492 2 100． 68
0． 504 0 0． 745 9 1． 490 1 99． 69
0． 503 2 0． 744 7 1． 510 1 102． 53
0． 501 7 0． 742 5 1． 496 2 100． 96
0． 506 1 0． 749 0 1． 516 8 102． 85
芹菜素 0． 503 3 0． 256 7 0． 268 2 0． 526 5 100． 60 99． 4 2． 2
0． 500 4 0． 255 2 0． 524 3 100． 34
0． 504 0 0． 257 0 0． 518 0 97． 32
0． 503 2 0． 256 6 0． 523 3 99． 44
0． 501 7 0． 255 9 0． 530 1 102． 24
0． 506 1 0． 258 1 0． 516 8 96． 46
2. 9 样品含量测定 分别取不同产地的黑草药材，
粉碎，取粉末约 1 g，精密称定，按照 2. 3 项下供试品
溶液的制备方法制备，精密吸取供试品溶液 10 μL，
按照 2. 1 项下的色谱条件测定其木犀草素的含量。
结果见表 2。
表 2 各产地黑草药材中木犀草素和芹菜素的含量 mg·g － 1
No． 产地 木犀草素 芹菜素
1 贵州 0. 63 0. 37
2 桂林阳朔 1. 24 0. 34
3 柳州融水 1. 79 0. 28
4 桂林龙胜 1. 61 0. 42
5 广西柳州 1. 16 0. 29
6 桂林恭城 1. 08 0. 31
7 广西南宁 1. 08 0. 31
8 桂林荔浦 1. 48 0. 51
9 桂林兴安 1. 33 0. 42
10 广西河池 1. 14 0. 25
3 讨论与分析
3. 1 色谱条件的选择
3. 1. 1 流动相的选择 曾考虑分别用甲醇-0. 2%
磷酸溶液(50∶ 50)［7-8］，乙腈-0. 4%磷酸水溶液(25 ∶
75)［9］，甲醇-水(50 ∶ 50) ，乙腈-0. 05% 磷酸水溶液
(30∶ 70)［10］，乙腈-0. 7% 冰醋酸溶液(30 ∶ 70)［11］等
作为流动相。用乙腈-0. 05%磷酸水溶液(30∶ 70)和
甲醇-水(50∶ 50)作流动相出现峰形拖尾，峰形不美
观;而用甲醇-0. 2% 磷酸水溶液(50 ∶ 50)和乙腈-
0. 4%磷酸水(25 ∶ 75)作流动相出现出峰时间不稳
定并且峰面积变化大;最终发现峰形最好，不拖尾
的，并且出峰时间适中，条件稳定的只有乙腈-0. 7%
冰醋酸溶液(30 ∶ 70)。最终选择乙腈-0. 7% 冰醋酸
溶液(25∶ 75)作为流动相。
3. 1. 2 检测波长的选择 检测波长对于含量测定
方法，通常选用被测物质最大的，干扰少的吸收波
长，木犀草素在 350，267，254 nm 等波长处均有最大
吸收，用这几个波长都可以达到分离效果好，由于在
350 nm 波长处有较高的吸收值，干扰少，峰型好，最
终选择了 350 nm 作为最大吸收波长。
3. 2 提取条件的选择 传统的中药提取有效成分
的方法有溶剂浸渍法、直接超声提取，加热回流提取
等方法，本实验考察了直接超声提取［7］和加热回流
提取 2 种方法在不同提取时间的提取效果，结果表
明加热回流提取远比超声提取的效果要好，考察了
回流提取 10，20，30，60，90，120 min，考虑提取效能，
节约能源等因素，最终选择了加热回流提取 90 min
的提取方法。
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 18 卷第 20 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 20
Oct．，2012