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高效液相色谱法测定云南红药胶囊中黄芩苷的含量
青海大学附属医院制剂中心(810001) 张恩源 刘 萍
摘要 目的:建立以 HPLC 法测定红药胶囊中黄
芩苷含量的方法。方法:采用 Wates Symmety C18 柱
(3． 9mm ×150mm，5μm)，甲醇 －水 －磷酸(47∶ 53∶
0． 2)为流动相，流速 1． 0mL /min，检测波长 280nm，柱
温:室温。结果:黄芩苷在(0． 52 ～ 3． 328)μg /mL范围
内与峰面积积分值呈良好线性关系(r =0． 9996)，平均
回收率为 99． 67%，RSD =0． 82%(n = 6)。结论:本方
法简便、准确、灵敏重现性好，可用于测定红药胶囊黄
芩苷含量。
关键词 高效液相色谱法 红药胶囊 黄芩苷
含量测定
中图分类号 R243
云南红药胶囊是纯中药的胶囊制剂，主要成分
有三七、重楼、制黄草乌、紫金龙、玉葡萄根、滑叶跌
打、大麻药、金铁锁、西南黄芩、石菖蒲等十味药加工
制成。具有止血镇痛，活血散瘀，祛风除湿等功效。
临床主要用于胃溃疡出血，支气管扩张咯血，功能性
子宫出血，月经过多，眼底出血，鼻衄，痔疮出血，软
组织挫伤，风湿性关节炎，风湿性腰腿痛等疾病。方
中的主药西南黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，其
有效成分主要有黄芩苷、黄芩素等黄酮类化合物，其
制剂中黄芩苷的定量方法，文献已有多种测定方法
报道。现采用高效液相色谱法对云南红药胶囊中黄
芩苷的含量测定，方法简便、准确、重现性好。
仪器试药
高效液相色谱仪(日本岛津 LC － 10ATVP 溶剂
输入泵、SPD － 10AVP 紫外检测器、HW － 2000 色谱
工作站) ，TCQ －250 超声波清洗器(北京医疗设备二
厂) ，Millenniμm2010 色谱管理系统(V2． 15． 01) ;黄
芩苷对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号
110715 － 200416) ，云南红药胶囊(云南红普药业有
限公司，批号 100324) ，甲醇(色谱纯天津大茂化学
仪器供应站) ，其它试剂均为分析纯，水为双蒸水。
方法与结果
1 色谱条件 色谱柱 Wates Symmety C18 柱
(4． 6mm ×150mm，5μm) ，用十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂，甲醇 －水 －磷酸(47 ∶ 53 ∶ 0． 2)为流动
相，流速 1． 0mL /min，检测波长 280nm，柱温:室温，
在上述色谱条件下，理论塔板数以黄芩苷峰计算应
不低于 2 500。
2 溶液的制备
2． 1 对照品标溶液的制备 精密称取经五氧化二
磷干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加 50%甲醇制
成 1mL含黄芩苷 0． 52mg /mL的标准储备液。
2． 2 供试品溶液的制备 取本品 20 粒倾出内容
物，精密称重，研细，取约 0． 5g，精密称重，加 70%乙
醇 50mL，加热回流 3h，放冷、滤过，滤液置 100mL 的
量瓶中，用少量 70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗涤
液入同一量瓶中，加 70% 甲醇至刻度，摇匀，用
0． 45μm微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
2． 3 阴性对照品溶液的制备 取阴性对照品(不含
黄芩)按 2． 2 项样品处理方法制备，得阴性对照品溶
液备用。
3 测定波长的选择 精密称取黄芩苷对照品适量，
加甲醇溶解，以甲醇为空白，在波长(200 ～ 600)nm
范围内扫描，结果黄芩苷在 209nm 和 277nm 波长附
近有 2 个强度较大的吸收峰，因 209nm 接近末端吸
收，而 2005 年版《中国药典》(一部)黄芩药材含量
测定项下规定的检测波长为 280nm［1］(与 277 nm接
近) ，故 280nm为检测波长。在该波长下，仪器噪音
小，基线平直。
4 线性关系的考察 精密量取黄芩苷对照品储备
液 0． 52mg /mL，精密量取上述储备液 0． 5mL，
1． 2mL，1． 8mL，2． 5mL，3． 2mL，置 10mL量瓶中，加流
动相甲醇 －水 －磷酸(47 ∶ 53 ∶ 0． 2)至刻度摇匀。
按上述色谱条件依次进样 20μL注入液相色谱仪，记
录色谱峰面积，以峰面积 A为纵坐标，对照品溶液 C
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为横坐标进行线性回归，得回归方程:Y = 12 225．
148 74 + 51 561． 796 47X(r = 0． 999 6)。结果表明:
黄芩苷在(0． 52 ～ 3． 328)μg /mL 范围内与峰面积积
分值呈良好线性关系。
5 精密度试验 精密吸取同一浓度黄芩苷对照品
溶液 20μL，在上述色谱条件下，重复进样 5 次，测定
黄芩苷峰面积，结果 RSD为 1． 3%(n = 5) ，结果表明
仪器精密度良好。
6 稳定性试验 精密吸取 2． 2 的供试品溶液
20μL，分别在 0、1h、2h、4h、8h进样分析，测得黄芩苷
的 RSD为 2． 5%(n = 5) ，表明供试品溶液制备后 8h
内稳定。
7 重复性试验 分别吸取 6 份同一批(批号
100324)样品 6 份，按 2． 2 项下的方法制备供试品溶
液，在上述色谱条件下平行测定，记录峰面积，计算
黄芩苷的 RSD为 1． 7%(n = 6) ，表明本方法重现性
良好。
8 专属性试验 在上述色谱条件下取对照品溶液
(0． 52mg /mL) ，阴性对照品溶液和供试品溶液分别
进样 20μL进行色谱分析。结果表明:样品中其它组
分对黄芩苷峰无干扰。见图 1。
A:对照品;B:样品;C:阴性对照品
图 1 黄芩苷 HPLC的色谱图
9 加样回收率试验 取已知含量的样品 6 份各约
0． 3g，精密称重，分别精密加入一定量的黄芩苷对照
品，照 2． 2 项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱
条件进样 20μL测定，计算回收率。结果见表 1。
表 1 回收率测定结果(μg /mL，%)
样品量 加入黄芩苷对照品量 测得量 回收率 平均回收率
RSD
17． 08 10 27． 08 100． 00
17． 08 10 26． 95 98． 66
17． 82 30 48． 05 100． 76 99． 67 0． 82
17． 82 30 47． 99 100． 57
14． 55 50 64． 16 99． 22
14． 55 50 64． 08 99． 07
10 样品测定 分别吸取对照品溶液与供试品溶液
各 20μL，按上述色谱条件进样，计算样品中黄芩苷
含量。每批样品平行测定 3 次，结果见表 2。
表 2 样品的测定结果(n = 3)
样品批号
黄芩苷含量(mg /粒)
方法一 方法二
100324 24． 23 24． 39
100416 23． 38 24． 44
100421 23． 83 24． 23
讨 论
1)实验过程中分别使用了甲醇 － 水 － 磷酸
(47∶ 53∶ 0． 2)和乙腈 －水 －磷酸(40∶ 60∶ 0． 2)为
流动相，结果显示，使用甲醇 －水 －磷酸(47 ∶ 53 ∶
0． 2)为流动相样品色谱峰分离效果好，峰形较好，故
使用甲醇 －水 －磷酸(47∶ 53∶ 0． 2)为流动相。
2)常用的黄芩苷提取方法有回流法与超声波提
取法［2、3］，笔者参考相关文献，对其提取方法进行探
讨。以流动相为溶剂，试验了超声(250W，频率
33kHz)40min时间的提取法和加热回流 3h 比较提
取效果，结果显示，加热回流 3h，可以提取完全，因此
确定提取方法应为加热回流法。
3)本法操作简便，测定结果准确，重复性好。可
用于云南红药胶囊中黄芩苷的测定。
参 考 文 献
1 国家药典委员会，编．中华人民共和国药典(一部)．北京:
化学工业出版社，2005，211．
2 梁兆昌，黄宁，唐春华． 高效液相色谱法测定满金止咳片
中黄芩苷的含量．中国药房，2006，17(12) :940．
3 贾善学，李锦绣，赵卫，等．高效液相色谱法测定苦甘颗粒
中黄芩苷的含量．中国药房，2003，14(6) :366．
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