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苗药野草香中黄酮类成分抗氧化活性研究



全 文 :苗药野草香中黄酮类成分抗氧化活性研究
向 平,陈 青*
(贵州大学 化学与化工学院 化学系,贵州 贵阳550025)
摘 要:目的:对苗药野草香中提取分离的黄酮类成分进行抗氧化活性研究。方法:采用 DPPH 和
ABTS两种方法测定。结果:木犀草素(2)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、槲皮素(5)、槲皮素-3-
O-β-D-吡喃半乳糖苷(6)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(7)对DPPH自由基和 ABTS自由基均有一定的清
除活性(IC50分别为9.25±0.48、11.42±0.54、11.23±0.18、14.87±1.07、39.48±1.16和4.69±0.21、
4.13±0.03、3.44±0.09、8.52±0.27、23.58±0.15)。结论:综合两种测定方法结果,化合物(2)和(5)
的抗氧化能力最好。
关键词:苗药;野草香;黄酮类化合物;抗氧化活性;DPPH法;ABTS法
中图分类号:R284;R29   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2016)17-0007-03
DOI:10.11954/ytctyy.201617004
收稿日期:2016-03-23
基金项目:贵州省科技厅社会发展科技攻关计划项目(黔科合SY字[2011]3086)
作者简介:向平(1991-),男,贵州大学硕士研究生,研究方向为天然药物化学。E-mail:1058112692@qq.com
通讯作者:陈青(1974-),贵州大学教授,硕士生导师,研究方向为天然药物化学。E-mail:chenqingluck@163.com
  苗药野草香(Elsholtzia cypriani(pam p.)C.Y.Wu  et S.Chow)为唇形科香薷属草本植物,又名野狗芝麻、

狗尾
3 VTM与其他亚洲国家传统医学的比较
亚洲各国使用草药的规范有所差异,越南同中国和韩
国一道是世界上为数不多的使用现代西医与本国传统医学
共同治病的国家。越南卫生部设立了基本草药与传统制剂
目录,最新版本是2010年4月份出台,包括127种传统制剂
和300种草药,但在日本并没有此类目录,汉方药仅能通过
医师开具处方后使用,其他类型的传统医学,如印度的
Ayurveda、印度尼西亚的Jamu,因受中医的影响较小而与
VTM 的差别较大。
VTM 受中医影响巨大,而有些越南草药也流入中医
中。VTM使用的药材来源与中医有些许不同,其常用一些
特定的药材代替中药。草药的越南名字通常用“nam”这个
后缀表示药材来源于南部,意为越南本地药材[5];“bac”这个
后缀表示药材来源于北部,意为中国药材。VTM治病时更
倾向于实践经验,而不像中医那样进行理论辨证,而由于越
南潮湿炎热的气候,居民易患疾病与中国有很大不同,VTM
治疗方法与中医也有所差异。
4 VTM的理论与哲学基础
VTM 认为人与自然密不可分,机体出现病证是因为
“am”和“duong”失衡,类似于中医中的阴阳失调,这种失衡
直接影响机体能量循环的“khi”,也就是中医中的气,可通过
针灸、用硬币摩擦、吃米粥、草药熏蒸恢复平衡。VTM 将中
医中的阴阳、五行、脏腑、经络理论本土化,融入到自身的文
化中。两位越南学者,TuêTnh(14世纪)和 Hi Thuong
Lnng(18世纪)被认为是 VTM 之父,两位学者根据越
南当地气候对VTM的药理学、病理学以及治疗方法进行了
改进。
5 结语
VTM源远流长,是越南人民长期以来与疾病进行斗争
的智慧结晶,其与中医理论体系一脉相承,由于数千年来两
国政治、文化、经济的交流,中越传统医学互相补充和促进,
理论体系并没有根本的区别。目前越南政府高度重视传统
医学的继承和发展,制定并实施全方位发展策略,将传统医
学纳入法制化轨道、重视传统医学教育培训、大力发展传统
医药科研、加强传统医药的对外交流和技术合作等,努力提
升VTM的地位。
参考文献:
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(编辑:尹晨茹)
—7—
草、狗尾巴草等。主要生长于海拔400~2 900m的田边、路
旁、河谷两岸、林中或林边草地[1]。野草香全草入药,具有
解毒、清热、发表、散寒等作用,可用于感冒发烧、鼻渊、喉
蛾、筋骨痛、疔疮、头痛等疾病的治疗,花穗可止血或作调味
使用[2]。在贵州苗族地区,野草香花果及挥发油(木姜花
油)因具有特殊的清香气,常作为食品香料食用,民间用药
历史也十分悠久。国内外学者通过对香薷属植物化学成分
和生物活性研究发现,挥发油类和黄酮类化合物是该属植
物的主要活性成分[3-6]。对野草香化学成分的研究主要集中
在挥发油,野草香茎叶和花都含有挥发油,油的主要成分为
β-去氢香薷酮,相对含量为86.82%
[7]。野草香其他成分及
生物活性的研究尚未见报道。为了进一步开发和利用该种
苗药资源,应用DPPH和ABTS两种体外抗氧化方法对贵
州产野草香中分离得到的黄酮类化合物进行抗氧化测定,
并对各个化合物的抗氧化能力进行对比。
1 仪器与材料
1.1 仪器
FZ UV-2000型紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器
有限公司);TP-114电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统
有限公 司);旋 转 蒸 发 仪 (上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂);
SG2200HPT超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)。
1.2 材料
二苯代苦味酰基自由基(DPPH,上海晶纯生化科技股
份有限公司);2,2′-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵
盐(ABTS,上海晶纯生化科技股份有限公司);PG(propyl
galate,没食子酸丙酯)、BHA(Butylated hydroxyanisole,丁
基羟基茴香醚)、BHT(Butylated hydroxytoluene,二丁基羟
基甲苯)(上海晶纯生化科技股份有限公司)。95%乙醇、过
二硫酸钾均为分析纯。
野草香于2013年10月采集于贵州省贵阳地区,经贵阳
中医学院陈德媛教授鉴定为香薷属野草香(Elsholtzia cyp-
riani(pam p.)C.Y.Wu et S.Chow)的全草。
2 试验方法
2.1 样品制备
野草香干燥全草25kg粉碎,用75%工业乙醇热回流提
取3次,时间分别为3h、2h和1h,减压回收溶剂并合并浸
膏,加适量水分散,依次用石油醚和乙酸乙酯萃取。乙酸乙
酯部位采用多种层析方法进行分离和纯化,通过理化数据
测定、波谱分析等手段,分离鉴定了7个黄酮类单体化合
物,分别为:5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮(1)、木犀草素(2)、木
犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖
苷(4)、槲皮素(5)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(6)、槲皮
素-3-O-α-L-鼠李糖苷(7)。这7个黄酮化合物作为抗氧化
活性测定的样品。
2.2 DPPH法测定抗氧化活性[8-9]
2.2.1 DPPH溶液制备 准确称取0.005 9g DPPH,用
体积分数为95%的乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中,
DPPH浓度为0.06mmol/L,避光保存(0~4℃)。
2.2.2 测试方法 DPPH方法:取0.1mL供试样品溶液
加入3.5mL DPPH自由基工作液,混合均匀,在室温下静
置30min后,在515nm波长下检测DPPH吸光度值;同上,
将0.15mL 95%乙醇溶液加入3.5mL DPPH 自由基工作
液,混匀后测其吸光度。每份样品平行操作3次,取平均
值。同时设置阳性对照,通过如下公式计算得到样品消除
自由基的能力:
消除率(%)=[(Acontrol-Asample)/Acontrol]×100%
式中,Acontrol为 DPPH 本身在测定波长的吸收度,
Asample为样品对DPPH作用后的吸收度数值(除去样品
自身吸收)。用系列溶液的抑制率绘制曲线,由曲线读取
DPPH自由基清除率为50%时各样品溶液浓度,计为IC50,
以IC50值表示化合物清除DPPH自由基能力,IC50值越小,
表示清除能力越强。
2.2.3 DPPH测定PG、BHA、BHT的抗氧化活性 测
定PG(没食子酸丙酯)、BHA(丁基羟基茴香醚)、BHT(二
丁基羟基甲苯)的抗氧化活性与测定野草香的步骤一样,同
上操作。得到数据可以与野草香的数据形成对照。
2.3 ABTS法测定抗氧化活性
2.3.1 ABTS溶液的制备 准确称取0.192 3g ABTS,
用体积分数为95%的乙醇溶解并定容于50mL容量瓶中,
浓度为7.0mmol/L。再称取0.033 1g过硫酸钾用少量的蒸
馏水溶解并用95%的乙醇定容,浓度为2.45mmol/L。然后
将两容量瓶中的溶液混合后避光保存12h。
2.3.2 测试方法 ABTS方法:取0.15mL供试样品溶液
加入2.85mL ABTS自由基工作液,混合均匀,10min后测
定734nm处吸光度;同上,将0.15mL 95%乙醇溶液加入
2.85mL ABTS自由基工作液混匀后测其吸光度。每份样
品平行操作3次,取平均值。同时设置阳性对照,通过如下
公式计算得到样品消除自由基的能力:
消除率(%)= [(Acontrol-Asample)/Acontrol]×
100%
式中,Acontrol为ABTS自由基本身在测定波长的吸
收度,Asample为样品对 ABTS自由基作用后的吸收度数
值(除去样品自身吸收)。用系列溶液的抑制率绘制曲线,
由曲线读取DPPH自由基清除率为50%时各样品溶液浓
度,计为IC50,以IC50值表示化合物清除DPPH自由基能力,
IC50值越小,表示清除能力越强。
2.3.3 ABTS测定PG、BHA、BHT的抗氧化活性 测
定PG(没食子酸丙酯)、BHA(丁基羟基茴香醚)、BHT(二
丁基羟基甲苯)的抗氧化活性与测定野草香的步骤一样,同
“2.3.2”操作。得到数据可以与野草香的数据形成对照。
2.4 结果与分析
2.4.1 实验结果
表1 抗氧化活性结果 (珚x±s)
样品
初筛浓度
(mg/L)
DPPH方法
初筛抑制率 IC50(mg/L)
ABTS方法
初筛抑制率 IC50(mg/L)
1  108.11  1.68±1.24 NT  42.85±1.71 NT
2  108.11  95.14±0.28  9.25±0.48  100.34±0.19  4.69±0.21
3  108.11  94.79±0.12  11.42±0.54  102.56±0.13  4.13±0.03
4  108.11  5.07±0.58 NT  49.43±0.50 NT
5  108.11  96.28±0.17  11.23±0.18  106.52±1.90  3.44±0.09
6  108.11  93.59±0.47  14.87±1.07  99.71±0.63  8.52±0.27
7  108.11  91.29±0.35  39.48±1.16  97.93±0.37  23.58±0.15
PG  21.62  95.57±0.26  2.95±0.11  96.11±0.16  1.00±0.03
BHT  54.05  76.75±2.02  17.31±1.32  96.86±0.03  4.48±0.35
BHA  32.43  90.62±0.18  7.87±0.11  99.79±0.10  2.40±0.11
注:BHT、BHA、PG为阳性对照品;NT:未测定(初筛抑制率小于50%)。
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2.4.2 结果分析 由表1可以看出,所测得的单体化合
物中除化合物(1)和(4)外均有一定的清除DPPH和ABTS
自由基的能力,初筛抑制率都达到90%以上。其中具有抗
氧化活性的单体化合物除化合物(7)外,清除DPPH自由基
的能力均强于阳性对照品BHT(IC50=(17.31±1.32)mg/L);
所有样品清除 DPPH 自由基的能力均弱于阳性对照品
BHA(IC50=(7.87±0.11)mg/L)和 PG(IC50=(2.95±
0.11)mg/L)。化合物(2)清除DPPH自由基的能力(IC50=
(9.25±0.48)mg/L)最强,约为BHT作用的1.9倍。化合
物(3)和(5)清除 DPPH 自由基的能力(IC50=(11.42±
0.54)mg/L和IC50=(11.23±0.18)mg/L)相差无几,都约
为BHT作用的1.5倍。化合物(6)清除DPPH自由基的能
力(IC50=(14.87±1.07)mg/L)与BHT相当。所有单体化
合物清除 ABTS自由基的能力均弱于阳性对照品 BHA
(IC50=(2.40±0.11)mg/L)和阳性对照品PG(IC50=(1.00
±0.03)mg/L);除化合物(3)和(5)外,其他具有抗氧化活性
的单体化合物清除ABTS自由基的能力也弱于阳性对照品
BHT(IC50=(4.48±0.35)mg/L);其中化合物(5)清除
ABTS自由基的能力(IC50=(3.44±0.09)mg/L)约为BHT
(IC50=(4.48±0.35)mg/L)作用的1.3倍。化合物(3)清
除ABTS自由基的能力(IC50=(4.13±0.03)mg/L)约为
BHT(IC50=(4.48±0.35)mg/L)作用的1.1倍。化合物
(2)清除ABTS自由基的能力(IC50=(4.69±0.21)mg/L)
与BHT相当。综合两种测试方法结果,化合物(2)和(5)的
抗氧化能力较好。
化合物(2)和(5)分别为木犀草素和槲皮素,均为黄酮
苷元,他们的清除自由基活性都强于相应的苷(3、6、7)。这
两个化合物结构具有一定的相似性,在黄酮母核上具有多
个羟基取代,化合物(2)有4个羟基,化合物(5)则有5个羟
基,多个羟基的取代增加了化合物的抗氧化活性;当苷元与
糖成苷后,羟基数目减少,相应的抗氧化活性也随之降低。
此外,所有具有氧化活性的单体化合物在C环的3,4位都
存在邻二酚羟基结构,而没有抗氧化活性的单体化合物(1)
和(4)则没有此结构。因此,邻二酚羟基结构可能是该类化
合物具有抗氧化活性的必须基团。
3 结语
本试验对黔产苗药野草香中分离得到的黄酮类化合物
分别进行DPPH法和ABTS法抗氧化活性测定。DPPH法
和ABTS法具有相对简单、测试效率高、能连续检测等优
点,对水溶性和脂溶性化合物都适用,也适合野草香黄酮化
合物的抗氧化活性测定。实验结果表明:除了化合物(1)、
(4)在DPPH和 ABTS法中未通过初筛外,其他化合物对
DPPH和ABTS自由基均存在一定的消除能力,并且清除
率在一定抗氧化浓度下都能达到90%以上。通过对IC50的
对比,化合物(2)和(5)的抗氧化能力较好,该研究工作可为
贵州苗药野草香植物资源的进一步开发应用提供理论依
据。
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(编辑:宋勇刚)
Antioxidant Activities of Flavonoids from Miao drug Elsholtzia
cypriani(pam p.)C.Y.Wu et S.Chow
Xiang Ping,Chen Qing*
(Dpartment of Chemistry,School of Chemistry and Chemical Engineering,
Guizhou University,Guiyang 550025,China)
Abstract:Objective:To study the antioxidant activities of flavonoids from Miao drug Elsholtzia cypriani(pam p.)C.Y.Wu et S.
Chow.Methods:The antioxidant and radical scaveging activity of al compounds were evaluated by DPPH and radicals cavenging as-
say.Results:luteolin(2),luteolin-7-O-β-D-gluco-pyranoside(3),quercetin(5),quercetin-3-O-β-D-galactopyranoside(6),quercetin-3-
O-α-L-rhamnoside(7)possess the ability of clearance to both DPPH free radicals and ABTS free radicals,inhibition rate are 9.25±
0.48、11.42±0.54、11.23±0.18、14.87±1.07、39.48±1.16和and 4.69±0.21、4.13±0.03、3.44±0.09、8.52±0.27、23.58±
0.15.Conclusion:radical scavenging assay displayed that compounds(2)and(5)owned the most strong activity.
Keywords:Miao drug;Elsholtzia cypriani;Flavonoids;Antioxidant;DPPH;ABTS
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