全 文 ：川滇桤木（Alnus ferdinandi-coburgii）为桦木科
桤木属植物，为中国特有植物。分布于中国大陆的
贵州、四川、云南等地，在民间被广泛用于治疗鼻衄，
肠炎，痢疾等症。有研究显示，桤木属植物主要含有
二芳基庚烷类化合物〔1〕和齐墩果酸、喜树碱、绿原
酸〔2〕等化学成分，并具有抗氧化活性和抗肿瘤成
分〔3-4〕。现代研究表明：绿原酸对急性咽喉炎症和化
脓性皮肤疾病疗效显著，具有抗菌、利胆、抗病毒、增
加白血球、止血以及兴奋中枢神经系统等多种药理
作用〔5-7〕，有着独特的医疗、保健功能。本实验研究
采用高效液相色谱法测定桤木各部位中绿原酸的含
量，为桤木资源的开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪（美国安捷
伦科技有限公司，包括G1315A/BDAD检测器，
G1313A ALS自动进样器，Agilent 1100色谱工作
站）；SB2200超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份
有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒）；KL-UP-
UV-20超纯水仪（成都唐氏康宁科技发展有限公
司）。
1.2 试药 桤木（采自大理苍山，由大理学院生药
学教研室杨月娥老师鉴定）；绿原酸对照品（中国药
品生物制品检定所，批号：110753-200413）；高效液
相用甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均
HPLC法测定川滇桤木中绿原酸的含量
尹腊梅，杨晓珍，曹艳花，刘 婷，肖培云*
（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）
［摘要］目的：建立HPLC法测定川滇桤木中绿原酸的含量。方法：采用高效液相色谱法，Venusil X BP-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，
5 μm），流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液（8∶92），流速为1.0 mL/min，检测波长为324 nm，柱温25 ℃。结果：绿原酸在0.108 8 μg~
1.088 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均加样回收率为98.98％，RSD=0.77％（n=6）。结论：本法操作简便、快速、稳定性高、
重现性好，可用于川滇桤木中绿原酸含量的测定。
［关键词］川滇桤木；绿原酸；高效液相色谱
［中图分类号］R284 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2013）06-0020-03
Determination of Chlorogenic Acid in Alnus ferdinandi-coburgii by HPLC
YIN Lamei, YANG Xiaozhen, CAO Yanhua, LIU Ting, XIAO Peiyun*
（College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To establish an HPLC method for the determination of chlorogenic acid in Alnus ferdinandi -coburgii.
Methods: We applied highly effective liquid phase chromatography, with Venusil X BP-C18 column （150 mm×4.6 mm,5 μm）and
mobile phase consisted of acetonitrile-0.4％ phosphoric acid solution（8∶92）at a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was
set at 324 nm, and column temperature was 25 ℃. Results: There was good linearity in the range of 0.108 8-1.088 μg （r=0.999 9）
of chlorogenic acid. The average recovery was 98.98%, RSD was 0.77％（n=6）. Conclusion: The method above was simple, sensitive,
accurate, reproducible, and could be applied in the measurement of chlorogenic acid in Alnus ferdinandi-coburgii.
〔Key words〕Alnus ferdinandi-coburgii; chlorogenic acid ; HPLC
［DOI］10. 3969 / j. issn. 1672-2345. 2013. 06. 006
大理学院学报
JOURNALOFDALIUNIVERSITY
第12卷 第6期 2013年6月
Vol.12 No.6 Jun. 2013
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为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Venusil XBP-C18（150 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液（8∶
92）；检测波长：324 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：
25℃；进样量：10 μL。对照品及样品色谱图见图1。
图1 对照品（A）及样品（B）HPLC色谱图
（1-为绿原酸）
2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
5.44 mg于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，即得浓度为0.544 0 mg/mL的储备液。精密移
取储备液1 mL于5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，
得浓度为0.108 8 mg/mL的绿原酸对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取桤木药材粉末1 g，
置100 mL具塞圆底烧瓶中，精密加入60％甲醇25 mL，
密塞，称重，超声处理30 min，用60％甲醇补足减失
重量，用0.45 μm过滤器滤过，即得。
2.4 线性关系考察 精密吸取浓度为0.108 8 mg/mL
的绿原酸对照品溶1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、10.0 μL依
次进样测定。以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为
纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=1 186.6X+
87.123（r=0.999 9），结果表明绿原酸在0.108 8~
1.088 μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取浓度为0.108 8 mg/mL的绿原
酸对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定绿原酸的
峰面积，RSD为0.35％（n=6）。
2.6 稳定性试验 称取同一批次桤木花样品1份，
按“2.3”项下方法操作，按“2.1”项色谱条件在0、2、4、
6、8、12 h进样测定，得绿原酸峰面积的RSD为
0.68％，结果表明样品溶液在12 h内稳定。
2.7 重复性试验 称取同一批次桤木花样品6份，
按“2.3”项下方法操作，按“2.1”项色谱条件进样分
析，结果绿原酸含量的平均值为1.045 mg/g，RSD为
1.36％（n=6）。
2.8 回收率试验 精密称取已知绿原酸含量（1.045
mg/g）的桤木花样品6份，每份约0.5 g，分别精密加入
0.544 mg/mL的对照品储备液1 mL，加60％甲醇24
mL，密塞，称重，超声提取30 min，用60％甲醇补足减
失重量，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，按“2.1”项色谱
条件测定，计算回收率，见表1。
表1 加样回收率试验结果（n=6）
2.9 样品含量测定 分别称取采自大理苍山三个
不同地点的桤木皮、叶、木质、花、果实样品粉末各
1g，采用“2.3”项制备样品液，并在“2.1”项色谱条件
下对其绿原酸的含量进行测定，见表2。
表2 桤木各部位中绿原酸的含量测定结果（n=3）
3 讨论
实验分别以不同提取时间，不同甲醇浓度考察
川滇桤木各部位中绿原酸的提取工艺，实验结果表
明用60％甲醇超声提取30 min可将各部位中绿原酸
提取完全。
实验分别测定了川滇桤木皮、叶、木质、花、果实
称样量/g
样品含
量/mg
加入量/
mg
测得量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/%
0.504 0 0.526 7 0.544 0 1.061 3 98.27
0.501 6 0.524 2 0.544 0 1.019 5 98.40
0.501 8 0.524 4 0.544 0 1.021 3 98.79 98.54 0.65
0.502 0 0.524 6 0.544 0 1.026 7 97.81
0.501 5 0.524 1 0.544 0 1.013 7 99.71
0.498 6 0.521 0 0.544 0 1.055 6 98.27
样品采摘地
皮/
（mg/g）
叶/
（mg/g）
木质/
（mg/g）
花/
（mg/g）
果实/
（mg/g）
大理苍山花甸坝 0.0 0.304 0 0.0 1.045 0 0.0
大理苍山清碧溪 0.0 0.436 1 0.0 1.217 3 0.0
大理苍山感通寺 0.0 0.287 2 0.0 1.196 5 0.0
尹腊梅，杨晓珍，曹艳花，等 HPLC法测定川滇桤木中绿原酸的含量 第 12卷总第 114期
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中绿原酸的含量，结果表明花中绿原酸的含量最高，
达1.2 mg/g（0.12%），与《中国药典》2010年版一部收
载的杜仲叶（≥0.080%）、忍冬藤（≥0.10%）、菊花
（≥0.20%）药材中绿原酸的含量相当，低于药典中
绿原酸含量较高的金银花（≥1.50%）〔8〕，但仍具有
一定的开发利用价值。
在进行流动相的选择时，实验比较了甲醇-水、
甲醇-0.2%磷酸溶液、乙腈-0.4%磷酸溶液等多种不
同配比，结果流动相为乙腈-0.4%磷酸（8∶92）时出峰
时间适当，绿原酸与邻峰能达到较好基线分离，峰的
对称性好，故选择乙腈-0.4%磷酸（8∶92）为该实验的
流动相。
本实验建立的高效色谱法测定桤木中绿原酸的
含量，方法简便、快捷，灵敏度高，稳定性好，测定结
果准确可靠，适用于川滇桤木各部位中绿原酸的含
量测定。
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国医药科技出版社，2010，154-206.
［基金项目］大理学院大学生科研基金资助项目（DXSKYYX201318）
［收稿日期］2013-03-28 ［修回日期］2013-04-19
［作者简介］尹腊梅，药学专业2010级本科生.
*通信作者：肖培云，教授.
（责任编辑 李 杨）
大理学院学报总第 114期 医学
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