全 文 ：吴庆丽.盐桦组织培养技术研究 [ J] .江苏农业科学 , 2010(6):82-83.
盐桦组织培养技术研究
吴庆丽
(成都农业科技职业学院 ,四川成都 611130)
　　摘要:对盐桦组织培养技术进行了研究。结果表明:盐桦脱毒处理后的茎尖在 WPM+2, 4-D0.15 mg/L培养基
上长势较好 ,诱导芽的培养基 WPM+6-BA0.10 mg/L芽分化时间和长势最好 , 继代培养基 MS+6-BA0.35 mg/L
中长势最好 ,生根培养基 1/2MS+IBA0.10 mg/L生根效果好。
　　关键词:盐桦;组织培养;愈伤组织;培养基;诱导芽;继代;生根
　　中图分类号:S792.159.05　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2010)06-0082-02
(上接第 81页)
祁东文等在研究中指出 ,当 6-BA浓度 >2.0 mg/L时容
易出现玻璃化苗 [ 7] 。该现象在本研究中也有表现 ,虽然高浓
度的 6-BA能使增殖系数提高 ,但苗叶小、成簇 、不伸展 ,玻璃
化多 。但本研究也表明在高 6-BA浓度下添加高浓度的
GA3可以使苗长高 ,叶片伸展 。高疆生等的研究表明 GA3对
植物细胞分裂和伸长有促进作用 [ 5] 。本研究结果也表明 ,高
浓度的 GA3 可显著提高增殖系数 , 且 6 -BA浓度超过
2.5mg/L时 , GA3的促进效果很明显 。因此 ,可通过进一步
试验在高浓度 6-BA保证高增殖系数的前提下 ,能否采取一
些措施来避免玻璃化的大量产生 。
参考文献:
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　　盐桦(Betulahalophila)是桦木科桦木属植物 ,被列为国
家二级珍稀濒危植物 ,原生地已濒临灭绝的小乔木树种 ,仅存
于我国新疆阿勒泰地区 ,一旦灭绝 ,在我国乃至世界植物名录
上即永远消失 [ 1] 。对其进行研究保护是当务之急 ,建立盐桦
组培培养体系 ,可营救、保存盐桦种质资源 ,为抗盐生理的研
究以及盐碱地的造林绿化提供优质苗木 。
本研究旨在探讨不同浓度的植物生长调节物质 2, 4-D
对盐桦愈伤组织诱导的影响 ,不同浓度的植物生长调节物质
6-BA对盐桦不定芽诱导继代培养的影响 ,不同浓度的植物
生长调节物质 IBA和 NAA对盐桦生根的影响 ,以期为盐桦的
组织培养体系的建立提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
取 2年生盐桦苗茎尖 ,装入采集袋待处理 。
1.2　方法
1.2.1　外植体的预处理　将采集的盐桦茎尖带回实验室用
收稿日期:2010-01-26
作者简介:吴庆丽(1979—),女 ,湖北十堰人 ,硕士 ,讲师 ,主要从事病
虫害防治 、植物组织培养的教学科研工作。 E-mail:wuqingli0308
@ 126.com。
自来水冲洗 15 min。
1.2.2　外植体的灭菌　将冲洗干净的盐桦茎尖先在 70%的
酒精中浸泡 30 ～ 60s;再转入 0.1%升汞中浸泡 5 ～ 10min,再
用无菌水洗涤 5 ～ 6次 。然后用无菌滤纸吸干茎段表面的液
体后待用 。
1.2.3　愈伤组织诱导　将灭过菌的外植体接种到植物生长
调节物质浓度不同的 WPM培养基上。设 3个处理:(1)
WPM+2 , 4-D0.10 mg/L;(2)WPM+2 , 4-D0.15 mg/L;
(3)WPM+2 , 4 -D0.20 mg/L。以上培养基均加琼脂粉
5 g/L、蔗糖 30g/L。以 MS和 1 /2MS培养基作为对照 。每种
培养基 5瓶 , pH值为 5.8 ～ 6.2 ,接种后每周观察 3次 。培养
条件为:日间温度为 25℃,夜间温度为 18℃,弱光培养(光照
强度 1 000 ～ 2 000lx),培养 20d左右进行统计并可转接到诱
导芽的培养基上进行不定芽的诱导 。
1.2.4　不定芽的诱导　取无污染 、颜色翠绿 、生长旺盛的愈
伤组织 , 接种到植物生长调节物质浓度不同的培养基上 。设
4个处理:(1)WPM+6-BA0.08 mg/L;(2)WPM+6 -BA
0.10 mg/L;(3)WPM+6-BA0.12 mg/L;(4)WPM+6-BA
0.15 mg/L。以上培养基均加琼脂粉 5 g/L、蔗糖 30 g/L。每
种培养基 5瓶 , pH值为 5.8 ～ 6.2 ,接种后每周观察 3次 。培
养条件为:温度为 25℃,弱光培养 ,培养 20 d左右即可转接
到继代培养基上进行继代培养 。
—82— 江苏农业科学　2010年第 6期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.06.180
1.2.5　继代增殖培养 　设 7个处理:(1)MS+6 -BA
0.10 mg/L;(2)MS+6 -BA0.15 mg/L;(3)MS+6 -BA
0.20 mg/L;(4)MS+6 -BA0.25 mg/L;(5)MS+6 -BA
0.30 mg/L;(6)MS+6 -BA0.35 mg/L;(7)MS+6 -BA
0.40 mg/L。以上培养基均加琼脂粉 5g/L、蔗糖 30g/L。每种
培养基 5瓶 , pH值为 5.8 ～ 6.2 ,接种后每周观察 3次 。培养
条件为:温度为 25℃,弱光培养 ,培养 30 d左右即可转接到
生根培养基上进行生根培养。
1.2.6　生根培 养 　设 8 个处理:(1)1/2MS+IBA
0.08 mg/L;(2)1 /2MS+IBA0.10 mg/L;(3)1 /2MS+IBA
0.12 mg/L;(4)1 /2MS+IBA0.15 mg/L;(5)1 /2MS+NAA
0.08 mg/L;(6)1 /2MS+NAA0.10 mg/L;(7)1 /2MS+NAA
0.12 mg/L;(8)1 /2MS+NAA0.15 mg/L。以上培养基均加
琼脂粉 5g/L、蔗糖 15g/L。每种培养基 5瓶 , pH值为 5.8 ～
6.2,接种后定时观察。培养条件为:温度为 25℃,弱光 。
2　结果与分析
2.1　愈伤组织诱导培养
试验结果 ,在 MS、1 /2MS、WPM供试培养基中 ,灭过菌的
盐桦茎尖在 WPM中形成愈伤的速度最快 ,在 MS中死亡严
重 ,在 1/2MS中形成的愈伤速度缓慢 。 20 d以后观察愈伤组
织 ,发现在 WPM培养基上 , 植物生长调节物质 2 , 4 -D为
0.15 mg/L时长势最旺盛 ,愈伤组织块大且翠绿(表 1),表明
WPM+2 , 4-D0.15mg/L+琼脂粉 5 g/L+蔗糖 30 g/L为诱
导盐桦愈伤组织的最佳培养基 。
表 1　不同 2.4-D浓度对盐桦茎尖诱导愈伤组织的影响
培养基 2.4-D浓度(mg/L) 愈伤组织生长情况
1 0.10 生长缓慢
2 0.15 长势旺盛
3 0.20 生长缓慢
2.2　不定芽诱导培养
试验结果 ,在植物生长调节物质为 0.10mg/LWPM培养
基上 ,盐桦不定芽长势最好(表 2)。
表 2　不同 6-BA浓度对盐桦不定芽诱导的影响
培养基 6-BA浓度(mg/L) 不定芽生长情况
1 0.08 长势缓慢
2 0.10 长势旺盛
3 0.12 长势缓慢
4 0.15 几乎不长
2.3　继代增殖培养
试验结果发现 ,在继代培养时 , 盐桦不定芽在 WPM+不
同浓度的 6-BA培养基上长势较慢 。因此 ,选用了 MS作为
继代培养基 ,结果发现在 MS培养基上 , 6-BA0.35mg/L时
长势最好最快 , 24 d后观察 ,增殖倍数是 4 ,较为合理(表 3)。
我们在工厂化生产组培苗时候 ,需要生长速度快而且较为健
壮的不定芽 ,表明添加 0.35 mg/L6-BA的 MS培养基为最
理想的继代增殖培养基 。
2.4　生根培养
试验结果 ,盐桦不定芽在 1/2MS+IBA0.10mg/L+琼脂
粉 5 g/L+蔗糖 15 g培养基上生根效果最好(表 4、表 5)。
表 3　不同浓度的 6-BA对盐桦继代增殖培养的影响
培养基 6-BA浓度(mg/L) 生长情况
1 0.10 不生长
2 0.15 不生长
3 0.20 不生长
4 0.25 长势缓慢
5 0.30 长势缓慢
6 0.35 长势旺盛
7 0.40 生长缓慢
表 4　不同浓度的 IBA对盐桦生根的影响
培养基 IBA浓度(mg/L) 生根情况
1 0.08 根粗壮 ,疏松
2 0.10 根粗壮 ,密集
3 0.12 根粗壮 ,疏松
4 0.15 根粗壮 ,疏松
表 5　不同浓度的 NAA对盐桦生根的影响
培养基 NAA浓度(mg/L) 生根情况
5 0.08 根细弱 ,疏松
6 0.10 根细弱 ,密集
7 0.12 根细弱 ,疏松
8 0.15 根细弱 ,疏松
3　讨论
试验结果 , WPM+2 , 4 -D0.15 mg/L+琼脂粉 5 g/L+
蔗糖 30 g/L为诱导盐桦愈伤组织的最佳培养基;添加
0.1mg/L的 WPM培养基为诱导盐桦不定芽的最佳培养基;
添加 0.35 mg/L6-BA的 MS培养基为最理想的继代增殖培
养基;盐桦不定芽在 1/2MS+IBA0.10 mg/L+琼脂粉 5 g/L
+蔗糖 15 g/L培养基上生根效果最好 。
在植物组织培养中 ,某些植物的培养体系建立和继代培
养可以在同一种培养基上连续进行 ,只要隔一定时间转移到
新鲜的培养基中即可。某些植物种无论是茎尖还是愈伤组
织 ,用于培养体系建立的培养基 ,不适合继代培养 ,若转移到
原来的培养基中 ,不是生长不良就是逐渐变褐死亡 ,原来的培
养基应进行调整或调换新的培养基 ,盐桦属于这一类型植物 。
试管苗生根趋向于用基本培养基的一半浓度 (1/2MS
等)降低无机盐及其他成分的浓度 ,只添加少量生长素 ,或不
加生长素将新梢基部在生长素溶液中浸泡一定时间 ,获得较
好的生根效果 。
本试验已初步对盐桦组织培养体系进行了筛选 ,获得了
一定的效果 。本试验仅对盐桦愈伤组织生长 、不定芽生长状
况和生根效果进行了初步研究 ,今后还将继续筛选更合适的
培养基 ,以获得更好的培养效果 。
参考文献:
[ 1]梅新娣 ,张富春 ,曾幼玲.濒危植物盐桦的组织培养及快速繁殖
[ J] .植物生理学通讯 , 2004, 40(6):714.
—83—吴庆丽:盐桦组织培养技术研究