全 文 ：·科技简报·
［基金项目］贵州省中药现代化项目（编号：２０１１５０２２）；贵州省科技计划项目（编号：２００９４００１）；贵阳市科技计划项目（编号：２００９９３０４）；贵州省
中药现代化项目（编号：２０１１５０８１）　［作者简介］张桂青，女，在读硕士，主要从事天然产物化学及质量标准研究，电话：０８５１－６９０８４６８，Ｅ－ｍａｉｌ：
ｘｉａｏｃａｏ８８９１０４１３＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］兰燕宇，女，学士，教授，主要从事中药新药研究开发，电话：０８５１－６９０８８９９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｙｏｎｇｊｕｎ０２６＠
１２６．ｃｏｍ
高效液相色谱法测定隔山消积颗粒中
白首乌二苯酮的含量
张桂青１，李勇军１，刘佳１，周雯１，黄勇１，王爱民１，赵
义雄２，兰燕宇１　 （１．贵阳医学院药学院，贵州 贵阳
５５０００４；２．贵州飞云岭药业股份有限公司，贵州 凯里
５５６０００）
［摘要］　目的：建立高效液相色谱法测定隔山消积颗粒中白
首乌二苯酮的含量。方法：色谱柱为 Ｇｅｍｉｎｉ　Ｃ１８柱（５μｍ，
４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ），流动相为乙腈－０．１％磷酸水溶液（１７∶
８３），流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长为２８０　ｎｍ。结果：白首
乌二苯酮在２１．２４～３３９．８４　ｎｇ范围内线性关系良好（ｒ＝
０．９９９　９），平均回收率为１０１．３％，ＲＳＤ为１．４％（ｎ＝６）。结
论：该方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。
［关键词］　高效液相色谱法；隔山消积颗粒；白首乌二苯酮
［中图分类号］Ｒ９２７．２　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－
５２１３（２０１２）１８－１４９８－０２
　　隔山消积颗粒是以隔山消为主药，配以马兰草，采用水
煎煮制备而成，具有消积行气的功效，用于脾胃气滞所致的
食积内停、脘腹胀痛等，为苗族常用药。隔山消积颗粒现行
标准［１］为以两味药材ＴＬＣ鉴别和测定颗粒水解后苷元的量
来控制产品质量，但缺乏专属性的含量测定。为了增加隔山
消积颗粒专属性的含量测定方法，本课题组根据其制备工艺
对其主药隔山消的水煎煮部位化学成分进行分析、分离、制
备等研究，将从中分离得到的具有代表性和专属性的化学成
分白首乌二苯酮（ｂａｉｓｈｏｕｗｕｂｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ）作为对照品，建立
高效液相色谱法测定隔山消积颗粒中白首乌二苯酮的含量。
１　材料
岛津Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ　ＬＣ－２０Ａ高效液相色谱仪系列：ＣＢＭ
－２０Ａｌｉｔｅ系统控制器，ＬＣ－２０ＡＤ二元梯度溶剂输送泵，
ＳＰＤ－２０Ａ 紫外检测器，ＳＩＬ－２０Ａ 自动进样器；ＣＴＯ－
１０ＡＳｖｐ柱温箱；白首乌二苯酮对照品（本实验室自制，经
ＨＰＬＣ检查，用面积归一化法计算，纯度大于９８％）；隔山消
积颗粒由贵州飞云岭药业股份有限公司提供；乙腈为色谱
纯，磷酸为优级纯，水为注射用水，其余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　色谱柱：Ｇｅｍｉｎｉ　Ｃ１８柱（５μｍ，４．６　ｍｍ×２５０
ｍｍ）；流动相：乙腈－０．１％磷酸水溶液（１７∶８３）；流速：１．０ｍＬ
·ｍｉｎ－１；检测波长：２８０　ｎｍ；柱温：３５℃；进样量：１０μＬ。
２．２　溶液的制备
２．２．１　对照品溶液　精密称取白首乌二苯酮对照品１０．６２
ｍｇ，置１０　ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密
量取１　ｍＬ，置２５　ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得
（每１　ｍＬ含白首乌二苯酮０．０４２　４８　ｍｇ）。
２．２．２　供试品溶液　取装量差异项下的本品，研细，取２　ｇ，
精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇１０　ｍＬ，称重，超
声处理（功率２５０　Ｗ，频率５０　ｋＨｚ）２０　ｍｉｎ，放冷，称重，用甲
醇补足减失的质量，混匀，高速离心 １０　ｍｉｎ（１０　０００　ｒ·
ｍｉｎ－１），取上清液，即得。
２．２．３　阴性样品溶液　按本制剂的处方、工艺制成缺隔山
消的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶
液。
２．３　系统适用性试验　取上述对照品溶液、供试品溶液和
阴性对照溶液按色谱条件进样测定，见图１。由图１可见，样
品中白首乌二苯酮与其他峰分离良好，分离度大于１．５，理论
塔板数不低于８　０００，其色谱峰的保留时间与对照品的一致，
缺隔山消药材的阴性对照未见对应色谱峰。
图１　高效液相色谱图
Ａ．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ．阴性对照样品；１－白首乌二苯酮
Ｆｉｇ　１　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ＨＰＬＣ
Ａ．ｓｔａｎｄａｒｄ；Ｂ．ｔｅｓｔ　ｓａｍｐｌｅ；Ｃ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｓａｍｐｌｅ；１－Ｒａｄｉｘ　Ｃｙｎａｎｃｈｉ
ｂｕｎｇｅｉ　ｂｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ
２．４　线性关系考察　分别精密吸取对照品溶液０．５，１，２，４，
８　ｍＬ，置１０　ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色
谱条件进样。以白首乌二苯酮峰面积（Ｙ）为纵坐标，进样量
（Ｘ，ｎｇ）为横坐标，进行回归计算，得线性回归方程：Ｙ＝
２　１８２．８　Ｘ－１　０２７．７，ｒ＝０．９９９　９。结果表明，白首乌二苯酮
在２１．２４～３３９．８４　ｎｇ范围内峰面积与进样量具有良好的线
性关系。
２．５　精密度试验　精密吸取按“２．２．２”项下方法制备的供
试品溶液１０μＬ注入液相色谱仪，连续进样６次，测定峰面
积。结果显示，峰面积的ＲＳＤ为１．５％（ｎ＝６）。
２．６　重现性试验　精密称取同一批样品，分别按“２．２．２”项
下方法，平行制备６份进行测定，结果白首乌二苯酮测定值
重现性良好，含量平均值为０．０４２　６９　ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ为１．２％
（ｎ＝６）。结果表明方法重现性良好。
２．７　稳定性试验　精密称取同一供试品，按“２．２．２”项下方
法制备供试液，分别于０，１，２，４，８　ｈ进样，结果峰面积平均值
为１８８　９８７，ＲＳＤ为１．１％。结果表明供试品溶液在８　ｈ内稳
定。
２．８　回收率试验　精密称取已知含量的样品６份，各１　ｇ，
置具塞三角瓶中，各精密加入白首乌二苯酮对照品，按
“２．２．２”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率及
·８９４１· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第１８期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｓｅｐ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．１８
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2012.18.002
其ＲＳＤ。结果见表１。
表１　回收率试验结果（ｎ＝６）
Ｔａｂ　１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏ　ｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔｓ（ｎ＝６）
样品含
量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测出量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回
收率／％
ＲＳＤ
／％
０．０４２　９８　０．０４２　４８　０．０８６　３２　 １０２．０
０．０４２　６９　０．０４２　４８　０．０８５　３６　 １００．４
０．０４２　４８　０．０４２　４８　０．０８４　８６　 ９９．７５
０．０４２　６９　０．０４２　４８　０．０８６　６４　 １０３．５　 １０１．３　 １．４
０．０４２　０５　０．０４２　４８　０．０８４　５９　 １００．１
０．０４２　６４　０．０４２　４８　０．０８６　０５　 １０２．２
２．９　样品测定　按上述含量测定方法，分别对１０批进行含
量测定。结果见表２。
表２　样品含量测定结果（ｎ＝２）
Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅｓ（ｎ＝２）
批号 含量／ｍｇ·ｇ－１ 批号 含量／ｍｇ·ｇ－１
２００８１１０３　 ０．０４３　１　 ２０１００７０１　 ０．０３４　７
２００９０５０１　 ０．０３１　６　 ２０１００８０１　 ０．０４１　６
２００９０５０２　 ０．０４３　３　 ２０１００９０１　 ０．０３７　７
２０１００４０１　 ０．０４０　１　 ２０１００９０２　 ０．０３５　１
２０１００６０１　 ０．０４１　２　 ２０１０１００１　 ０．０３２　２
［基金项目］湖北省重大科技攻关项目（编号：２００７ＡＡ３０１Ｂ０６－１）　［作者简介］熊登科，男，工程师，研究方向：从事中药质量标准研究及新药开
发，电话：０２７－８４５１４００２，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｄｋ０４００１＠１６３．ｃｏｍ
３　讨论
３．１　指标成分的选择　据文献报道，隔山消含苯酮类、Ｃ２１
甾体类、氨基酸等多种化学成分［２－４］。试验通过缺隔山消的
阴性样品、隔山消样品、隔山消积颗粒样品特征图谱的对比，
选择隔山消积颗粒中隔山消的专属性成分白首乌二苯酮为
指标成分，建立隔山消积颗粒专属性的含量测定方法。
３．２　检测波长的选择　在１９０～４００　ｎｍ之间进行紫外光谱
扫描，白首乌二苯酮在２１４，２８０，３１５　ｎｍ处有最大吸收。在
２８０　ｎｍ处进样测定，基线平稳，图谱分离较好，且阴性对照
无干扰，故选择２８０　ｎｍ为测定波长。
３．３　流动相的选择　试验考察了乙腈－０．１％醋酸水、乙腈
－０．１％甲酸水、乙腈－０．１％磷酸３种流动相体系，结果０．１％
磷酸能明显改善白首乌二苯酮的峰形，大大提高柱效，故选
择在水相中加入０．１％磷酸。
３．４　提取方法的选择　试验采用超声提取法，考察了不同
提取溶剂和不同提取时间。结果表明，甲醇超声提取２０　ｍｉｎ
提取效果较好。
参考文献：
［１］　国家药品监督管理局．国家中成药标准汇编［Ｓ］．内科脾胃分
册，２００２：２８８－２９２．
［２］　喻樊．白首乌的化学成份及药理活性研究［Ｊ］．海峡药学，
２００８，２０（１０）：８６－８９．
［３］　ＳＵＮ　Ｙｉｎ－ｓｈｉ，ＬＩＵ　Ｚｈｅｎｇ－ｂｏ，ＷＡＮＧ　Ｊｉａｎ－ｈｕａ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｅｐａｒａ－
ｔｉｏｎ　 ａｎｄ　 ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　 ｏｆ　 ｂａｉｓｈｏｕｗｕｂｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ， ４－
ｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ　ａｎｄ　２，４－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ　ｆｒｏｍ
Ｃｙｎａｎｃｈｕｍ　ａｕｒｉｃｕｌａｔｕｍ　ｒｏｙｌｅ　ｅｘ　Ｗｉｇｈｔ　ｂｙ　ＨＳＣＣＣ［Ｊ］．Ｃｈｒｏ－
ｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ，２００９，７０（７）：１－６．
［４］　徐凌川，张华，许昌盛．白首乌化学成分与药理现代研究述评
［Ｊ］．中医药学刊，２００３，２１（１１）：１８９３－１８９５．
［收稿日期］２０１２－０１－１３
小儿牛黄退热巴布贴的质量标准考察
熊登科１，黄志军１，熊富良１，邓瑜２，陈鹏１　 （１．武汉健
民药业集团股份有限公司，湖北 武汉４３００５２；２．湖北省医药
学校，湖北 武汉４３００６４）
［摘要］　目的：建立小儿牛黄退热巴布贴的质量标准。方
法：采用ＴＬＣ法对小儿牛黄退热巴布贴中体外培育牛黄、金
银花、薄荷脑进行定性鉴别。采用 ＨＰＬＣ法测定制剂中栀子
苷的含量，色谱柱为 ＫｒｏｍａｓｉＬ　Ｃ１８（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５
μｍ）；流动相为水－乙腈－磷酸（８６∶１４∶０．０１）；流速１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测波长２３８　ｎｍ；采用ＧＣ法，用挥发油提取器蒸馏
制备供试品溶液，以奈作为内标物，测定制剂中薄荷脑含量，
以Ｋｒｏｍａｔ　ＫＢ－１３０１（３０　ｍ×０．５３　ｎｍ，１．０μｍ）毛细管柱为气
相色谱柱，载气：氮气压力４０　ｋＰａ，流速为２．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱
温１２０℃，分流比５０∶１，进样口／检测器温度２５０℃，氢火焰
离子检测器。结果：所采用的ＴＬＣ方法能有效鉴别出体外
培育牛黄、金银花、薄荷脑；栀子苷在０．１６８～２．６８８μｇ内呈
良好的线性关系（ｒ＝０．９９９　９），平均回收率为９９．５６％，ＲＳＤ
为１．２８％。薄荷脑在０．０７７５～１．５４９μｇ范围内线性关系良
好（ｒ＝０．９９９　５），平均回收率为９８．４８％，ＲＳＤ为１．８９％。结
论：该法操作简单，结果准确，专属性强，可用于小儿牛黄退
热巴布贴的质量控制。
［关键词］　小儿牛黄退热巴布贴；薄层扫描法；胆酸；去氧胆
酸；金银花；薄荷脑；高效液相色谱法；气相色谱法
［中图分类号］Ｒ９４３　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３
（２０１２）１８－１４９９－０４
　　小儿牛黄退热巴布贴为武汉健民药业集团股份有限公
司自主研制的中药复方六类新药，主要由栀子、体外培育牛
黄、金银花、荆芥、薄荷脑等经由现代制剂工艺精制而成，具
有退热解表，清热解毒的功效，用于小儿外感风热所致的急
性上呼吸道感染轻、中度发热症［１］。栀子具有解热之功
效［２－３］。为有效控制该制剂质量，本试验采用薄层色谱法对
制剂中主要药味体外培育牛黄、金银花、薄荷脑进行定性鉴
别，采用高效液相色谱法和气相色谱法对方中栀子及薄荷脑
进行了定量分析。
１　材料
１．１　仪器　Ｄｉｏｎｅｘ高效液相色谱仪 （ＵＶＤ１７ＯＵ 检测器、
ＣｈｒｏｍｅＬｅｏｎ化学工作站）；Ａｇｉｌｅｎｔ　６８９０气相色谱仪；超声仪
（功率２５０　Ｗ，４０　ｋＨｚ，上海船舶电子研究所）；９８９－薄层色谱
制板器（四川省中药研究所重庆贝可得仪器技术公司）。
１．２　药品与试剂　栀子苷对照品（批号１１０７４９－２００５１２，供
含量测定用）、胆酸（批号１０００７８－２００４１４，供含量测定用）、去
氧胆酸对照品（批号１１０７２４－２００２０７，供含量测定用）、金银花
对照药材（批号１１０７２８－２００３０７，供鉴别用）、薄荷脑对照品
（批号１１０７２８－２００５０６，供含量测定用），上述药材均购自中国
药品生物制品检定所。甲醇、乙腈为色谱纯；水为二次纯化
水，其他试剂均为分析纯。小儿牛黄退热巴布贴（批号
２０１００９０８、２０１００９０９、２０１０１０１１，规格６　ｃｍ×６　ｃｍ）由武汉健
·９９４１·中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第１８期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｓｅｐ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．１８