全 文 ：·论著·
高效液相色谱法测定独角莲膏中连翘苷的含量
朱俊德1 , 余资江1 , 龚明2■
(1.贵阳医学院基础医学院人体解剖学教研室 ,贵州 贵阳　550004;2.贵州益佰制药股份有限公司药物研究所,贵州 贵阳　550002)
[项目基金] 贵阳医学院青年教师基金资助项目(№:K2007-61 、67)
■[通讯作者] 贵州益佰制药股份有限公司药物研究所 E-mail:ZJD@gmc.edu.cn
　　【摘要】　目的　建立用高效液相色谱(H PLC)测定独角莲膏中连翘苷的含量的方法。方法　采用 Hyper sil
ODS2(5.0×200mm)色谱柱 , 乙腈与水(24:76)的混合液为流动相;流速为 1.0 ml/ min , 柱温为 30 ℃, 检测波长 227
nm。结果　连翘苷进样量在 0.1424 μg ～ 0.712 μg 时线性良好(r=0.99998), 平均回收率为 99.22%, RSD 为
2.16%。结论　该方法准确 、简便 、重现性好 、专属性强 , 可用于该产品中连翘苷含量的测定。
【关键词】　植物制剂;色谱法;高效液相;连翘苷;独角莲膏
【中图分类号】　R331　　　【文献标识码】　A
Determination of Phillyrin of Dujiaoliangao by HPLC
Z HU Jun-de1 , YU Zi-j iang 1 , GONG Ming 2
(1.Department o f Anatomy , Guiyang Medical College , Guiyang 550004;2.Department o f Drug
Research Guizhou Yibai Pharmacy Co Ltd , Guiyang 550002 ,China)
【Abstract】　Objective　To establish a method to determine the content of philly rin of Dujiao liangao
by HPLC.Methods　The column used in the analy sis w as Hypersi l ODS2(5.0×200 mm)w ith the
temperature o f 30℃ and de tected at 227nm , w ith the mobile phase of ace tonit ri le and w ater(24:
76).The f low rate of the mobile phase w as 1.0ml/min.Results　The linear range of philly rin w as
0.1424μg ～ 0.712μg(r=0.99998).The ave rage recovery rate w as 99.22%w ith a RSD of 2.16%.
Conclusion　The method is accurate and simple w ith a good reproducibi li ty , and can be used to de-
termine the content o f philly rin o f Dujiaoliangao.
【KeyWords】　plant prepara tions;chromatog raphy;high pressure liquid;Philly rin;Dujiao liangao
　　独角莲膏系《朱仁康临床经验集》中的经验方 ,由
独角莲 、皂角刺 、白芷 、防己 、银花 、连翘 、生南星 、刺猬
皮 、山甲片 、当归 、海桐皮 、苏木 、海带 、大麻仁 、豨莶 、干
蟾 、乳香 、没药与血余等组成 ,具有提脓拔毒 ,消肿轻
坚。临床上用于主治痈肿 ,毛囊炎 ,瘢痕疙瘩 ,神经性
皮炎等。由于该制剂的药材较多 ,组成复杂 ,且每一种
成分的含量偏底。其中连翘中主要含连翘苷 、连翘酚 、
连翘酯苷 、齐墩果酸 、松脂素 、樟脑 、龙脑等成分[ 1] 。对
连翘的含量测定 ,文献报道较多的是连翘中连翘苷的
含量测定 ,其含量测定方法有高效液相色谱法 、薄层扫
描法 、薄层-分光光度法等[ 2 ～ 5] 。为了更好控制该制
剂的质量 ,故对该制剂中连翘苷的含量进行高效液相
色谱测定。结果表明 ,该方法准确 、简便 、重现性好 、专
属性强 ,可用于该产品中连翘苷含量的测定。
1 材料与方法
1.1 仪器 岛津 LC-10A tvp 高效液相色谱仪 , LC-
10A tvp 输液泵;SPD-M10Avp 二级阵列检测器;
SCL-10Avp 系统控制器;CTO-10Asvp 恒温柱箱;
CLASS-VP6.1工作站数据处理系统;微量进样器
(25μL), HAM ILTON 公司;超声波清洗机(250W ,
北京市医疗设备二厂)。
1.2 试药 乙醚(分析纯)、正丁醇(分析纯)、甲醇
(分析纯)、乙醇(分析纯)、乙腈(色谱醇),水为重蒸馏
水 ,连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所提供 ,批
号:0821-200104)。
1.3 色谱条件 色谱柱:Hype rsil ODS2(5.0 ×
200mm)大连伊利特;流动相:乙腈-水(24∶76);检测
波长:227 nm(图 1);流速:1.0 m l/min;柱温:30 ℃;
进样量:5 μl。
1.4 溶液的制备
1.4.1 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品
适量 ,加甲醇制成每1 ml含 0.0715 mg 的溶液 ,即得 。
1.4.2 供试品溶液的制备 精密量取的本品 10
m l ,加水 20 ml ,用乙醚提取至乙醚层无色 ,取水层 ,
加水饱和的正丁醇提取 6次(30 m l 、20 ml 、20 ml 、20
6 SICHUAN JOURNAL OF ANATOMY VOL.18　NO.1　2010
ml 、20 m l 、20 ml),合并正丁醇提取液 ,蒸干 ,残渣加
甲醇溶解并转移至 10m l 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续滤液 5 m l ,置蒸发皿中 ,
蒸至近干 ,加中性氧化铝 1g 拌匀 ,加于中性氧化铝柱
(200目 ,内径 1.5 cm)上 ,用 80%乙醇 120 ml洗脱 ,
收集洗脱液 , 浓缩至干 ,残渣加甲醇溶解后转移至
5ml量瓶中 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜(0.45
μm)滤过 ,即得。
1.4.3 系统适用性试验 分别取连翘苷对照品溶
液 、阴性供试品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪 ,
记录色谱(图 2 、3 、4)。从图中可见 ,连翘苷的保留时
间约为 4.7分钟 ,阴性样品色谱图在连翘苷峰位置处
无假阳性峰 ,连翘苷和相近的杂质峰分离完全 ,即本
实验条件下连翘苷与其他组分分离完全 。
2　结果与讨论
2.1 线性关系考察 精密称取连翘苷对照品 14.24
mg ,置 100 ml量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,制成连
翘苷标准溶液(0.1424 mg/ml)。精密吸取 0.1424
mg/ml的连翘苷标准溶液 2.0 、4.0 、6.0 、8.0 ml 、
10.0 m l ,分别置 10 ml量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,
摇匀 。分别精密吸取上述五种溶液各 5μl注入液相
色谱仪 ,记录色谱 ,以峰面积为纵坐标 、进样量为横坐
标进行线性回归计算 , 得线性回归方程为:A =
2710238.59×X+9341.03 , r=0.99998 ,连翘苷进样
量在 0.1417μg ～ 0.7119μg 之间呈现良好的线性关
系 ,相对偏差为 0.0073%。
2.2 精密度试验 精密吸取连翘苷对照品溶液
(0.0715 mg/ml)5 μl ,注入液相色谱仪 ,测定峰面积 ,
重复进样 5次 ,结果 RSD为 0.528%。
2.3 重现性试验 精密量取本品 10 ml ,按上述方
法制备 5份供试液 ,分别进样 ,测定连翘苷含量 ,结果
连翘苷平均含量为 0.07311 mg/ml ,RSD为 1.02%。
2.4 稳定性试验 取同一供试品 ,分别于 0 、1 、2 、4 、
8小时测定 ,结果连翘苷平均峰面积 RSD为 0.59%,
表明供试品在 8小时内稳定性良好 。
2.5 回收率试验 分别精密吸取供试液 5 份样品
各 5μl注入液相色谱仪 ,记录色谱 ,测定含量 ,计算回
收率(结果见表 1 、图 4)。平均回收率为 99.22%,
RSD为 2.16%。
表 1　制剂供试品中连翘苷的回收率试验
试验
样品量
(ml)
含连翘苷
(mg)
加入
连翘苷
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均
回收率
(%)
RSD
次数
(%)
1 5 0.3651 0.7016 96.25
2 5 0.3651 0.7109 98.91
3 5 0.3651 0.3496 0.7092 98.43 99.22 2.16
4 5 0.3651 0.7211 101.8
5 5 0.3651 0.7172 100.7
2.6 样品测定 分别精密吸取 3分供试品溶液分
别进样 5 μl ,注入色谱仪 ,按上述色谱条件进行测定 ,
计算样品中连翘苷的平均含量 ,分别为 0.07128 mg/
ml 、0.07579 mg/ml 、0.07717 mg/ml , RSD 分别为
2.14%、2.16%、2.18%。
3 讨论
独角莲膏为复方制剂 ,成份复杂 、杂质多 ,应先用
乙醚除去部分杂质 ,再用水饱和的正丁醇为提取剂提
取等方法处理后 ,可除去干扰杂质 ,使样品中连翘苷
与其他成分得到较好地分离。据文献资料报道[ 1] ,连
翘主要化学成分含连翘苷 、连翘酚 、连翘酯苷 、齐墩果
酸 、松脂素 、樟脑 、龙脑等成分。在本实验条件下 ,连
翘苷分离效果好 ,达到基线分离 ,且在 4.7 min 内即
可分离完毕 。且无其它成份干扰 ,利于连翘苷含量测
定 。我们本次测定结果 ,与其他含连翘复方制剂中连
翘苷含量保留时间上有所不同[ 2 ～ 5] ,估计可能是由于
复方制剂不一致所致 。综合考虑以上因素 ,采用高效
液相色谱法测定制剂中连翘苷含量 ,本方法具有简
便 、准确 ,重现性好的特点。可以作为连翘苷的质量
控制检测方法。
参考文献
[ 1] 中华人民共和国卫生部.药品标准(中药成方制剂第六册)[ M] .北
京:人民卫生出版社 , 1992.19.
[ 2] 张 果 ,李发荣 ,段飞 ,等.不同采收期连翘叶中连翘苷、连翘酯苷和
芦丁的含量测定[ J] .天然产物研究与开发 , 2005 ,(17):790～ 793.
[ 3] 王爱民.HPLC 法测定一枝黄花抗感颗粒中连翘苷含量[ J] .中国
新药杂志 , 2005 ,(9):l167～ l169.
[ 4] 李杰滨 ,梁云霞.高效液相色谱法测定维 c 银翘片中连翘苷含量
[ J] .中国药业 , 2007 , 16(12):41～ 43.
[ 5] 麻琳瑜.HPLC 法测定小儿退热口服液中连翘苷含量[ J] .云南中
医中药杂志 , 2008 , 12(4):40～ 51.
7四川解剖学杂志 2010年　第 18卷　第 1期