全 文 ：第４７卷第１期 华中师范大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．４７ Ｎｏ．１
２０１３年２月 ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＨＵＡＺＨＯＮＧ　ＮＯＲＭＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．） Ｆｅｂ．２０１３
收稿日期：２０１２－０６－０７．
基金项目：国家自然科学基金项目（３０８７０２５４；３１０７０３１３）．
＊通讯联系人．Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｚｏｕ＠ｃｔｇｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
文章编号：１０００－１１９０（２０１３）０１－００６０－０３
吉祥草根茎中一个甾体皂苷的提取与含量测定
王　倩，程　凡，刘呈雄，邹　坤＊
（三峡大学 化学与生命科学学院 天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北 宜昌４４３００２）
摘　要：采用醇提、溶剂萃取和色谱分离等手段从吉祥草根茎中分离提取得到一个已知化合物甾
体皂苷ＲＣＥ－４，该化合物具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡的作用．该文建立了高效液相色谱技术测
定ＲＣＥ－４含量测定方法，色谱条件为：Ｖｅｎｕｓｉｌ　ＸＢＰＣ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ．ｉｄ．，５μｍ）色谱柱，乙
腈－水（４５∶５５）为流动相，恒定流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２０３ｎｍ，柱温２５℃．测得吉祥草根
茎中ＲＣＥ－４的含量为０．１２２９％．ＲＣＥ－４在０．０３２５～１．３ｍｇ／ｍＬ范围内与色谱峰面积呈良好的线
性关系，ｒ＝０．９９９９７，平均回收率为１００．０５％，ＲＳＤ（ｎ＝５）为１．７４％．该方法简便准确，重现性好，
可以作为吉祥草中ＲＣＥ－４的含量测定方法，并为吉祥草药材质量标准建立奠定基础．
关键词：吉祥草；高效液相色谱法；甾体皂苷；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４ 文献标识码：Ａ
　　吉祥草，又名玉带草、观音草、松寿兰、小青胆
等，为百合科吉祥草属植物吉祥草［Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒ－
ｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ．］的全草，以其全草入药，具有
润肺止咳、接骨、平喘、祛风除湿等功效，现代药理
研究表明吉祥草具有抗真菌［１］、溶血、止血、化痰、
抗炎［２］、灭杀钉螺［３－５］及抑制磷酸二酯酶［６］等活性．
吉祥草在民间用于抗类风湿性关节炎，具有良好的
疗效，且副作用少，并已收录为《湖北省中药材质量
标准》品种．研究表明，吉祥草主要含甾体皂苷
类［７－８］．ＲＣＥ－４为从吉祥草中分离得到的甾体皂
苷［９］，也是吉祥草中含量最高的甾体皂苷．本实验
室在前期研究过程中发现，该化合物具有良好的诱
导肿瘤细胞凋亡的作用．为了评价和控制吉祥草的
品质，本实验建立了用高效液相色谱测定吉祥草根
茎中ＲＣＥ－４含量测定方法．该方法简便快速，分离
度好，准确度高，可为吉祥草药材质量控制提供
参考．
１ 仪器与试剂
Ｕｌｔｉｍａｔｅ　３０００ 分析型高效液相色谱系统
（ＨＰＧ－３２００ＳＤ高压梯度泵，ＤＡＤ－３０００二级管阵
列检测器检测器，ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ工作站）；ＭＥ２１５Ｓ
型十万分之一电子天平（德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司）；艾
科浦超纯水系统（重庆顾洋企业发展有限公司）；乙
腈为色谱纯（ｆｉｓｈｅｒ公司），水为超纯水（自制），其
余试剂为分析纯（市售）．
吉祥草根茎采自湖北省长阳土家族自治县乐
园，其原植物标本于２００７年７月采自同一地区，经
三峡大学化学与生命科学学院杨进副教授鉴定为
Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ．，植物标本现保
存于三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实
验室（标本号：２００７０６２９）．
对照品：ＲＣＥ－４为本实验室自吉祥草根茎中
分离得到，其化合结构经波谱数据（ＵＶ，ＥＳＩ－
ＭＳ，１　Ｈ　ＮＭＲ，１３　Ｃ　ＮＭＲ和２ＤＮＭＲ）分析鉴定．
以 ＨＰＬＣ 面积归一化法测定其质量分数均大
于９８％．
２ 方法与结果
２．１ ＲＣＥ－４的分离与鉴定
吉祥草根茎，粉碎，９５％乙醇６５℃回流提取至
提取液接近无色，２ｈ／次，合并提取液并浓缩，回收
溶剂，所得浸膏用适量水分散，依次用等量石油醚、
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂得相应萃取
物浸膏．将吉祥草根茎乙酸乙酯萃取物（７０ｇ）干浸
膏与１．５倍量的硅胶拌样，上样于硅胶柱，氯仿－甲
醇（１５∶１）恒梯度洗脱，共合并收集１５个流分．在
１５号流分得到 ＲＣＥ－４的粗品，将１５号流分再经
　第１期 王　倩等：吉祥草根茎中一个甾体皂苷的提取与含量测定 ６１　
Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０凝胶柱层析除色素，氯仿－甲醇
（１∶１）洗脱，有无色针状结晶析出，收集结晶，再经
重结晶，干燥，即得ＲＣＥ－４纯品（６００ｍｇ）．
ＲＣＥ－４的１　Ｈ　ＮＭＲ数据如下：１　Ｈ　ＮＭＲ （４００
ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ５）δ：０．８５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１８），１．０８
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ－２７），１．３４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－
１９），１．１５ （３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，Ｈ－２１），１．７６
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ＣＨ３－Ｒｈａ），以及２个糖端
基质子信号δ：６．６３ （１Ｈ，ｓ，Ｈ－１－ｒｈａ）和５．１１
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ－１－ｘｙｌ）．１３　Ｃ　ＮＭＲ （１００
ＭＨｚ，ｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｄ５）δ：７５．９（Ｃ－１），２　７．３（Ｃ－２），
６７．３（Ｃ－３），３４．２（Ｃ－４），３１．８（Ｃ－５），２６．４（Ｃ－６），
２６．４（Ｃ－７），３５．６（Ｃ－８），４２．０（Ｃ－９），３９．４（Ｃ－１０），
２１．４（Ｃ－１１），４０．３（Ｃ－１２），４０．７（Ｃ－１３），５６．４（Ｃ－
１４），３２．２（Ｃ－１５），８１．３（Ｃ－１６），６２．９（Ｃ－１７），
１６．７（Ｃ－１８），１９．４（Ｃ－１９），４２．５（Ｃ－２０），１４．９（Ｃ－
２１），１０９．７（Ｃ－２２），２６．３（Ｃ－２３），２６．２（Ｃ－２４），
２７．３（Ｃ－２５），６５．１（Ｃ－２６），１６．３（Ｃ－２７），９８．１
（ｘｙｌ，Ｃ－１），７６．９（ｘｙｌ，Ｃ－２），７９．２（ｘｙｌ，Ｃ－３），
７１．６（ｘｙｌ，Ｃ－４），６７．４（ｘｙｌ，Ｃ－５），１０１．９（ｒｈａ，Ｃ－
１），７２．０（ｒｈａ，Ｃ－２），７２．２（ｒｈａ，Ｃ－３），７４．５（ｒｈａ，
Ｃ－４），６９．９（ｒｈａ，Ｃ－５），１８．８（ｒｈａ，Ｃ－６）．该化合物
光谱数据与文献［９］报道的化合物数据基本一致，
但经过２ＤＮＭＲ数据验证，发现文献中β－Ｄ－木糖
的Ｃ－２和Ｃ－３位１３　Ｃ　ＮＭＲ数据归属颠倒，予以更
改．故 ＲＣＥ－４的结构鉴定为：（１β，３β，５β，２５Ｓ）－
ｓｐｉｒｏｓｔａｎ－１，３－ｄｉｏｌ　１－［α－Ｌ－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－（１→
２）－β－Ｄ－ｘｙｌｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］，化合物结构如图１所示．
图１　化合物ＲＣＥ－４结构和主要 ＨＭＢＣ图
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｋｅｙ　ＨＭＢＣ　ｏｆ　ＲＣＥ－４
２．２ ＨＰＬＣ法测定ＲＣＥ－４的含量
２．２．１ 色 谱 条 件 　 色 谱 柱 Ｖｅｎｕｓｉｌ　ＸＢＰ　Ｃ１８
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ．ｉｄ．，５μｍ）；柱温２５℃；流动相：
乙腈（Ｂ）－水（Ａ）（４５∶５５，ｖ／ｖ）；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；
进样量：２０μＬ；检测波长：２０３ｎｍ．ＲＣＥ－４与相邻
组分峰的分离度及其拖尾因子均符合要求．色谱图
见图２．
图２　吉祥草 ＨＰＬＣ图谱
Ａ．标准品　Ｂ．样品　１．ＲＣＥ－４
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ
Ａ．ｓｔａｎｄａｒｄ　ｐｒｏｄｕｃｔ；　Ｂ．ｓａｍｐｌｅ；１．ＲＣＥ－４
２．２．２对照品溶液的制备　精密称取对照品１３ｍｇ
适量，置于１０ｍＬ容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻
度，配制成浓度为１．３ｍｇ／ｍＬ的储备液，低温避光
保存．
２．２．３供试溶液的制备　取干燥并粉碎的吉祥草
样品约１０克，精确称量，置于５００ｍＬ圆底烧瓶
中，加入氯仿∶甲醇（１５∶１）混合溶液２００ｍＬ，水
浴加热至沸，回流提取２ｈ，停止加热后，趁热过
滤，并用上述溶剂浸洗滤纸３次，滤渣收集回圆底
烧瓶，继续上述操作重复提取２次，合并滤液，减压
浓缩蒸干，所得浸膏用甲醇溶解并定容至１００ｍＬ
容量瓶，摇匀，经０．４５μｍ微孔滤膜得续滤液，即
为供试溶液．
２．２．４线性关系考察　取上述对照品贮备液适量，
用甲醇稀释，分别得浓度为 １．３、０．９７５、０．６５、
０．３２５、０．０６５、０．０３２５ｍｇ／ｍＬ的ＲＣＥ－４系列标准
溶液，按“２．２．１”项下色谱条件进样，记录峰面积
与保留时间，以ＲＣＥ－４对照品浓度ｘ（ｍｇ／ｍＬ）为
横坐标，峰面积ｙ为纵坐标，绘制标准曲线．结果
表 明，ＲＣＥ－４ 对 照 品 进 样 量 在 ０．０３２５ ～
１．３ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好，其回归方程为：
６２　 华中师范大学学报（自然科学版） 　　第４７卷
ｙ＝１５．２７ｘ＋０．０１０４６（ｒ＝０．９９９９７）．
图３　ＲＣＥ－４标准曲线
Ｆｉｇ．３Ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ＲＣＥ－４
２．２．５稳定性试验　取供试品溶液进样，在２、４、８、
１２、２４ｈ后分别进样２０μＬ，结果 ＲＣＥ－４峰面积
ＲＳＤ为３．０３％（ｎ＝５），表明供试品溶液室温下放
置２４ｈ基本稳定．
２．２．６精密度试验　分别准确吸取同一ＲＣＥ－４对
照品溶液２０μＬ，进样５次，峰面积积分值ＲＳＤ（ｎ
＝５）为０．６０％．
２．２．７重复性试验　取吉祥草粉末５份，分别按
“２．２．３”项下供试品溶液测定方法测定，测得
ＲＣＥ－４的平均含量为０．１２２９％，ＲＳＤ为０．３２％．
２．２．８加样回收试验　精密称定已知含量的供试
品５份，分别加入与样品含量相当的对照品，按
“２．２．３”项下供试品溶液测定方法，分别进样测定，
结果见表１．
表１　ＲＣＥ－４回收率测定结果（ｎ＝５）
Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＲＣＥ－４（ｎ＝５）
取样量
／ｇ
取样含
量／ｍｇ
对照品加
入量／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收
率／％
ＲＳＤ／％
１０．０１４２　１２．３１　 １２．０　 ２４．９９　 １０２．８０
１０．００９３　１２．３０　 １２．０　 ２４．０４　 ９８．９３
１０．１２４１　１２．４４　 １２．０　 ２４．１８　 ９８．９４
１０．１１１０　１２．４３　 １２．０　 ２４．６２　 １００．７８
１０．００８６　１２．３０　 １２．０　 ２４．０１　 ９８．８０
１００．０５　 １．７４
２．２．９样品含量测定　取３份吉祥草粉末，每份约
１０ｇ，精密称定，按“２．２．３”项方法制备供试品溶
液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，
计算样品中 ＲＣＥ－４ 的含量，计算公式为：ｙ＝
１５．２７ｘ＋０．０１０４６（ｒ＝０．９９９９７），结果见表２．
表２　样品测定结果（ｎ＝３）
Ｔａｂ．２　Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ（ｎ＝３）
被测试样品
ＲＣＥ－４含量／％
样品一 样品二 样品三 平均含量
吉祥草根茎 ０．１２３９　 ０．１２１８　 ０．１２３０　 ０．１２２９
３ 分析与讨论
（１）实验结果表明，吉祥草根茎中 ＲＣＥ－４的
含量达到０．１２２９％．采用色谱条件：乙睛－水溶液
（６０∶４０）；流速为：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；柱温２５℃；检测
波长为２０３ｎｍ，ＲＣＥ－４与其他组分分离度好．
（２）该研究表明，ＨＰＬＣ测定吉祥草根茎中
ＲＣＥ－４含量可行、稳定、简便、灵敏、准确，为百合
科植物吉祥草的开发利用及质量控制提供一定的
参考．
（３）比较了９５％乙醇、乙酸乙酯作提取溶剂，
二者提取率相对于氯仿∶甲醇（１５∶１）混合溶液偏
低，提取率分别为０．０３５％、０．０７％，而氯仿∶甲醇
（１５∶１）混合溶液的提取率明显提高．
参考文献：
［１］　陈昌祥，周　俊．蜘蛛抱蛋根茎中的甾体皂苷 ［Ｊ］．云南植
物研究，１９９４，１６（４）：３９７－４００．
［２］　张　元，杜　江，许建阳，等．吉祥草总皂苷溶血、止咳、化
痰、抗炎作用的研究［Ｊ］．武警医学，２００６，１７（４）：２８２－２８４．
［３］　冯玉文，李文新，刘　实，等．吉祥草中杀灭钉螺化合物的
提取分离 ［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００６，１８（３）：
１７８－１８２．
［４］　冯玉文．吉祥草杀螺成分研究［Ｄ］．武汉：华中师范大学，
２００６：１５－２４．
［５］　陈新苗．液相微萃取法在分析水中酚类化合物中的应用以及
吉祥草中灭螺有效化合物的分离［Ｄ］．武汉：华中师范大学，
２００６：４７－５４．
［６］　Ｋａｎｍｏｔｏ　Ｔ，Ｍｉｍａｋｉ　Ｙ，Ｓａｓｈｉｄａ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕ－
ｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｕｎｄｅｒｇｒｏｕｎｄ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｅａ　ｃａｒｎｅａ　ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｎ　ｃＡＭＰ　ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ［Ｊ］．
Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ，１９９４，４２（４）：９２６－９３１．
［７］　刘　海．吉 祥 草 化 学 成 分 的 研 究 ［Ｄ］．贵 阳：贵 州 大
学，２００８．
［８］　张重权．云南贵州吉祥草化学成分研究 ［Ｄ］．昆明：中国科
学院昆明植物研究所，２００７．
［９］　Ｚｈａｎｇ　Ｚ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｊ　Ｃ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｗｏ　ｎｅｗ　ｓｐｉｒｏｓｔａ－
ｎｏｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ［Ｊ］．Ｈｅｌｖ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，
２００８，９１：１４９４－１４９９．
（下转第７７页）
　第１期 徐常龙等：１１－巯基十一酸－（１３－生物素酰胺基－４，７，１０－三氧十三烷基）酰胺的合成 ７７　
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｂｉｏｔｉｎ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｏｆ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｈｉｏｌ－１１－ｍｅｒｃａｐｔｏｕｎｄｅｃａｎｏｉｃ－（１３－ｂｉ－
ｏｔｉｎｏｙｌａｍｉｄｏ－４，７，１０－ｔｒｉｏａｘａｔｒｉｄｅｃａｎｅａｍｉｎｅ）ａｍｉｄｅ　ｗｅｒｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｏｍｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
ｓｕｃｈ　ａｓ　ｂｅｎｚｙｌ　ｍｅｒｃａｐｔａｎ，ｂｒｏｍｉｎｅ　ｅｌｅｖｅｎ　ａｃｉｄ，４，７，１０－ｔｒｉｏａｘａｔｒｉｄｅｃａｎｅｄｉａｍｉｎｅ　ｂｙ　ａｃｔｉ－
ｖａｔｉｏｎ　ｅｓｔｅｒ　ａｎｄ　ＮＨ３／Ｎａ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｚｙｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｓｔｒｕｃ－
ｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｂｙ　１　Ｈ　ＮＭＲ　ａｎｄ　ＦＴ－ＩＲ．Ｔｈｉｓ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ｃａｎ　ｆｏｒｍ　ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｅｄ　ｍｏｎｏｌａｙｅｒ　ｏｎ　ｇｏｌｄ　ｓｕｒｆａｃｅ．Ｔｈｅ　ａｓｓｅｍｂｌｅｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｈａｖｅ　ｍａｎｙ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｖｉｃｅｓ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｅｎｓｏｒｓ，ｂｉｏｌｏｇｉ－
ｃａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：１１－ｍｅｒｃａｐｔｏｕｎｄｅｃａｎｏｉｃ－（１３－ｂｉｏｔｉｎｏｙｌａｍｉｄｏ－４，７，１０－ｔｒｉｏａｘａｔｒｉｄｅｃａｎｅａｍｉｎｅ）
ａｍｉｄｅ；ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｅｄ　ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ；ｓｙ
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
ｎｔｈｅｓｉｓ
（上接第６２页）
Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｓａｐｏｎｉｎ
ｆｒｏｍ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｆ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ
ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎ，ＣＨＥＮＧ　Ｆａｎ，ＬＩＵ　Ｃｈｅｎｇｘｉｏｎｇ，ＺＯＵ　Ｋｕｎ
（Ｈｕｂｅｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，
Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｒｅｅ　Ｇｏｒｇｅｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｃｈａｎｇ，Ｈｕｂｅｉ　４４３００２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ａ　ｋｎｏｗｎ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｓａｐｏｎｉｎ（ＲＣＥ－４）ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍＲｅｉｎｅｃｋｉａ
ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ．Ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＣＥ－４ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　Ｖｅｎｕｓｉｌ　ＸＢＰＣ１８（２５０ｍｍ ×４．６
ｍｍ．ｉｄ．，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎ　ｅｌｕａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ（４５∶５５）ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ
０．８ｍＬ／ｍｉｎ　ｗｉｔｈ　ｉｔｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２０３ｎｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ
ｋｅｐｔ　ａｔ　２５℃．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ＲＣＥ－４ｉｎ　Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｓ　０．１２２９％．
Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０３２５～１．３ｍｇ／
ｍＬ　ｗｉｔｈ　ｉｔｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｓ　０．９９９９７，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ａｓ
１００．０５％ａｎｄ　ＲＳＤ（ｎ＝５）１．７４％．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．Ｉｔ
ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ　ｍａｄｅ　ｆｒｏｍＲｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｒｅｉｎｅｃｋｉａ　ｃａｒｎｅａ（Ａｎｄｒ．）Ｋｕｎｔｈ；ＨＰＬＣ；ｓｔｅｒｏｉｄ　ｓａｐｏｎｉｎ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉ－
ｎａｔｉｏｎ