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HPLC法同时测定吉祥草中阿魏酸及芦丁
田源红， 张永萍* ， 李 玮， 徐 剑， 王建科， 刘 赟
(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)
收稿日期:2014-04-04
基金项目:贵州省科技计划项目 (黔科合重 G字 ［2012］ 4 001 号);贵州省教育厅 中药、民族药产地加工与炮制技术工程中心 (黔
教合 KY字 ［2012］ 021 号)
作者简介:田源红 (1963—)，女，教授，硕士生导师，从事中药材民族药材炮制工艺及质量研究。Tel:13511931919，E-mail:
tyh0831@ sohu． com
* 通信作者:张永萍 (1964—)，女，教授，硕士生导师，从事中药新制剂新剂型新技术研究。Tel: (0851)5652056，E-mail:zgygpg
@ sohu． com
摘要:目的 建立吉祥草中阿魏酸和芦丁的测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法，Wondasil C18色谱柱 (250
mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-0. 4%磷酸水 (38 ∶ 62) ，体积流量为 1 mL /min，检测波长 270 nm;柱温 30 ℃。
结果 阿魏酸在 0. 40 ～ 2. 40 μg范围内呈良好线性关系 (r = 0. 999 9)，平均回收率为 100. 1%，ＲSD 为 2. 8%;芦丁
在 0. 625 ～ 5. 625 μg范围内呈良好线性关系 (r = 0. 999 95) ，平均回收率为 100. 7%，ＲSD为 1. 3%。结论 该方法分
离效果好，操作简单，稳定性好，重复性好，可用于吉祥草中阿魏酸和芦丁的测定。
关键词:吉祥草;ＲP-HPLC;阿魏酸;芦丁
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)03-0603-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 03. 031
Determination of ferulic acid and rutin in Ｒeineckia carner (Andr．)Kunth． by
HPLC
TIAN Yuan-hong， ZHANG Yong-ping， LI Wei， XU Jian， WANG Jian-ke， LIU Yun
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guizhou 550002，China)
KEY WOＲDS:Ｒeineckia carner (Andr．)Kunth;ＲP-HPLC;ferulic acid;rutin
吉祥草又名观音草，为百合科植物吉祥草 Ｒei-
neckia carner (Andr．)Kunth 的干燥全草。具有滋
阴润肺、凉血止血的功效，用于肺燥咳喘、阴虚咳
嗽、咯血、遗精、跌扑损伤。在 《本草纲目》、
《中药大辞典》、《全国中草药汇编》中均有记载，
苗族、侗族、布依族喜用鲜品治疗咳嗽等［1-2］。是
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Chinese Traditional Patent Medicine
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Vol． 37 No． 3
咳速停糖浆、咳速停胶囊、复方吉祥草片等制剂的
主要药物。近年来发现其中还含有 Fe、Cu、Zn、
Mn、Mg、Ca、K等 8 种微量元素，且含有量较高，
具有较高的药用价值［3］。还发现具有溶血、止咳、
化痰、抗炎、降血糖的作用［4-5］。阿魏酸是抑菌作
用的有效成分，芦丁是止咳作用的有效成分［6］，
本实验同时对两成分定量测定方法进行了研究，为
提高吉祥草的质量控制方法提供依据。
1 药材
吉祥草经贵阳中医学院汪毅教授鉴定为百合科
植物吉祥草 Ｒeineckia carner (Andr．)Kunth 的干燥
全草。
2 仪器与试药
2. 1 仪器 高效液相色谱仪 (日本岛津 /LC-
20AT)、超声波清洗机 (北京创新德超声电子研究
所)、SHZ-95 型循环水式真空泵 (河南巩义市予
华仪器有限公司)、AE-240 双量程电子分析天平
(万分之一，十万分之一)、HH-2 型数显恒温水浴
锅 (常州澳华仪器有限公司)、色谱柱 (ACE C18、
WondaSil C18、Diamonsil C18)。
2. 2 试药 阿魏酸对照品 (贵州迪大生物科技有
限责任公司，供含量测定用，批号 1135-24-6) ，芦
丁对照品 (中国药品生物制品检定所，供含量测
定用，批号 100080-200707) ，色谱甲醇 (天津市
科密欧化学试剂有限公司，批号 20130501) ，娃哈
哈纯净水，分析纯甲醇、乙醇、磷酸。
3 试验方法
3. 1 对照品溶液的的制备 精密称取阿魏酸对照
品 0. 016 g，于 100 mL量瓶中，用色谱甲醇定容至
刻度，即得每 1 mL 含阿魏酸 0. 16 mg 的溶液;另
取芦丁对照品 0. 025 g，于 100 mL量瓶中，同法即
得每 1 mL含芦丁 0. 25 mg的溶液。
3. 2 供试品溶液的制备
3. 2. 1 提取方法考察 分别用超声提取［7］、回流
提取［8］、索氏提取，结果用回流提取的方法两成
分的峰面积最大，且分离度、拖尾因子较好，故选
用回流提取。
3. 2. 2 正交试验 精密称取吉祥草全草粉末约 1 g
于 100 mL圆底烧瓶中，以料液比、甲醇体积分数、
提取时间、提取次数为四因素，各 3 个水平设计实
验方案，9 个样品，回流提取，过滤，滤液水浴挥
干，残渣加用 1 mL 甲醇定容，摇匀，用 0. 45 μm
微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，进样
10 μL。测定峰面积，计算。因素水平及实验结果
见表 1 ～ 4。
表 1 因素水平
Tab. 1 Level of factors
水平
因素
料液比(A)甲醇体积分数(B)提取时间 / h(C)提取次数(D)
1 1 ∶ 10 80% 0. 5 1
2 1 ∶ 20 90% 1. 0 2
3 1 ∶ 30 100% 1. 5 3
表 2 实验结果
Tab. 2 Ｒesults of the experiment
试验号 A B C D 阿魏酸 /% 芦丁 /%
1 1 1 1 1 0. 009 0. 025
2 1 2 2 2 0. 027 0. 034
3 1 3 3 3 0. 019 0. 060
4 2 1 2 3 0. 020 0. 058
5 2 2 3 1 0. 013 0. 048
6 2 3 1 2 0. 012 0. 047
7 3 1 3 2 0. 017 0. 056
8 3 2 1 3 0. 021 0. 042
9 3 3 2 1 0. 017 0. 050
A B C D
阿魏酸
K1 0. 183 0. 153 0. 140 0. 130
K2 0. 150 0. 203 0. 213 0. 187
K3 0. 183 0. 160 0. 163 0. 200
极差 Ｒ 0. 033 0. 050 0. 073 0. 070
芦丁
K1 0. 397 0. 463 0. 380 0. 410
K2 0. 510 0. 413 0. 473 0. 457
K3 0. 493 0. 523 0. 547 0. 533
极差 Ｒ 0. 113 0. 110 0. 167 0. 123
表 3 阿魏酸方差分析
Tab. 3 Variance analysis of ferulic acid
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
料液比 0. 002 2 1. 000 19. 000
甲醇体积分数 0. 004 2 2. 000 19. 000
提取时间 0. 008 2 4. 000 19. 000
提取次数 0. 008 2 4. 000 19. 000
误差 0. 00 2
表 4 芦丁方差分析
Tab. 4 Variance analysis of rutin
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
料液比 0. 022 2 1. 222 19. 000
甲醇体积分数 0. 018 2 1. 000 19. 000
提取时间 0. 042 2 2. 333 19. 000
提取次数 0. 023 2 1. 278 19. 000
误差 0. 02 2
从表 2 得出:影响阿魏酸因素依次为 C ＞ D ＞
B ＞ A，最佳方案为 A3B2C2D3;影响芦丁因素依次
为 C ＞ D ＞ A ＞ B，最佳方案为 A2B3C3D3。提取时
间、提取次数影响较大。
从表 3、4 得出:料液比、甲醇体积分数、提
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取时间、提取次数对吉祥草中阿魏酸和芦丁的量无
显著性差异。
综上所述，考虑到节约溶剂和时间，提取方案
为 A3B2C2D2，即:料液比 (1 ∶ 30)、甲醇质量分
数 (90%)、提取时间 (1 h)、提取次数 (2 次)
作为提取吉祥草的最佳提取条件。即:精密称取吉
祥草全草粉末约 1 g 于 100 mL 圆底烧瓶中，精密
加入 30 mL 90%甲醇回流提取 1 h，过滤，滤液备
用，再将滤纸放入圆底烧瓶中同法回流 1 h，合并
两次滤液，水浴挥干，残渣加用 1 mL 甲醇定容，
摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为
供试品溶液，进样 10 μL。
3. 3 色谱条件 WondaSilC18色谱柱 (250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 4% 磷酸水
(32 ∶ 68) ;体积流量 1. 0 mL /min，检测波长 270
nm;柱温 30 ℃。
3. 3. 1 色谱柱的选择 分别对 ACEC18色谱柱
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)、DiamonsilC18色谱柱
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)、WondaSilC18色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)进行试验，结果表明，
WondaSilC18柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)的色谱
柱分离效果好，故选择此色谱柱。
3. 3. 2 最大吸收波长的选择 对 200 ～ 400 波段进
行扫描，芦丁在波长 365 nm 处有最大吸收，阿魏
酸在 265 nm处有最大吸收波长。通过实验比较选
择的最适吸收波长为 270 nm。
3. 3. 3 流动相的选择 先后对甲醇-0. 4%磷酸水、
甲醇-0. 1% 磷酸水、甲醇-0. 2% 磷酸水、甲醇-
0. 3%磷酸水、甲醇-水、甲醇-水-乙酸 (45 ∶ 54 ∶
1)［9］6 种流动相进行试验。根据试验结果，选择甲
醇-0. 4%磷酸水 (32 ∶ 68)作为流动相。
3. 4 方法学考察
3. 4. 1 绘制标准曲线 分别取质量浓度为 0. 16
mg /mL 的阿魏酸标准溶液 2. 5、5. 0、7. 5、10、
12. 5、15 μL 注入高效液相色谱仪，记录其峰面
积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，得
回归方程 y = 3 × 106x － 29 728 (r = 0. 999 9) ，结果
表明阿魏酸在 0. 40 ～ 2. 40 μg范围内呈良好线性关
系;同法精密量取质量浓度为 0. 25 mg /mL 的芦丁
标准溶液 2. 5、5. 0、7. 5、10、12. 5、15、22. 5 μL
注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。得出回归方
程 y = 2 × 106x － 1 684. 5 (r = 0. 999 95) ，结果表明
芦丁在 0. 625 ～ 5. 625 μg 范围内呈良好线性关系。
样品、对照品 HPLC图谱见图 1。
图 1 吉祥草 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC chromatogram of Ｒeineckia carner
3. 4. 2 精密度试验 精密吸取按正交试验优选出
的最佳提取工艺制备的供试品溶液，每次进样 10
μL，重复进样 6 次，测定峰面积，结果阿魏酸峰
面积 ＲSD为 1. 7%，芦丁峰面积 ＲSD为 1. 6%，结
果表明仪器精密度良好。
3. 4. 3 稳定性试验 精密吸取同一吉祥草样品，
每次进样 10 μL，分别于 0、2、4、6、8、12 h 依
次进样，测定峰面积，结果阿魏酸峰面积 ＲSD 为
2. 4%，芦丁峰面积 ＲSD 为 0. 9%，结果表明样品
在 12 h内稳定。
3. 4. 4 重复性试验 精密称取同一吉祥草样品粉
末 6 份，每份约 1 g，制备供试品溶液，每次进样
10 μL，测定峰面积，计算，结果阿魏酸 ＲSD 为
2. 9%，芦丁 ＲSD 为 2. 3%，表明该方法重复性
良好。
3. 4. 5 回收率试验 分别称取已知含有量吉祥草
样品粉末 (阿魏酸 0. 119 mg /g 和芦丁 0. 425
mg /g)6 份，每份约 0. 5 g，精密加入阿魏酸对照
品 (0. 103 mg /mL)溶液 0. 6 mL 和芦丁对照品
(0. 220 mg /mL)溶液 1 mL，按供试品项下制备，
进样 10 μL，测定峰面积，计算，阿魏酸平均回收
率为 100. 1%、ＲSD 为 2. 8%，芦丁的平均回收率
为 100. 7%，ＲSD 为 1. 3%，表明该方法的回收率
良好。见表 5，表 6。
表 5 阿魏酸加样回收率试验
Tab. 5 Ｒesults of recovery tests for ferulic acid
称样量 /
g
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收率 /
%
ＲSD /
%
0. 500 0. 059 5 0. 061 8 0. 121 7 100. 6 100. 1 2. 8
0. 501 0. 059 6 0. 061 8 0. 122 7 102. 0
0. 497 0. 059 1 0. 061 8 0. 119 4 97. 5
0. 500 0. 059 5 0. 061 8 0. 120 4 98. 6
0. 497 0. 059 1 0. 061 8 0. 119 3 97. 4
0. 501 0. 059 6 0. 061 8 0. 124 2 104. 4
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表 6 芦丁加样回收率试验
Tab. 6 Ｒesults of recovery tests for rutin
称样量 /
g
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收率 /
%
ＲSD /
%
0. 500 0. 212 5 0. 220 0 0. 432 1 99. 8 100. 7 1. 3
0. 501 0. 212 9 0. 220 0 0. 433 7 100. 3
0. 497 0. 211 2 0. 220 0 0. 430 2 99. 5
0. 500 0. 212 5 0. 220 0 0. 435 9 101. 6
0. 497 0. 211 2 0. 220 0 0. 437 5 102. 9
0. 501 0. 212 9 0. 220 0 0. 432 8 99. 9
3. 4. 6 样品测定 精密吸取 3 批吉祥草药材的供
试液 10 μL分别进样，记录峰面积，计算阿魏酸和
芦丁的量，结果见表 7。3 批吉祥草中的阿魏酸含
有量在 0. 011% ～ 0. 013% 之间，芦丁含有量在
0. 047% ～0. 054%之间。
表 7 阿魏酸、芦丁测定结果
Tab. 7 Determination results of ferulic acid and rutin
编号 称样量 / g 阿魏酸 /% 平均值 /% 芦丁 /% 平均值 /%
2. 001 0. 013 0. 052
1 2. 000 0. 012 0. 012 0. 051 0. 053
1. 999 0. 012 0. 054
2. 000 0. 013 0. 051
2 1. 999 0. 013 0. 013 0. 053 0. 052
1. 997 0. 013 0. 053
1. 998 0. 011 0. 047
3 2. 000 0. 012 0. 012 0. 047 0. 047
2. 000 0. 012 0. 048
4 结果与讨论
4. 1 体积流量的选择 分别对 0. 8、0. 9、1. 0
mL /min 的体积流量进行考察，结果表明 1. 0
mL /min时峰面积最大。
4. 2 柱温的选择 分别对 25 ℃［10］、30 ℃［11］、
35 ℃［12］三个柱温进行试验，结果表明 30 ℃时峰
型最佳，故选择柱温为 30 ℃。
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