全 文 ：收稿日期:2011-05-24
基金项目:国家自然科学基金面上项目(30870254 , 31070313)
通讯作者:邹　坤(1962-),男 ,教授 ,博士 ,博士生导师 ,主要从事天然产物研究与利用工作.zou@ctgu.edu.cn
第 33卷　第 4期
2011 年 8 月
三峡大学学报(自然科学版)
J of China Three Go rges Univ.(Natural Sciences)
Vol.33 No.4
Aug.2011
高效液相色谱法测定吉祥草根茎中芦丁的含量
王　倩　邹　坤
(天然产物研究与利用湖北省重点实验室三峡大学 化学与生命科学学院 , 湖北宜昌 443002)
摘要:目的:建立吉祥草根茎中芦丁的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱技术测定芦丁的含
量 ,色谱条件为:Diamonsil C18(4.6mm×250mm ,5μm)色谱柱 ,乙腈-0.1%磷酸水(28∶72)为流
动相 ,恒定流速为 1.0mL/min ,检测波长为 350 nm ,柱温 25 ℃.结果:吉祥草根茎中芦丁的含量为
0.26%.芦丁在0.13 ～ 0.65mg/mL 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系 , r=0.999 9 ,平均回收
率为 99.87%, RSD(n=5)为 1.41%.结论:该方法简便准确 ,重现性好 ,可以作为吉祥草中芦丁的
含量测定方法.
关键词:吉祥草;　高效液相色谱法;　芦丁;　含量测定
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1672-948X(2011)04-0089-03
Content Determination of Rutin in Reineckia Carnea by Using HPLC
Wang Qian　Zou Kun
(Hubei Key Laboratory of Natural Products Resea rch &Development , College o f Chemistry and Life Sci-
ences , China Three Go rges Univ ., Yichang 443002 , China)
Abstract　T he high-performance liquid chromato graphy(HPLC)is used to determine the rutin content in Rei-
neck ia Carnea.The analy sis is perfo rmed on diamonsi l C18(250 mm ×4.6 mm .id., 5μm)column in eluation
wi th ace tonit ri le-0.1%phosphoric acid (28:72)in a f low rate of 1.0 mL/min;and the signals are detected
under detecting w aveleng th of 350 nm and the co lumn temperature is kept at 25 ℃.Contents o f rutin in Rei-
neck ia Carnea has been de termined as 0.26 %.The calibration curve show s a good linear relationship at the
range of 0.13-0.65 mg/mL with its linear coef ficient of 0.999 9;and the average recovery is de termined as
99.87% and RSD(n=5)1.41%.The method is simple , accurate and repeatable.It can be used for quality
cont rol of rutin in Reineckia Carnea.
Keywords　Reineck ia Carnea;　HPLC;　rutin;　content determination
　　吉祥草 ,又名玉带草 、观音草 、松寿兰 、小青胆等 ,
为百合科吉祥草属植物吉祥草(Reineck ia Carnea
(Andr.)K unth.)的全草 ,以其全草入药 ,具有润肺
止咳 、接骨 、平喘 、祛风除湿等功效 ,现代药理研究表
明吉祥草具有抗真菌[ 1] 、溶血 、止血 、化痰 、抗炎[ 2] 、灭
杀钉螺[ 3-5] 及抑制磷酸二酯酶[ 6] 等活性.吉祥草在民
间用于抗类风湿性关节炎具有良好的疗效 ,且副作用
少 ,吉祥草已收录为《湖北省中药材质量标准》品种.
研究表明 ,吉祥草主要含甾体皂苷类和黄酮类[ 7-8] .芦
丁为黄酮醇苷类化合物 ,具有广泛的生理药理活性 ,
尤其是其抗炎 、抗氧化活性已经为大量学者证实.近
年来国内有采用高效液相色谱法测定吉祥草中凯提
皂苷元的含量[ 9] ,但尚未见文献报道测定吉祥草中黄
酮类化合物的含量.文献已有报道[ 10] 从吉祥草中分
离得到芦丁 ,为了评价和控制吉祥草的品质 ,本实验
建立了用高效液相色谱测定吉祥草根茎中芦丁含量
的方法.该方法简便快速 ,分离度好 ,准确度高 ,可为
吉祥草质量控制提供参考.
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
Varian 210分析型高效液相色谱系统(210型二
元梯度泵 、210 型紫外检测器 ,美国 Varian 公司);
ME215S型十万分之一电子天平(德国 Sar to rius 公
司);SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器
厂);乙腈为色谱纯(f isher 公司),水为二次蒸馏水
(自制).
吉祥草:采自中国湖北长阳;对照品:芦丁 ,购自
Sigma公司 ,纯度≥98%,其它试剂均为分析纯.
1.2　色谱条件
色谱柱 Diamonsil C18(250mm×4.6mm .id.,5
μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(28∶72 , v/v);
流速:1.0mL/min;进样量:20μL;检测波长:350 nm;
柱温:25 ℃.在该色谱条件下待测组分可达到基线分
离如图 1 ～ 2所示.
1.3　溶液的制备
对照品溶液:精密称取芦丁对照品 13.0 mg 置于
25mL 容量瓶中 ,配制成浓度为 0.52mg/mL 的芦丁
储备液.
供试品溶液:晒干的吉祥草根茎 ,粉碎 ,取粉末
1.0 g ,加95 %乙醇10mL ,密塞 ,70 ℃加热回流提取 5
h ,冷却至室温 ,取适量用微孔滤膜(0.45μm)滤过即
得.
2　方法与结果
2.1　线性关系考察
取上述贮备液适量 ,用甲醇稀释 ,分别得浓度为
0.13 、0.26 、0.40 、0.52 、0.65 mg/mL 的芦丁系列标
准溶液 ,按“1.2”项下色谱条件进样 ,记录峰面积与保
留时间 ,以芦丁对照品浓度 x(mg/mL)为横坐标 ,峰
面积 y 为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,结果表明 ,芦丁对照
品进样量在 0.13 ～ 0.65 mg/mL 范围内线性关系良
好 ,其回归方程为:y =64 237 900x +641 601(r =
0.999 9).
图 3　芦丁标准曲线
2.2　稳定性试验
取供试品溶液进样 ,在 2 、4 、8 、12 、24 h 后分别进
样 20μL ,结果芦丁峰面积 RSD为 1.25%(n=5),表
明供试品溶液室温下放置 24 h基本稳定.
2.3　精密度试验
分别准确吸取同一芦丁对照品溶液 20μL ,进样
5次 ,峰面积积分值 RSD(n=5)为 0.97%.
2.4　重复性试验
取吉祥草粉末 5份 ,分别按“1.3”项下供试品溶
液测定方法测定 , 测得芦丁的平均含量为 0.26%,
RSD为 2.67%.
2.5　加样回收试验
精密称定已知含量的供试品 5份 ,分别加入与样
品含量相当的对照品 ,按“1.3”项下供试品溶液测定
方法 ,分别进样测定 ,结果见表 1.
表 1　芦丁回收率测定结果(n=5)
取样量
/ g
取样含量
/mg
对照品加
入量/m g
测得量
/m g
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/ %
0.986 1 2.5875 2.6 5.198 0 100.20 99.87 1.41
0.994 2 2.6088 2.6 5.304 2 101.83
1.010 2 2.6508 2.6 5.147 8 98.03
1.054 9 2.7681 2.6 5.377 2 100.17
1.008 6 2.6466 2.6 5.200 7 99.13
90 三 峡 大 学 学 报(自 然 科 学 版)　　　　　　　　　　　　　　2011 年 8 月
2.6　样品含量测定
取 3份吉祥草粉末 ,每份约 1 g , 精密称定 , 按
“1.3”项方法制备供试品溶液 ,注入液相色谱仪 ,按上
述色谱条件测定峰面积 ,计算样品中芦丁的含量 ,计
算公式为:y =64 237 900x +641 601(r=0.999 9),结
果见表 2.
表 2　样品测定结果(n=3)
被测试样品 芦丁含量/ %样品 1　　样品 2　　样品 3　　平均含量
吉祥草根茎 0.26 0.26 0.27 0.26
3　分析与讨论
(1)实验结果表明 ,吉祥草根茎中芦丁的含量达
到 0.26%.采用色谱条件:乙睛-0.1%磷酸溶液(28∶
72);流速为:1.0mL/min;柱温 25℃;检测波长为 350
nm ,芦丁与其他组分分离度好.
(2)该研究表明 , HPLC 测定吉祥草根茎中芦丁
含量可行 、稳定 、简便 、灵敏 、准确 ,为双子叶植物药百
合科植物吉祥草的开发利用及质量控制提供一定的
参考.
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[责任编辑　耿志国]
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