全 文 ： 2009, Vol. 30, No. 15 食品科学 ※基础研究120
棘托竹荪子实体抑菌活性的研究
卢惠妮，潘迎捷，孙晓红，赵 勇*
(上海海洋大学食品学院，上海 201306)
摘 要：以水为提取剂，对棘托竹荪子实体进行浸提，利用琼脂平板打孔法测定棘托竹荪子实体对大肠杆菌O157:
H7、副溶血弧菌、单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，并研究其对5种病原菌的最低
抑菌浓度(MIC)、热稳定性以及抑菌pH值范围。结果表明，棘托竹荪子实体的浸提液对副溶血弧菌抑制作用最
好，其次是单增李斯特菌、大肠杆菌O157，对肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌抑制效果最差；棘托竹荪子实体
的浸提液最低抑菌浓度小，抑菌pH值范围广而且热稳定性强。
关键词：棘托竹荪；子实体；抑菌作用；最低抑菌浓度
Antibacterial Activity of Water Extract of Dictyophora echinovolvataFru b dy
LU Hui-ni，PAN Ying -jie，SUN X iao-hong，ZHAO Yong *
(College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)
Abstract ：Aqueous extract of Dicty phora echinovolvatafru tbody was prepared by boiling water extraction and its
antibacterial activity against 5 species of common food-borne pathogenic bacteria was investigated by agar diffusion plate
method. Additionally, the minimum inhibitory concentration (MIC) and thermal stability as well as antibacterial pH range of this
extract were also analyzed. The extract of Dictyop ora echinovolvataf uitb dy displayed the highest inhibitory effect against
Vibrio parahaemolyticus, foll wed by Listeria monocytog enes and Escherichia coli O157:H7 while no significant bacteriostatic
effects were observed on Salmon lla enteritidis a d S aphylococcus aureus. Thi extract possessed quite lower MIC values, wide
antibacterial pH range and the strong thermal stability.
Key words：Dictyophora echinovolvata；fruitb dy；bacteriostatic effect；m nimum inhibitory concentration (MIC)
中图分类号：S646.8 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)15-0120-04
收稿日期：2009-05-13
基金项目：霍英东教育基金会第十一届高等院校优选资助课题(114035)
作者简介：卢惠妮(1984－)，女，硕士研究生，主要从事食品生物技术研究。E -mail：b uesky lhn@ 163.com
*通讯作者：赵勇(1975－)，男，副教授，博士，主要从事水体微生物分子生态学研究。E -mail：y zhao@ shou.edu.cn
竹荪是一类大型真菌，在真菌分类学上，属于真
菌界，担子菌门，担子菌亚门，腹菌纲，鬼笔目，
鬼笔科，竹荪属[1]。
竹荪在抗肿瘤[2-3]、抗凝血[4-6]、抗炎症[7]、刺激免
疫[8-10]以及降血糖[11]方面都有一定的疗效，对艾滋病也
有抑制作用。短裙竹荪多糖具有一定的清除超氧阴离子
自由基作用，可抑制人工细胞膜的脂质过氧化，可能
是其抗肿瘤、提高免疫力的主要作用机理之一[12]。
在炎热的夏季作菜煲汤时，置少许竹荪入内，可防
止酸败，并可延长存放时间。在中性至碱性条件下，以
有机溶剂浸提棘托竹荪子实体得到的浸提液可发挥抑菌作
用，且抑菌成分对高温、高压稳定[13-15]。棘托竹荪挥发
油对霉菌、酵母菌、细菌都有较强的抑制作用[16-18]，目
前没有关于长裙竹荪和棘托竹荪浸提液抑菌活性比较的
相关文献报道。
据W HO估计，全世界每年发生食源性疾病数十亿
人，每年约有二百万儿童死于腹泻，其中 66% 以上是
由细菌性致病菌所致。食源性致病菌导致的疾病是食品
安全的关键问题，其中动物源性食品中沙门氏菌、大
肠杆菌 O157:H7、副溶血弧菌、单增李斯特菌等引起的
食源性疾病是食品安全的主要问题[19]。
本实验的供试菌株包括了肉制品中常见的致病菌金
黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、肠炎沙门氏菌；
以及水产品中常见的致病菌副溶血弧菌；乳制品中常见
的致病菌单增李斯特菌。鉴于竹荪对食物的特殊防腐效
果，实验利用蒸馏水对棘托竹荪子实体进行浸提，并
将其抑菌效果与食品中常见的食品防腐剂山梨酸钾和
Nisin作比较，结果表明，棘托竹荪浸提液的抑菌效果
121※基础研究 食品科学 2009, Vol. 30, No. 15
明显优于山梨酸钾和Nisin。但考虑到食品安全、以及
更贴近老百姓的生活，实验选用蒸馏水作为浸提试剂。
目前对竹荪抑菌作用的研究较少，本实验对竹荪的
抑菌作用进行研究，旨在为进一步利用该资源和竹荪的
进一步开发利用提供初步的实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
棘托竹荪子实体(棘托竹荪16号)购于四川省绵阳市
食用菌研究所。
大肠杆菌 O157:H7(Escherichia coli ATCC 43889)、
肠炎沙门氏菌(S.enteritidis CMCC 50041)、副溶血弧菌
(Vibrio parahaemolyticus ATCC 33846) 中国科学院微生
物研究所；单增李斯特菌(Listeria monocy tog enes G IM
1.228)；广东微生物研究所；金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus sub p. s AB91093) 上海市疾
病预防控制中心保藏菌种。
细菌采用营养肉汤培养基和营养琼脂培养基 上海
市疾病控制与预防中心。
1.2 仪器与设备
微量移液器 法国Gilson公司；Elix/Rios纯水系统
美国Millipore公司；DK-8D型电热恒温水槽、隔水式
恒温培养箱 上海一恒科学仪器有限公司；SKY-摇床
上海苏坤实业有限公司；压力蒸汽灭菌锅 上海博讯实
业有限公司医疗设备厂；旋转蒸发仪 上海申生科技有
限公司。
1.3 方法
1.3.1 子实体有效成分的提取
棘托竹荪子实体利用粉碎机粉碎、过筛(80目)得其
粉末，然后分别加入一定量的水(m:V=1:10)，沸水浸提
6h，离心、过滤得其上清液，在60℃的条件下浓缩至
10m l，即得棘托竹荪浸提液。
1.3.2 供试菌菌悬液的制备
将供试菌种接入相对应的斜面培养基上，细菌置于
37℃恒温培养箱内培养18～24h，之后用接种环挑取少
许菌体于10ml营养肉汤中，培养8h。180r/min，培养
8h。然后稀释至终浓度105CFU/ml[20]。
1.3.3 抑菌实验
1.3.3.1 琼脂平板打孔法的抑菌实验
将各培养基倾注在平皿中并摇匀，厚度以平皿1/2
深度为准。待凝固后加入0.1ml菌悬液，用灭菌玻璃涂
棒涂布均匀，静置片刻，然后在平皿中用灭菌Ф6m m
的不锈钢打孔器打孔， 用移液枪吸取0.5ml棘托竹荪浸提
液注入已打好的圆孔，细菌置于37℃的培养箱中培养
18h后，测量抑菌圈的大小[20]。同时用不同浓度的山梨
酸钾、乳酸链球菌素(nisin)(0.05mg /ml)作阳性对照，以
无菌水做空白对照。
1.3.3.2 最低抑菌浓度(MIC)的测定
配制营养肉汤培养基，121℃湿热灭菌。以提取液
作为100%原液，利用营养肉汤进行试管连续双倍稀释
法得棘托竹荪子实体浸提液浓度分别为100、50、25、
12.5、6.25、3.125、1.5625mg /ml，然后在每一系列培
养基接种一种菌，每个浓度三管平行，另取不接种任
何菌的培养基作为空白对照，记作CK1，置37℃下培
养1h，观察生长情况[21]。
将提取液的接种系列和空白系列用划线法接种、培
养，观察实验菌的生长情况，以平板中没有菌生长的
最低浓度即为提取液的最低抑菌浓度MIC。
1.3.3.3 活性pH值范围的测定
用50% 柠檬酸和2% NaOH溶液分别调节培养基的
pH为4、5、6、7、8五个梯度， 然后用比提取物MIC
低一个浓度梯度的提取液稀释液进行测定(方法同MIC 测
定)。实验中用无菌水作对照，记为CK2[22]。
1.3.3.4 热稳定性的测定
将棘托竹荪浸提液的原液分别置于100℃水浴、121℃
湿热条件下，热处理15 min 后加入培养基中混合均匀，
提取物浓度同MIC，再用划线法接种、培养，观察各
实验菌的生长情况，比较其抑菌作用的热稳定性[22]。
2 结果与分析
2.1 棘托竹荪浸提液的抑菌效果
实 验 对 象
抑菌圈直径(mm)
单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌 肠炎沙门氏菌 副溶血弧菌 大肠杆菌 O157:H7
棘 托 竹 荪 浸 提 液 9.75 8.00 8.75 11.00 9.25
山 梨 酸 钾 7.00 7.00 6.00 7.00 9.00
Nisin 11.00 10.00 6.00 7.00 7.00
山梨酸+Nisin 11.50 10.50 6.50 7.00 9.50
CK1 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00
表1 琼脂平板打孔法测定提取液的抑菌效果
Table1 Inhibitory zone diameters of aqueous extract of
Dictyophora echinovolvata fruitbody against Vibrio
parahaemolyticus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:
H7, Salmonella enteritidis and Staphylococcus aureus
由表1可以看出，棘托竹荪浸提液对5种常见的食
源性致病菌的抑制效果为：副溶血弧菌>单增李斯特菌>
大肠杆菌O157:H7>肠炎沙门氏菌>金黄色葡萄球菌。山
梨酸钾对病原菌的抑制作用不太明显，可能是因为培养
基的pH值不适合山梨酸钾发挥抑制作用。Nisin对革兰
氏阳性菌(单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌)的抑制效果
比较明显，但是对革兰氏阴性菌基本上没有抑制效果。
山梨酸钾与Nisin混合对细菌的抑制效果除了单增李斯特
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菌、金黄色葡萄球菌比较明显外，对其他细菌的抑制
作用不明显。
2.2 最低抑菌浓度(MIC)
提 取 提 取 液的 供试菌的生长情况
液 浓度(mg/ml)单增 李 斯 特菌 金黄 色 葡 萄球菌 肠炎沙门氏菌 副溶血弧菌 大肠杆菌O157:H7
棘
100 － － － － －
托
50 － － － － －
竹 25 － － － － －
荪 12.5 + + + － －
浸 6.25 + + + + +
提
3.125 + + + + + + + + +液
1.5625 + + + + + + + + + + + + + +
CK1 + + + + + + + + + + + + + + +
表2 提取液对5 种供试菌的MIC测定结果
Table 2 MICs of aqueous extract of Dictyophora echinovolvata
fruitbody against Vibrio parahaemolyticus, Listeria
monocytogenes, Escherichia coli O157:H7, Salmonella enteritidis
and Staphylococcus aureus
注：－.无菌生长；+.菌生长少；++.菌生长较多；+++.菌生长很多。
下同。
提 取 热处理 供试菌的生长情况
液 温度(℃) 单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌 肠炎沙门氏菌 副溶血弧菌 大肠杆菌O157:H7
棘 托 竹 荪 100 － － － － －
浸 提 液 121 + + + － －
表4 热处理对提取液抑菌作用的影响
Table 4 Effects of thermal treatment on antibacterial activity of
aqueous extract of Dictyophora echinovolvata fruitbody against
Vibrio parahaemolyticus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli
O157:H7, Salmonella enteritidis and Staphylococcus aureus
从表2中得知，棘托竹荪浸提液对单增李斯特菌、
肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的MIC为25mg /ml，副
溶血弧菌和大肠杆菌O157:H7的MIC为12.5mg /ml。
2.3 pH值对提取液抑菌活性的影响
从表3中可以看出，棘托竹荪浸提液除了对单增李
斯特菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑菌pH值
范围为4～6，而对其他两种病原菌的pH值抑菌范围为
4～7。空白对照组除pH4时稍有抑菌效果，其他几乎
没有抑菌作用，这可能是因为供试菌株的最适生长环境
为中性，不适合在酸性条件下生长的原因。
2.4 热处理对提取液抑菌效果的影响
热处理15 min后，观察热处理对提取液抑菌效果的
影响，结果见表 4。
由表4可以看出，棘托竹荪浸提液具有相对的热稳
定性，经121℃处理15min后对单增李斯特菌、肠炎沙
门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用有所下降，但是对
其他两种菌的抑制作用没有减弱。
3 结 论
棘托竹荪浸提液对5种食源性致病菌的抑菌效果具
有选择性，对肠炎沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑制
效果相对较弱，但是对单曾李斯特菌、副溶血弧菌、
大肠杆菌O157:H7有较好的抑制作用，且棘托竹荪浸提
液对副溶血弧菌和大肠杆菌O157:H7的MIC相对较小，
为12.5mg /ml。
棘托竹荪浸提液对单增李斯特菌、肠炎沙门氏菌起
抑菌作用的pH值范围为4～6，而对其他食源性致病菌
的抑菌pH值范围大致为4～7，说明棘托竹荪浸提液的
抑菌范围比较广。棘托竹荪浸提液经100℃热处理15min，
其抑菌活性却没有降低，但是经121℃处理15min后对单
增李斯特菌、肠炎沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活
性有所下降，表明棘托竹荪浸提液具有一定的热稳
定性。
食品中常见的防腐剂如山梨酸钾、Nisin，由于受
食品基质pH值的影响，所以抑菌效果不如棘托竹荪浸
提液的抑菌效果好，而且棘托竹荪又是食药用菌，可
以作为食品添加剂添加以开发利用。
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提 取 液 的 培养基 供试菌的生长情况
浓度(mg/ml)pH 单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌 肠炎沙门氏菌 副溶血弧菌 大肠杆菌O157:H7
4 － － － － －
棘托 5 － － － － －
竹荪 6 － － － － －
浸 提 液 7 + + + － －
8 + + + + + +
4 － － － － －
5 + + + + +
CK2 6 + + + + +
7 + + + + + + + + + +
8 + + + + + + + + + + + + + + +
表3 培养基pH值对提取液抑菌活性的影响
Table3 Effects of medium pH on antibacterial activity of aqueous
extract of Dictyophora echinovolvata fruitbody against Vibrio
parahaemolyticus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli O157:
H7, Salmonella enteritidis and Staphylococcus aureus
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