全 文 ：双花草珊瑚含片中绿原酸的含量测定
唐德智
(广西南宁食品药品检验所 ,广西 南宁 530001)
摘要:目的　建立双花草珊瑚含片中绿原酸的含量测定方法。方法　采用 Shim-packVP-ODSC18反相色谱柱(250 mm×4.6
mm, 5 μm),以乙腈 -0.2%磷酸(12∶88)为流动相;流速为 1.0 ml· min-1;检测波长 327 nm;柱温:30℃。 结果　绿原酸在
0.101 ～ 0.708 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9, n=7),平均加样回收率为 99.3%, RSD为 1.2%(n=6)。结论　本方法操
作简便 , 结果准确 、可靠 , 可用于双花草珊瑚含片中绿原酸的含量测定。
关键词:双花草珊瑚含片;绿原酸;反相高效液相色谱法
Determinationofchlorogenicacidinshuanghuacaoshanhuhanpian
TANGDe-zhi
(NanningInstituteforFoodandDrugControl, NanningGuangxi　530001, China)
Abstract:Aim　ToestablishamethodforthedeterminationofchlorogenicacidinshuanghuacaoshanhuhanpianbyRP-HPLC.Meth-
ods　ThechromatographiccolumnofShim-packVP-ODSC18(250 mm×4.6 mm, 5μm)wasused, themobilephaseconsistingof
acetonitrile-0.2% phosphoricacid(12∶88).Theflowratewas1.0ml· min-1.Thedetectionwavelengthwassetat327 nmandthe
columntemperaturewasmaintainedat30℃.Results　Thelinearrangewas0.101 ～ 0.708 μg(r=0.999 9, n=6).Theaveragerecov-
erywas99.3%, wiiththeRSDof1.2%(n=6).Conclusion　Themethodisconvenient, accurateandsuitableforthedeterminationof
chlorogenicacidinshuanghuacaoshanhuhanpian.
Keywords:shuanghuacaoshanhuhanpian;chlorogenicacid;RP-HPLC
　　双花草珊瑚含片是由肿节风 、金银花等中药制成的中药
制剂 , 具有疏风解热 、利咽止痛的功效 , 临床用于治疗咽喉干
灼 、疼痛 、声音嘶哑等症。方中金银花为主药 ,具有清热解毒 、
凉散风热的功效 , 其主要有效成分为绿原酸。目前 , 双花草珊
瑚含片的质量标准中还没有对金银花的成分进行检测控
制 [ 2] ,亦未见有相关文献报道。 本实验采用反相高效液相色
谱法对双花草珊瑚含片中绿原酸的含量测定方法进行了研
究 , 为该制剂的质量控制提供定量测定方法。经方法学研究 ,
证明本法可行 , 现报道如下。
1　仪器与试药
LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津公司);KQ-
300型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);绿原
酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 供含量测定用 , 批号:
110753-200413);双花草珊瑚含片(广西 A制药有限公司 规
格 0.5g/片 市售药品);乙腈为色谱纯 , 磷酸为色谱纯 , 水为
超纯水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　 色谱柱:岛津 Shim-packVP-ODSC
18
(250 mm×4.6mm, 5 μm);流动相:乙腈 -0.2%磷酸(12
∶88);检测波长:327nm;流速:1.0ml· min-1;柱温:30℃;进
样量:10μl。
2.2　对照品溶液制备 　精密称取经五氧化二磷减压干燥
器中干燥的绿原酸对照品 10.12 mg, 置 100 ml棕色量瓶中 ,
加 50%甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,即得 0.101 2 g· L-1对
照品储备溶液。精密量取 4 ml置 10 ml棕色量瓶中 , 加 50%
甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,作为对照品溶液(10℃以下保存)。
2.3　供试品溶液的制备 　取供试品 10片 , 精密称定 ,研细 ,
取约 1g, 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加 50%甲醇 25ml,
称定重量 , 超声处理 30 min(功率 300 W, 频率 40 kHz), 放
冷 , 再称定重量 ,用 50%甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 用
微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,取续滤液 , 即得。
2.4　阴性供试品溶液的制备 　按质量标准中的处方 ,按制
备工艺制成缺金银花的阴性供试品 , 再按供试品溶液的制备
方法制成阴性供试品溶液。
2.5　系统适用性试验 　 分别取对照品溶液 、供试品溶液和
阴 性供试品溶液各 10μl, 注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件
白和粘蛋白不灵敏 [ 2] , 可用于人血白蛋白的真假鉴别。
结果判定明显 , 该方法灵敏度高 , 与法定方法的结果一
致。 2005年版《中国药典 》三部中人血白蛋白制品的所有规
格中 , 最低蛋白质浓度为 5%, 而在试纸法中 ,蛋白质浓度为
0.5%时便能清晰观察到颜色变化 ,完全适用。
该方法不需要任何仪器 ,所用试纸无特殊要求 , 检验成本
低廉 , 即刻便能观察到测试结果 ,作出判断。操作方法简便 、
安全 、易学。
此方法能够提高现场对药品进行初筛的能力 , 快速鉴别
涉嫌的假药 , 及时打击制假 、售假。同时可以有效避免盲目抽
样 , 提高基层药品技术监督的效能。
参考文献:
[ 1] 　肖　林 ,沈　琦.快速鉴别真假人血白蛋白方法的建立与评价
[ J] .中国药事 , 2007, 21(8):589.
[ 2] 　叶应妩 ,王毓三 ,申子瑜.全国临床检验操作规程 [ M] .3版.南
京:东南大学出版社 , 2006:280.
(收稿日期:2009-02-24)
·1357·安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2009 Nov;13(11)
　　　　 　　　　　 　　　　　
　　　　　A　绿原酸对照品 　　　　　　　　　　　　　　　B　样品 　　　　　　　　　　　　　　　C　阴性
图 1　双花草珊瑚含片的 HPLC图(注:1.绿原酸)
测定 , 记录色谱图 ,结果见图 1。结果阴性供试品的色谱图在
绿原酸保留时间的相应位置上无绿原酸峰出现 , 此方法专属
性强 , 阴性对照无干扰。
2.6　线性关系考察 　精密吸取 “ 2.2”项下对照品储备溶液
1.0、 2.0、3.0、4.0、 5.0、 6.0、 7.0 ml, 分别置 10 ml棕色量瓶
中 , 用 50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀。分取上述不同浓度对照
品溶液 10μL, 注入液相色谱仪 , 依法测定。以对照品进样量
(μg)为横坐标 ,以峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 计
算回归方程 Y=2.37×106X+3.32×103 , r=0.999 9(n=7)。
表明绿原酸进样量在 0.101 ～ 0.708 μg范围内 , 进样量与峰
面积呈良好的线性关系。
2.7　精密度试验 　精密吸取对照品溶液 10μl, 重复进样 6
次 , 峰面积积分值的 RSD为 0.65%,表明仪器精密度良好。
2.8　稳定性试验 　取供试品溶液(批号 060902),按上述色
谱条件 , 分别于 0, 2, 4, 6, 8, 10 h进样 1次 , 记录色谱峰面积 ,
RSD为 1.12%, 表明供试品溶液在 10 h内稳定性良好。
2.9　重复性试验 　取同一批号的双花草珊瑚含片样品(批
号 060902), 按供试品溶液的制备方法制备 6份供试品溶液 ,
分别依法测定 , 计算绿原酸含量 , 结果平均含量为 0.46 mg/
片 , RSD为 0.96%。表明此方法精密度良好。
2.10　回收率试验 　取已知绿原酸含量(批号 060902绿原
酸含量为 0.46 mg/片)的样品约 0.5 g共 6份 , 精密称定 , 分
别精密加入一定量的绿原酸对照品 , 照 “ 2.3”项下方法操作 ,
制备供试品溶液 , 按上述色谱测定 ,计算回收率。结果绿原酸
平均加样回收率为 99.3%, RSD为 1.2%,测定结果见表 1。
表 1　加样回收率试验结果(n=6)
取样量
(g)
相当绿原酸
的量(mg)
对照品加入
量(mg)
实测值
(mg)
回收率
(%)
0.500 5 0.460 0.233 0.695 100.9
0.501 2 0.461 0.233 0.691 98.7
0.498 9 0.459 0.466 0.918 98.5
0.503 7 0.463 0.466 0.931 100.4
0.502 6 0.462 0.699 1.158 99.6
0.499 4 0.459 0.699 1.142 97.7
2.11　样品测定结果　取 5批双花草珊瑚含片 , 依法制备供
试品溶液 , 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μl,
注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 按外标法计算双花草
珊瑚含片中绿原酸的含量 ,结果见表 2。
表 2　双花草珊瑚含片中绿原酸的含量测定结果(n=5)
批号 绿原酸 /(mg/片 ) RSD/%
060901 0.45 1.12
060902 0.46 0.96
060903 0.49 0.89
070806 0.58 1.15
080103 0.39 1.08
3　讨论
双花草珊瑚含片中金银花为君药 , 绿原酸为金银花中的
主要有效成分 [ 1] 。 本实验参考有关文献 [ 3 ～ 8] , 采用 HPLC测
定双花草珊瑚含片中绿原酸含量 , 该法简便 、准确 、重现性好 ,
可用于该制剂的质量控制和分析。
绿原酸对照品溶液在自然光下稳定性较差 ,易产生分解 ,
因此操作中应注意闭光 , 选择采用棕色量瓶。
在实验过程中采用甲醇 、 50%甲醇溶液和 70%乙醇溶液
同法处理样品 , 结果表明 50%甲醇溶液提取绿原酸的含量最
高。同时考察超声处理及回流提取法 , 结果表明 ,两种提取方
法绿原酸的含量差异性不大 , 考虑到实验上操作方便 , 故采用
超声法处理样品。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中国药典(一部)[ S] .北京:化学工业出版
社 , 2005:152-3.
[ 2] 　国家药典委员会.国家药品监督管理局国家药品标准(试行)
[ S] .WS-5402(B-0402)-2002.
[ 3] 　张晓燕 ,汪选斌 ,王　菊 ,等.RP-HPLC法测定金菊花露中绿原
酸的含量 [ J] .中国药师 , 2009, 12(3):402-3.
[ 4] 　王跃茹 ,王　利 , 陈卫东.HPLC法测定清肺饮中绿原酸的含量
[ J] .安徽医药 , 2009, 13(2):156-7.
[ 5] 　肖　凌 ,聂　晶 , 郭　晨.HPLC法测定金青感冒颗粒中绿原酸
的含量 [ J] .中国药事 , 2009, 23(1):68-9.
[ 6] 　李瑞麟 ,范鲁雁 ,刘　骅.高效液相色谱法测定消癌平颗粒剂中
绿原酸的含量 [ J] .安徽医药 , 2008, 12(12):1163-4.
[ 7] 　邱海蕴 ,袁才琼 ,康红英.RP-HPLC法测定羚羊感冒片中绿原
酸的含量 [ J] .中国药师 , 2008, 11(10):1218-9.
[ 8] 　刘文丽.HPLC法测定银黄颗粒中绿原酸的含量 [ J] .安徽医药 ,
2007, 11(8):711-2.
(收稿日期:2009-05-26)
·1358· 安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2009 Nov;13(11)