全 文 ：掀起定量板 ,在粪样上覆盖含孔雀绿甘油的玻璃纸
条 ,展平后用压板加压 ,粪样即在玻璃纸和玻片之间
铺成椭圆形。在 37℃温箱中透明 1 h后镜检并作虫
卵计数 。每克粪便虫卵数(EPG)为每板虫卵总数乘
以 24 ,再乘以粪便性状系数 。
将宽 2 cm㎝的透明胶纸剪成长约 6 cm 的小
段 ,将一端向胶面折叠约 0.5 cm ,再贴在干净的载
玻片上。玻片一端写受检查姓名 、编号等。检查时 ,
将胶纸揭下 ,用胶面粘贴肛门周围皮肤 ,然后将胶面
平铺于载玻片上 ,低倍镜下检查。
4 结 果
巩义市人群土源性线虫感染情况 ,2009年共调
查 912人 ,其中 26人阳性 ,感染率为 2.8%,2010年
共调查 536 人 ,其中 11人阳性 , 感染率为 2.5%,
2011年共调查 576 人 , 其中 9 人阳性 , 感染率为
1.96%,见表 1。
表 1 巩义市人群土源性线虫感染情况统计表
年份 检测人数 阳性人数 感染率(%)
2009 912 26 2.8
2010 536 11 2.5
2011 576 9 1.96
5 讨 论
土源性线虫指不需要中间宿主 ,其虫卵或幼虫
在外界(主要指土壤)发育到感然期后直接感染人的
线虫 ,如蛔虫 、鞭虫 、钩虫等[ 1] 。蛲虫卵不需要在土
壤发育 ,但其生活史和蛔虫 、鞭虫 、钩虫一样是直接
型的 ,传播途径 、诊断方法和治疗药物相同或相近 ,
故一般把蛲虫也归为土源性线虫 。
土源性线虫的流行与自然因素 、社会经济因素
和人类行为有关 。近年来 ,随着社会经济发展水平
的提高和健康教育知识的宣传普及 ,全国土源性线
虫感染率呈下降趋势 ,本实验结果表明 ,我市的土源
性线虫感染率也逐年下降。
肠道寄生虫病的防治是一项社会性 、群众性的
工作 ,土源性线虫又与当地居民的生活习惯 、生产方
式和自我保健意识等综合因素有关[ 2] 。要认真落
实预防措施 ,加强改水改厕 、改善环境卫生 、避免粪
便污染水源和土壤 ,实施健康教育 ,通过广泛的宣传
提高人们的健康观念 ,形成良好的生活习惯和饮食
卫生行为 。可以采用驱虫治疗为主的综合措施 ,根
据不同流行程度 ,实行集体驱虫或选择性驱虫。
参考文献:
[1] 谭丹阳.金城江区土源性线虫感染情况调查[ J] .中国卫
生检验杂志 ,2012 ,22(1):154.
[2] 余品红.湖北省土源性线虫感染情况调查[ J] .中国病原
学杂志 ,2006 ,1(4):294.
收稿日期:2012-01-13
基金项目:贵州省教育厅自然科学类重点项目(黔科教
2008027);贵州省科技厅联合基金项目(黔科合中药字[ 2010] LKZ7029)作者简介:毛午佳(1986-),女 ,回族 ,硕士研究生在读 ,专业:中药
化学与新药研发。通讯作者:贾宪生 ,副主任药师。
薄层色谱扫描法测定薏苡种皮
及糠中 3种氨基酸的含量
毛午佳 ,贾宪生 ,赵丹艺
(贵阳中医学院 ,贵阳 550002)
摘要:目的:建立薄层色谱法测定薏苡种皮糠中氨基酸含量的方法。方法:采用硅胶 G 薄层板 ,展开剂为正丁
醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8∶2∶2∶3), 茚三酮试液显色 , 双波长锯齿扫描 , λS= 550nm ,λR= 710nm。结果:
缬氨酸线性范围为 0.096 ～ 0.672 μg(r=1.000), 平均回收率为 101.80%, RSD=2.33%;亮氨酸线性范围为
0.1832 ～ 1.2824μg(r=0.996),平均回收率为 97.97%, RSD=2.13%;丙氨酸线性范围为 0.3224 ～ 2.3268
(r = 0.996),平均回收率为 102.37%, RSD=2.17%。结论:方法用于氨基酸的测定简便 ,快速 , 准确。
关键词:薏苡种皮;氨基酸;含量测定;薄层色谱扫描法
中图分类号:Q592 文献标识码:B 文章编号:1005-5320(2012)03-0042-03
薏苡(Coix .lacryma — jobi .L .Var.mayuen
(Roman)Stapf 为禾本科植物[ 1] , 薏苡仁的营养价
值高 ,被誉为“世界禾本科植物之王” ,它含有人体
所必需的 8种氨基酸 ,并且比例非常接近人体的需
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第 3 期
No.3
微 量 元 素 与 健 康 研 究
Studies of T race Elements and Health
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要 ,亮氨酸 、酪氨酸含量均高于小麦 ,脂肪含量为大
米和小麦粉的 3 ～ 4 倍[ 2] 。贵州省黔西南州是薏苡
栽培主产区之一 , 现有栽培面积近 20 万亩 ,年产薏
仁米 4万余吨 ,其中兴仁县年产 2.5万吨 ,晴隆县年
产 1.4万吨。薏苡外种皮及糠是薏仁米加工生产过
程中产生的废弃物 ,有报道薏苡米与糠皮相比 ,有多
种元素薏苡糠皮都比薏苡米的含量高 ,其中 Zn 高
3.1倍 , Ca7.2 倍 , Fe3.1 倍 , Cu3.2 倍 , Mg11.7倍 ,
Mn4.4倍[ 3] 。本实验采用薄层扫描法对不同产地
的薏苡种皮及糠中 3种氨基酸的含量进行分析测
定 ,为进一步的开发及综合利用资源提供科学依据 。
1 仪器 、试剂与试药
1.1 仪器
CS-9301PC 双波长飞点薄层色谱扫描仪(日
本岛津公司),CAMAG LINOMAT V半自动点样仪
(瑞士卡玛公司),CX-250型超声波清洗机(北京
市医疗设备二厂),AE-240 分析天平(瑞士 MET-
TLER TOLEDO公司)。
1.2 试剂与试药
缬氨酸 (Aminovaleic acid , 批号:110874 ～
200203 ,由中国药品生物制品检定所提供),亮氨酸
(Leucine ,批号:876-200204 ,由中国药品生物制品
检定所提供), 丙氨酸(Aminopropionic acid , 批号:
0873-9802 ,由中国药品生物制品检定所提供);硅
胶G板(青岛海洋化工厂);其余试剂均为分析纯 。
薏苡种皮和糠收购于贵州省晴隆县和兴仁县 。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱分析条件
吸附剂:硅胶G 薄层板(10cm ×10cm),点状点
样。展开剂为正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8∶2
∶2∶3),展开 ,晾干;喷以茚三酮溶液 ,100℃加热至斑
点显色清晰 ,对照品与样品在相同位置显相同颜色
的斑点 。扫描条件:双波长反射法锯齿扫描 , λS =
550 nm ,λR=710 nm 狭缝。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取种皮粗粉 2.0g ,置具塞锥形瓶中 ,精
密加入 30%的乙醇 25 ml ,称定重量 ,超声(功率
150w ,频率 20kHz)处理 30 min ,放冷 ,再称定重量 ,
用 30%乙醇溶液补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,滤液
作为供试品溶液 。
2.3 对照品溶液的制备
分别精密称取缬氨酸 、亮氨酸和丙氨酸对照品
适量 ,加 70%甲醇溶液分别制成每 1m l含 0.960mg
缬氨酸的溶液 ,每 1 m l含 0.916 mg 亮氨酸的溶液
和每 1 ml含 1.108 mg 丙氨酸的溶液 ,作为对照品
储备液 ,分别吸取缬氨酸 、亮氨酸和丙氨酸对照品储
备液 0.5 ml 、1 ml 、1.5 ml于 5 m l的容量瓶中 ,稀释
至刻度 ,作为对照品溶液。
2.4 标准曲线的制备及线性关系的考察
精密吸取对照品溶液 1 μl 、2 μl、3 μl 、4 μl 、5 μl、
6 μl 、7 μl ,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,照薄层色
谱条件和扫描条件展开 ,取出 ,晾干 , 显色 ,进行扫
描 ,以点样量为横坐标(X),以吸收峰面积值为纵坐
标(Y),分别绘制标准曲线并计算回归方程 , 3种氨
基酸的回归方程和线性范围分别为:
缬氨酸:Y =1093.3X +7.8283(r =1.000),
0.096 ～ 0.672μg
亮氨酸:Y =2234.4X +160.7 (r =0.996),
0.1832 ～ 1.2824 μg
丙氨酸:Y=3378.7X+860.58(r=0.996), 0.
3224 ～ 2.3268μg
2.5 稳定性实验
在同一薄层板上 ,分别点对照品溶液 1 μl与 5
μl ,供试品溶液 4μl ,每隔 30 min扫描测定一次斑点
的峰面积积分值 ,共测定 6 次 ,缬氨酸 、亮氨酸和丙
氨酸的 RSD 分别为 1.17%, 0.84%, 1.74%,实验
结果表明:样品显色后在 3h内基本稳定 。
2.6 精密度试验
2.6.1 同板精密度
取同一硅胶 G 薄层板 ,分别点同一供试液 6个
点 ,每个点点样 4μl ,并以对照品溶液 1 、5μl为随行标
准 ,依照上述薄层色谱分析条件操作 ,测定 6个点的
峰面积积分值 ,缬氨酸 、亮氨酸和丙氨酸的 RSD值分
别为 1.76%,2.54%,0.70%,表明同板精密度良好 。
2.6.2 异板精密度
取 6块硅胶G 薄层板 ,分别点同一供试液 4μl ,
并以对照品溶液 1 、5 μl为随行标准 ,依照上述薄层
色谱分析条件操作 ,分别测定不同薄层板上供试液
的峰面积积分值 , 缬氨酸 、亮氨酸和丙氨酸的 RSD
值分别为 1.77%,2.31%,1.97%,表明异板精密度
良好。
2.7 重复性实验
精密称取同一样品 6 份 ,按“供试品制备方法”
及“薄层色谱分析条件”操作 ,测定 3 种氨基酸的含
量 ,缬氨酸的平均含量为 1.424 mg/g , RSD 为
3.02%;亮氨酸的平均含量为 0.817 mg/g , RSD为
3.66%;丙氨酸的平均含量为 1.969 mg/g , RSD为
3.58%,表明重复性良好。
2.8 加样回收率实验
精密称取已知缬氨酸含量(1.424%),亮氨酸含
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量(0.817%),丙氨酸含量(1.969%)的同一批样品
6份 ,每份0.5 g ,分别精密加入浓度为 1.114 mg/ml
缬氨酸对照品溶液 0.6 ml ,浓度为 0.437 mg/ml亮
氨酸对照品溶液 1 m l ,浓度 0.921 mg/ml丙氨酸对
照品溶液 1 ml ,按照“供试品溶液的制备方法”制备
供试液 ,按“薄层色谱分析条件”操作 ,测定 3种氨基
酸的含量 ,计算回收率 ,结果见表 1 。
表 1 缬氨酸 、亮氨酸 、丙氨酸加样回收率实验结果
测定
成分
称样量
(g)
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
检出量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
缬氨酸
0.5076
0.5008
0.5013
0.5005
0.5066
0.5028
0.7228
0.7131
0.7139
0.7127
0.7124
0.7160
0.6684
0.6684
0.6684
0.6684
0.6684
0.6684
1.417
1.399
1.383
1.412
1.369
1.392
103.86
102.64
100.09
104.64
98.36
101.23
101.80 2.33
亮氨酸
0.5076
0.5008
0.5013
0.5005
0.5066
0.5028
0.4147
0.4092
0.4095
0.4089
0.4139
0.4108
0.437
0.437
0.437
0.437
0.437
0.437
0.8548
0.8418
0.8255
0.8288
0.8401
0.8450
100.69
98.98
95.19
96.08
97.53
99.36
97.97 2.13
丙氨酸
0.5076
0.5008
0.5013
0.5005
0.5066
0.5028
0.9995
0.9860
0.9871
0.9855
0.9975
0.9900
0.921
0.921
0.921
0.921
0.921
0.921
1.9728
1.9321
1.9208
1.9435
1.9159
1.9126
105.67
102.73
101.37
104.02
99.71
100.17
102.37 2.17
2.9 样品测定
取不同产地的薏苡种皮及糠 ,粉碎成粉末 ,精密
称定 ,按“供试品溶液制备方法”制备供试液 ,按“薄
层色谱分析条件”操作 ,测定不同产地薏苡种皮及糠
中 3种氨基酸的含量 ,结果见表 2。
表 2 不同产地薏苡种皮及糠中氨基酸含量测定结果
产地 样品名称
缬氨酸含量
(mg/g)
亮氨酸
(mg/g)
丙氨酸
(mg/g)
晴隆县沙子乡 种皮 0.269 0.372 0.912
晴隆县碧痕乡 种皮 0.231 0.291 1.009
兴仁县 种皮 0.222 0.356 0.884
云南 种皮 0.172 0.275 0.678
晴隆县 糠 0.716 1.000 2.641
兴仁县 糠 0.653 1.063 2.953
云南 糠 0.666 0.878 2.635
3 讨 论
3.1 氨基酸受热不稳定 ,易发生变化 ,实验中考察
了超声 、冷浸和 50℃回流提取方法 ,经比较以超声
提取法制备供试液较好 。超声提取法可避免氨基酸
受热而被破坏 ,省时 ,提取效率较高。实验中供试液
应避免长时间受高温 、强光等因素影响 。乙醇浓度
在提取过程的影响最为显著 , 分别考察了 30%、
50%和 70%3种不同浓度乙醇提取的效果 ,经比较
以 30%的稀醇提取含量较高。
3.2 实验中氨基酸显色需要加热 ,应控制温度和加
热时间的一致。
3.3 本方法测定氨基酸不需要衍生化 ,简便快速 ,
显色后斑点清晰易于测定 ,专属性较强。
参考文献:
[1] 国家药典编委会.中华人民共和国药典一部 [ M ] .中国
医药科技出版社 , 2010.28.
[2] 彭玉清.薏苡仁的营养价值[ J] .健康饮食 ,2009 , (3):52
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[3] 刘春兰 ,杨若明 ,周宜君 ,等.贵州薏苡无机元素的分析
[ J] .微量元素与健康研究 ,2004 , 21(6):41.
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