全 文 ：收稿日期:2012-04-25 接受日期:2012-09-10
* 通讯作者 Tel:86-015034939320;E-mail:chj25825@ yahoo． com． cn
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2013，25:221-223
文章编号:1001-6880(2013)1-0221-03
蒙药材刺柏叶中槲皮苷的含量测定
崔鸿江1* ，巴德玛2，林 燕2
1内蒙古医学院第二附属医院，呼和浩特 010030;2内蒙古自治区食品药品检验所，呼和浩特 010010
摘 要:本实验建立了蒙药材刺柏叶中槲皮苷的 HPLC 含量测定方法。色谱条件为:Diamonsil C18(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm)和 Shim-Pack C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相:甲醇-0． 01 mol /L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸
(40∶ 60∶ 1． 5) ，检测波长:254 nm，流速:1． 0 mL /min，柱温:30 ℃。槲皮苷进样量在 40． 2 ng ～ 603． 0 ng范围内线
性关系良好(r = 0． 9998) ，其平均加样回收率为 100． 45%，RSD为 0． 69%(n = 6)。本方法简便易行，结果准确，
重复性好，可用于刺柏叶中槲皮苷的含量测定。
关键词:高效液相色谱法;刺柏叶;槲皮苷;含量测定
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
Quantification of Quercitrin in Juniper Leaves
CUI Hong-jiang 1* ，BA De-ma 2，LIN Yan 2
1Second Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical College，Hohhot 010030;
2Food and Drug Control in Inner Mongolia，Hohhot 010010
Abstract:A HPLC method was developed and validated for the quantification of quercitrin in a Mongolia herb，namely
juniper leaves． Chromatographic separation was carried out using Diamonsil C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)column and
Shim-pack C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)column with methanol-0． 01 mol /L potassium dihydrogen phosphate solu-
tion-acetic acid (40∶ 60∶ 1． 5) ，at flow rate of 1． 0 mL / min． The UV detection wavelength was set at 254 nm． The col-
umn temperature was 30 ℃ ． Good linearity (r = 0． 9998)of the peak area vs the injection volume (40． 2 ng-603． 0 ng)
was obtained using the developed method． The average recovery was 100． 45% with 0． 69% of RSD (n = 6)． The method
was simple，accurate and reproducible． It can be used for the quantification of quercitrin in the juniper leaves．
Key words:HPLC;juniper leaves;quercitrin;quantification
刺柏为柏科植物杜松(Juniperus rigida Si eb． Et
Zucc．)的干燥嫩枝叶，为蒙医临床常用药，具清肾
热、利尿、燥“协日乌素”愈伤止血等功效，主要用于
治疗尿血、尿道疼痛、炭疽、风湿、肾“达日干”、“协
日乌素”等病症［1］。该品种质量标准收载于《卫生
部药品标准》蒙药分册，其中未规定含量测定项。
为提高蒙药材质量标准，根据国家药典委员会专家
的建议，对刺柏叶中主要活性成分之一槲皮苷，采用
高效液相色谱法进行了含量测定研究，经实验条件
摸索，结果达到了较好的液相色谱分离效果，方法简
便，重复性好，可作为控制刺柏叶药材内在质量的有
效方法。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
日本岛津 LC-20AT型高效液相色谱仪(带 SPD-
M20A型二极管阵列检测器) ;Sartoriμs ME5 型电子
天平;Mettler AE-100 电子天平;PL203 型电子天平。
1． 2 试剂与试药
槲皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提
供，批号:111538-200302) ，甲醇为色谱纯，其他均为
分析纯试剂，水为离子交换高纯水。
1． 3 供试样品
刺柏叶药材分别由内蒙古自治区锡盟蒙医研究
所(1 号)、内蒙古自治区中蒙医医院(2 号)、内蒙古
自治区阿拉善盟蒙医医院(3 号)和内蒙古自治区锡
林郭勒盟正蓝旗(4 号)提供，经内蒙古自治区食品
药品检验所康双龙、周凯两位国家药典委员会委员
鉴定为柏科植物杜松(Juniperus rigida Si eb． Et
Zucc．)的干燥嫩枝叶。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件的选择
2． 1． 1 色谱柱
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，本实验
研究采用Diamonsil C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)柱和
Shim-Pack C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)柱。
2． 1． 2 流动相的选择
参照《中国药典》［2］“侧柏叶”含量测定项下的
方法，采用甲醇-0． 01 mol /L 磷酸二氢钾溶液-冰醋
酸(40∶ 60∶ 1． 5)作为流动相，分离效果好、保留时间
适中，流速:1． 0 mL /min。在选定条件下，槲皮苷峰
与样品中其他组分色谱峰可达基线分离，分离度大
于 1． 5;按槲皮苷峰计算，理论塔板数在 3000 以上。
色谱图见图 1、2。
2． 1． 3 柱温
本实验对 30 ℃和 40 ℃柱温进行了考察，结果
保留时间略有差异，但分离度及理论板数没有变化，
从资源角度考虑，故本实验研究将柱温定为 30 ℃。
2． 1． 4 检测波长的选择
取槲皮苷对照品溶液，通过二极管阵列检测器
对槲皮苷自 200 ～ 800 nm 进行光谱扫描，结果槲皮
苷在 255 nm处有吸收峰，结合《中国药典》2010 年
版一部“侧柏叶”含量测定项下的条件，故选择 254
nm作为检测波长。
2． 2 试验溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液的制备
精密称取槲皮苷对照品适量，置量瓶中，加甲醇
制成每 1 mL含 20 μg的溶液，即得。
2． 2． 2 供试品溶液的制备
取本品粉末(过 2 号筛)约 0． 2 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，密塞，称定重
量，加热回流 45 min，取出，放冷，再称定重量，用甲
醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 3 线性关系考察
取槲皮苷对照品 2． 010 mg，置 100 mL 量瓶中，
加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密吸取 2、5、
10、15、20、30 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件
测定，以峰面积对进样量进行回归分析，绘制标准曲
线，其回归方程为:Y = 2776． 56X + 3349． 05，r =
0． 9998。结果表明:在上述色谱条件下，槲皮苷进样
量在 40． 2 ng ～ 603． 0 ng 范围内与其峰面积呈良好
的线性关系。
2． 4 精密度试验
取同一地区的供试品(1 号样)6 份，各约 0． 4
g，精密称定，分别按上述供试品溶液的制备和色谱
条件进行测定，进样量各 10 μL，分别注入液相色谱
仪，测定每份含量，求得槲皮苷平均含量为 2． 23
mg /g，结果 RSD 为 0． 12%，表明该方法精密度良
好。
2． 5 重复性试验
精密称取刺柏叶供试品(1 号样)6 份样品，按
供试品溶液制备方法操作，每份进样 2 次，每次进样
量为 20 μL，计算槲皮苷的含量及相对标准偏差，结
果 RSD为 1． 82%，表明该方法重复性良好。
2． 6 加样回收率试验
取同一供试品(含槲皮苷 2． 23 mg /g)6 份，各约
0． 1 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入
对照品溶液 10 mL(槲皮苷浓度为 0． 02216 mg /
mL) ，再分别精密加甲醇 10 mL，按上述供试品溶液
的制备和色谱条件进行测定，试验结果表明，槲皮苷
平均回收率为 100． 45% (n = 6) ，RSD 为 0． 69%。
说明该测定方法测定结果准确。回收率试验结果见
表 1。
2． 7 耐用性试验
2． 7． 1 色谱柱的考察
换不同厂家、不同型号的色谱柱，按确定的色谱
条件，取精密度试验中的同一份供试品溶液进行测
定，平均含量分别为:2． 232 mg /g 和 2． 139 mg /g，相
对偏差为 2． 12%。结果表明，该方法对不同型号的
色谱柱有较好的耐用性。
222 天然产物研究与开发 Vol. 25
表 1 槲皮苷加样回收率试验
Table 1 Results of recovery tests
序号
No．
样品质量
Quality (g)
供试品含量
Content (mg)
对照品加入量
Spiked amount
(mg)
测得总量
Detected
(mg)
回收率
Recovery
(%)
平均回收率
Average recovery
(%)
RSD
(%)
1 0． 1005 0． 2241 0． 4445 99． 45
2 0． 1012 0． 2256 0． 4489 100． 76
3 0． 1014 0． 2261 0． 4502 101． 12
4 0． 1009 0． 2250 0． 2216 0． 4474 100． 36 100． 45 0． 69
5 0． 1007 0． 2245 0． 4458 99． 86
6 0． 1013 0． 2258 0． 4500 101． 17
2． 7． 2 稳定性试验
在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液和供
试品溶液各 10 μL，分别注入液相色谱仪，测定，然
后每隔 6 h 测定 1 次，考察 24 h，再于 48 h 考察 1
次。结果表明，对照品和供试品溶液至少在 48 h 内
测定结果稳定，槲皮苷对照品峰面积的 RSD 为
0. 23%(n = 6) ，供试品中槲皮苷峰面积的 RSD 为
0． 38%(n = 6)。
2． 8 样品的含量测定
取 4 批样品各 0． 2 g，精密称定，照供试品溶液
制备项下操作，制成供试品溶液。在上述色谱条件
下，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 μL，分
别注入液相色谱仪测定，并计算各样品中槲皮苷含
量(按干燥品计算)。测定结果见表 2。
表 2 样品中槲皮苷的含量测定结果
Table 2 Quantification results of quercitrin in samples from different sources
样品
Samples
水分
Water content
取样量
Sampling quantity (g)
槲皮苷含量
Content (%)
平均含量
Average content (%)
锡盟蒙医研究所 3． 8% 0． 2004，0． 2011 0． 244，0． 244 0． 24
内蒙中蒙医医院 3． 6% 0． 2011，0． 2012 0． 233，0． 234 0． 23
阿盟蒙医医院 3． 5% 0． 2006，0． 2005 0． 231，0． 231 0． 23
锡盟正蓝旗 5． 6% 0． 2068，0． 2137 0． 249，0． 243 0． 25
3 讨论
3． 1 测定方法的选择
蒙药材刺柏叶的质量标准收载于《卫生部药品
标准》蒙药分册，其中未规定含量测定项，检测项目
无法满足目前的质量控制要求，因此，为进一步提高
蒙药材的质量标准，根据国家药典委员会的建议，我
们首次对该品种进行了高效液相色谱法的研究，结
果达到了较好的液相色谱分离效果，方法简便，重复
性好，可作为控制刺柏叶药材内在质量的有效方法。
3． 2 提取溶剂的选择
文献报道［3］槲皮苷溶于乙醇，碱性水溶液，几
乎不溶于冷水、乙醚中，曾使用甲醇、乙醇作溶剂进
行提取，结果均可检出槲皮苷成分，而用甲醇作为提
取溶剂，易过滤，干扰成分少，结合《中国药典》“侧
柏叶”含量测定项下的方法，本实验选择甲醇为提
取溶剂。
3． 3 提取效率考察
本实验分别考察回流提取时间为 20、30、45、
60、90、120 min六个不同提取时间点对含量结果的
影响，结果显示回流提取时间 45 min 时含量达到最
大值，再继续回流提取，含量基本不再增加，为了节
约能源，提高实验效率，故本实验选择回流提取时间
为 45 min。
3． 4 指标成分的选择
选择具有抗病毒作用的槲皮苷［3］，作为含量测
定的指标成分，采用 HPLC 测定其含量，方法简便，
结果准确，稳定性好，可有效控制蒙药材刺柏叶的内
在质量。
参考文献
1 Chinese Pharmacopoeia Commission(国家药典委员会)．
Drug Standard of Ministry of Health of the Peoples Republic
of China《中华人民共和国卫生部药品标准》Mongolian
Medicine Volume(蒙药分册)． Beijing:Chemical Industry
Press，1998． 23．
2 Chinese Pharmacopoeia Commission(国家药典委员会)．
Pharmacopoeia of the People’s Republic of China (中华人
民共和国药典)． Beijing:China Medical Science Press，
2010，I:200．
3 State Administration of Traditional Chinese herbal medicine
Information Center station(国家医药管理局中草药情报中
心站)． Herbal effective ingredients manual(植物药有效成
分手册)． Beijing:Peoples Health Press，1986． 877．
322Vol. 25 崔鸿江等:蒙药材刺柏叶中槲皮苷的含量测定