全 文 ：［收稿日期］ 20140804( 013)
［基金项目］ 辽宁省教育厅创新团队项目( LT2012018) ;辽宁省科技厅项目( 2011412004)
［第一作者］ 慕善学，硕士，工程师，从事药物分析学研究，TeL: 024-23986268，E-mail: 2368326396@ qq． com
［通讯作者］ * 孙立新，博士，教授，从事药物分析学研究，TeL: 024-23986365，E-mail: slx04@ 163. com
HPLC同时测定了哥王中芦荟大黄素和大黄素甲醚的含量
慕善学1，孙丽霞1，2，魏岚1，徐翠玲1，孙立新1*
( 1. 沈阳药科大学 药学院，沈阳 110016; 2. 沈阳药科大学 中药学院，沈阳 110016)
［摘要］ 目的:建立 HPLC法同时测定了哥王中芦荟大黄素和大黄素甲醚含量的方法。方法:采用 C18色谱柱( 4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相 A为乙腈，流动相 B为体积分数为 0. 15%磷酸水，梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 254 nm，柱
温 30 ℃。结果:芦荟大黄素和大黄素甲醚的质量浓度分别在 1. 584 ～ 25. 34 ( r = 0. 999 2 ) 和 1. 598 ～ 25. 57 μg·mL －1 ( r =
0. 999 3) 内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为 100. 2% ( ＲSD 1. 8% ) 和 99. 7% ( ＲSD 1. 1% ) 。不同产地了哥王
中大黄素甲醚和芦荟大黄素含量差异较大，其中广东韶关产地的芦荟大黄素含量最高，大黄素甲醚含量最低; 福建福州产地
的大黄素甲醚含量最高，芦荟大黄素含量最低;浙江( 批号 120724) 了哥王未检测到芦荟大黄素，贵州安顺产地的了哥王中未
检测到大黄素甲醚。结论:该方法简便、快速、准确，为了哥王药材的质量控制提供参考。
［关键词］ 了哥王; 高效液相色谱法; 含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903( 2015) 18-0073-03
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015180073
Simultaneous Determination of Aloe-emodin and Physcion in Wikstroemia indica by HPLC MU Shan-xue1，
SUN Li-xia1，2，WEI Lan1，XU Cui-ling1，SUN Li-xin1* ( 1. School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical
University，Shenyang 110016，China; 2. School of Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，
Shenyang 110016，China)
［Abstract］ Objective: To develop an HPLC method for the simultaneous determination of aloe-emodin
and physcion in Wikstroemia indica． Method: Diamonsil C18column ( 4. 6 mm ×250 mm，5 μm) was eluted with the
mobile phases of acetonitrile-0. 10% phosphoric acid water in a gradient mode． The UV detection wavelength was 254
nm． The flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The column temperature was set at 30 ℃，and the sample size was 20 μL．
The difference in the content of aloe-emodin and physcion in W． indica from from ten origins was compared． Ｒesult:
All of aloe-emodin and physcion samples showed a good linearity within the range of 1. 584-25. 34 mg·L －1 ( r =
0. 999 2) ，1. 598-25. 57 mg·L －1 ( r = 0. 999 3) ，respectively． The average recoveries were 100. 2% and 99. 7%，
with ＲSD of 1. 8% and 1. 1%，respectively． There was a great difference in the content of aloe-emodin and physcion
in W． indica of different origins． Specifically，W． indica from Shaoguang，Guangdong province，had the highest
content of aloe-emodin but the lowest content of physcion; W． indica from Fuzhou，Fujian province，had the highest
content of physcion but the lowest content of aloe-emodin． Aloe-emodin was not detected in 120724 W． indica from
Zhejiang，and physcion was not detected from Anshun，Guizhou province． Conclusion: The method is simple，rapid
and accurate and so can be applied for the quality control of W． indica．
［Key words］ Wikstroemia indica; HPLC; content determination
了哥王具有清热解毒、消肿止痛和化痰散结等
功效，临床用于呼吸道、泌尿道等感染的治疗，另外
对肝炎、肾炎等有一定疗效［1］。近年来研究表明了
哥王具有显著抗肿瘤活性［2-3］。了哥王主要成分有
黄酮类、香豆素类、蒽醌类、木脂素类等。芦荟大黄
素、大黄素甲醚为蒽醌类成分，有较强的抗肿瘤活
性［4-5］。目前关于了哥王中有效成分的定量分析研
究主要集中于黄酮类、香豆素类、木脂素类、挥发油
和微量元素［6-10］，尚未见对了哥王中蒽醌类成分含
量测定的报道。本文拟建立 HPLC法同时测定了哥
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Vol． 21，No． 18
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王中芦荟大黄素和大黄素甲醚的含量，并比较不同
产地了哥王中 2 种成分的含量差异，为完善了哥王
质量控制提供依据。
1 材料
日立高效液相色谱仪，L-2400 紫外检测器，
D-2000 Elite色谱工作站( 日本 Hitachi公司) 。
芦荟大黄素对照品( 成都曼思特生物科技有限
公司，批号 13030701，纯度 ＞ 98. 0% ) ，大黄素甲醚
对照品 ( 自制，经面积归一化法测定纯度 ＞
98. 0% ) 。甲醇( 色谱纯，德国默克公司) ，乙腈 ( 色
谱纯，百灵威科技有限公司) ，水为纯化水 ( 杭州娃
哈哈集团有限公司) ，磷酸( 色谱纯，天津市科密欧
化学试剂有限公司) ，其余试剂均为分析纯。
了哥王药材是瑞香科植物南岭荛花 Wikstroemia
indica，其根、茎叶和果实均可入药。10 批样品均为
市售品，由沈阳药科大学路金才教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验 Diamonsil C18色
谱柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ; 流动相乙腈 ( A) -
0. 15%磷酸( B) ，梯度洗脱程序( 0 ～ 5 min，40% A;
5 ～17 min，40% ～43% A; 17 ～ 23 min，43% ～ 90% A;
23 ～34 min，90%A; 34 ～ 36 min，90% ～40%A) ;流速
1 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 254 nm，流速 1. 0
mL·min －1，进样量 20 μL。在上述色谱条件下，芦荟
大黄素、大黄素甲醚理论塔板数均不低于 5 000，与
相邻组分峰的分离度均 ＞ 1. 5，色谱峰对称因子均在
0. 95 ～ 1. 05。见图 1。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 取干燥至恒重的芦荟大黄素
约 2 mg、大黄素甲醚约 2 mg，精密称定，分别置 25
mL量瓶中，用 80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
制成质量浓度分别为 88. 0，94. 0 mg·L －1的芦荟大
黄素、大黄素甲醚对照品储备液。
精密吸取芦荟大黄素对照品储备液 9. 0 mL 和
大黄素甲醚对照品储备液 8. 5 mL，置同一 25 mL量
瓶中，用 80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度
分别为 31. 68，31. 96 mg·L －1的芦荟大黄素和大黄
素甲醚混合对照品溶液，4 ℃备用。
2. 2. 2 供试品溶液制备 取了哥王干燥药材细粉
( 过 60 目筛) 约 1 g，精密称定，置 100 mL 具塞锥形
瓶中，精密加入 80%甲醇 50 mL，超声处理( 功率
250 W，频率 33 kHz) 2 次，每次 30 min，过滤，合并提
取液，减压蒸干，残渣用 80%的甲醇溶解并转移至
10 mL 量瓶中，以 80% 甲醇稀释至刻度，摇匀，用
A．对照品; B．供试品; 1. 芦荟大黄素; 2. 大黄素甲醚
图 1 了哥王 HPLC
Fig． 1 Typical chromatograms of Wikstroemia indica
0. 45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2. 3 线性关系考察 量取混合对照品溶液 0. 5，
1. 0，2. 0，4. 0，6. 0，8. 0 mL，分别置 10 mL量瓶中，加
80%甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列混合对照品溶
液。按照 2. 1 项下的色谱条件分析。分别以对照品
溶液质量浓度( mg·L －1 ) 为横坐标( X) ，峰面积( Y)
为纵坐标进行线性回归。芦荟大黄素Y = 4. 151 ×
104X － 3. 254 × 103 ( r = 0. 999 2 ) ; 大黄素甲醚 Y =
3. 520 × 104X － 2. 860 × 103 ( r = 0. 999 3) 。结果表
明，芦荟大黄素和大黄素甲醚分别在 1. 584 ～
25. 34，1. 598 ～ 25. 57 mg·L －1与峰面积呈良好的线
性关系。
2. 4 精密度试验 取混合对照品溶液 ( 芦荟大黄
素 12. 67 mg·L －1，大黄素甲醚 12. 78 mg·L －1 ) ，按
2. 1 项下色谱条件测定，结果芦荟大黄素和大黄素
甲醚峰面积的 ＲSD分别为 0. 9%，1. 0%。表明仪器
精密度良好。
2. 5 重复性试验 取了哥王细粉 ( 广东江门) 约
1 g，精密称定，按 2. 2. 2 项下方法平行制备 6 份，测
定峰面积。结果芦荟大黄素和大黄素甲醚平均质量
分数分别为 158. 9，37. 44 μg·g －1，ＲSD 分别为
1. 6%，1. 2%。表明供试品重复性良好。
2. 6 稳定性试验 取供试品溶液，室温放置，分别
于 0，2，4，8，12，24 h，按 2. 1 项下色谱条件测定，结
果芦荟大黄素和大黄素甲醚峰面积的 ＲSD 分别为
1. 5%，1. 0%，表明供试品溶液室温下 24 h内稳定。
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2. 7 回收率试验 取已知含量的了哥王细粉 9 份
( 广东韶关，芦荟大黄素、大黄素甲醚含量分别为
158. 9，37. 44 μg·g －1 ) 约 0. 5 g，精密称定，分别加入
相当于药材原有含量的 50%，100%和 150%对照品
溶液，按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，按照 2. 1
项下的色谱条件分析，计算回收率，结果见表 1。
表 1 芦荟大黄素、大黄素甲醚的加样回收率测定
Table 1 Ｒecoveries of aloe-emodin and physcion
成分
样品中量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
芦荟大黄素 79. 56 38. 72 117. 8 98. 8 100. 2 1. 8
79. 51 38. 72 117. 5 98. 1
79. 57 38. 72 119. 2 102. 4
79. 73 80. 08 158. 8 98. 7
79. 56 80. 08 158. 5 98. 6
79. 75 80. 08 159. 6 99. 7
79. 37 118. 8 199. 8 101. 4
79. 73 118. 8 200. 4 101. 6
79. 87 118. 8 201. 7 102. 6
大黄素甲醚 18. 75 9. 4 27. 95 97. 9 99. 7 1. 1
18. 74 9. 4 28. 03 98. 8
18. 75 9. 4 28. 21 100. 6
18. 79 18. 8 37. 32 98. 6
18. 75 18. 8 37. 41 99. 3
18. 79 18. 8 37. 64 100. 3
18. 71 28. 2 47. 26 101. 2
18. 79 28. 2 47. 16 100. 6
18. 82 28. 2 47. 14 100. 4
2. 8 样品含量测定 分别取 10 批了哥王细粉约
1. 0 g，精密称定，按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶
液，按 2. 1 项下色谱条件分析，计算芦荟大黄素和大
黄素甲醚的含量，结果见表 2。实验结果显示不同
产地了哥王中大黄素甲醚和芦荟大黄素含量差异较
大，其中广东韶关产地的芦荟大黄素含量最高，大黄
素甲醚含量最低;福建福州产地的大黄素甲醚含量
最高，芦荟大黄素含量最低; 浙江( 批号 120724 ) 了
哥王未检测到芦荟大黄素，贵州安顺产地的了哥王
中未检测到大黄素甲醚。说明不同的生长环境对了
哥王中这 2 种成分的含量有影响。
3 讨论
在甲醇-水、乙腈-水洗脱系统下对色谱条件进
行优化，结果在乙腈-水色谱条件下，峰形较好，待测
物与相邻峰分离度较好。考察了磷酸、冰乙酸、甲酸
等改性剂，磷酸改善峰拖尾效果明显，故确定乙腈
( A) -0. 10%磷酸水( B) 为流动相进行梯度洗脱。
比较回流提取法和超声提取法，结果表明相同
时间内超声提取法和回流提取法含量接近，但超声
表 2 不同产地了哥王中芦荟大黄素及大黄素甲醚的含量测定( n =3)
Table 2 Contents ( C ) of aloe-emodin and physcion in different
regions ( n = 3)
No． 产地
芦荟大黄素 大黄素甲醚
C /μg·g － 1 ＲSD /% C /μg·g － 1 ＲSD /%
1 四川 广元 42. 03 1. 5 63. 87 1. 2
2 广西 梧州 37. 40 1. 4 75. 40 0. 6
3 湖南 永州 54. 65 0. 5 71. 62 1. 3
4 安徽 亳州 76. 09 1. 7 60. 42 0. 8
5 广东 江门 31. 65 1. 3 173. 4 1. 0
6 浙江 120724 － － 109. 1 1. 1
7 浙江 120136 57. 96 1. 3 134. 1 0. 4
8 贵州 安顺 31. 73 0. 8 － －
9 广东 韶关 158. 9 1. 6 37. 44 1. 2
10 福建 福州 17. 86 1. 7 248. 3 1. 4
提取法操作简单，故选用超声提取法。又考察提取
溶剂( 乙醇，甲醇，90%甲醇，80%甲醇，70%甲醇，
60%甲醇，50%甲醇) ; 溶剂倍量( 30，50，80 倍) ; 超
声提取时间( 20，30，40 min) ;提取次数( 1，2，3 次) 。
结果表明，采用 80% 甲醇超声提取 2 次，每次 30
min，2 种化学成分提取效率最高。
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［责任编辑 顾雪竹］
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