全 文 ：毛细管气相色谱内标法同时测定藏木香中
土木香内酯 、异土木香内酯的含量＊
王燕 1 ,张雅惠 1 ,格桑索朗 2 ,孙文基1＊＊
(1.西北大学陕西省生物医药重点实验室 , 西安 710069;2.西藏药品检验所 850000)
摘要 目的:测定藏木香药材中土木香内酯 、异土木香内酯的含量。方法:用 SE-30毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm);
检测器温度为 260 ℃(FID);进样口温度 240 ℃, 程序升温:初始温度 50 ℃, 以 20 ℃· min-1的速率升温至 170 ℃, 保持 28
min,再以 25 ℃· min-1的速率升温至 250 ℃,保持 1 min;以尼泊金丁酯为内标物定量。结果:土木香内酯与异土木香内酯分
离良好 , 在 0.6 ～ 4.2mg· mL-1范围内 ,呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论:本法简便 、灵敏 ,专属性强 , 重复性好 , 可用于
藏木香药材的含量测定 ,控制内在质量。
关键词:气相色谱法;藏木香;土木香内酯;异土木香内酯
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)12-2058-03
GCdeterminationofalantolactoneandisoalantolactoneinZangmuxiang＊
WANGYan1 , ZHANGYa-hui1 , GEsangSuolang2 , SUNWen-ji1＊＊
(1.BiomedicineKeyLaboratoryofNorthwestUniversity, Xian710069, China;2.XizangInstituteforDrugControl, Xizang850000, China)
Abstract Objective:AcapilaryGCmethodwasestablishedforthedeterminationofalantolactoneandisoalanto-
lactoneinZangmuxiang.Method:TheanalyticalcolumnwasSE-30 capilarycolumn(30 m×0.32 mm×0.25
μm)withanFIDdetector.Theinjectortemperaturewas240 ℃.Thedetectortemperaturewassetat260 ℃.The
columntemperaturewasprogrammedfrom50 ℃atarateof20℃· min-1 to170℃(holding28 min), thenraised
to250 ℃at25℃· min-1.Thefinaltemperaturewasmaintainedfor1min.Results:Thelinearrangesofalantolac-
toneandisoalantolactonewere0.6-4.2 mg· mL-1(r=0.9999), whichshowedgoodlinearity.Conclution:The
methedissimple, specificity, accurateandreliable, andcanbeusedforqualitycontrolofZangmuxiang.
Keywords:gaschromatography;Zangmuxiang;alantolactone;isoalantolactone
藏木香为菊科植物 InularacemosaHook.f.的干
燥根 ,中国植物志将其称为总状土木香 [ 1] 。它不同
于土木香 InulaheleniumL.[ 3] ,藏药标准称其为藏
木香[ 2] ,在藏医中使用广泛 。具有健脾和胃 、调气
解郁 、止痛 、安胎作用 ,用于治疗慢性胃炎 、胃肠机能
紊乱 、肋间神经痛 、胸壁挫伤和岔气作痛等症 [ 2] 。
文献 [ 3 ～ 5]报道 ,利用气相色谱法测定异土木
香内酯或土木香内酯的含量 ,也有文献报道用高效
液相色谱法同时测定土木香内酯 、异土木香内酯含
量 [ 6] 。而对气相色谱内标法同时测定土木香内酯 、
异土木香内酯含量的报道较少 。本文建立了以尼泊
金丁酯为内标 ,同时测定藏木香中土木香内酯和异
土木香内酯含量的毛细管气相色谱法 。
1 仪器与试药
HITACHIG-3900气相色谱仪 , Anaster色谱工
作站;SPH-3全自动空气源(北京中惠普分析技
术研究所);SPH-200全自动氢气发生器 (北京中
惠普分析技术研究所);高纯氮:99.999%(西安钢
厂);乙酸乙酯(分析纯);土木香内酯 、异土木香内
酯对照品自制 ,纯度 99.1%(中国药品生物制品检
定所认定);尼泊金丁酯为化学纯;藏木香 10批均
由西藏药品检验所提供 。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
内标溶液:精密称取尼泊金丁酯适量 ,加乙酸乙
酯制成每 1 mL含 6 mg的溶液 ,作为内标溶液。
—2058— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
＊
＊＊
中国药典 2010年版研究项目(国家药典中发 [ 2008] 99号)
通讯作者 Tel:(029)88304569;E-mail:cxbml@nwu.edu.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.12.008
混合对照品溶液:取对照品土木香内酯 、异土木
香内酯 20 mg,精密称定 ,置 10 mL量瓶中 ,精密加
入内标溶液 5 mL,用乙酸乙酯稀释至刻度 ,摇匀 ,即
得 。
供试品溶液:取本品粗粉(过 3号筛)0.8 g,精
密称定 ,置烧瓶中 ,按挥发油测定法 [附录 Ⅹ D] ,加
水 150 mL,玻璃珠数粒 ,连接挥发油测定器连接回
流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器
的刻度部分 ,在挥发油测定器的刻度部分加乙酸乙
酯 2 mL。置电热套中缓缓加热至沸 ,并保持微沸 5
h后 ,关闭电源。放置至室温。开启测定器下端的
活塞 ,将水缓缓放出 ,将乙酸乙酯层转移至 10mL量
瓶中 ,用少量乙酸乙酯洗涤测定器 ,洗液并入量瓶 ,
精密加入内标溶液 5 mL,用乙酸乙酯稀释至刻度 ,
摇匀 ,即得 。
2.2 色谱条件 SE-30弹性石英毛细管柱(30 m
×0.32 mm×0.25 μm);检测器:FID检测器;程序
升温:初始温度 50℃,以 20 ℃· min-1的速率升温
至 170 ℃,保持 28min,再以 25℃· min-1的速率升
温至 250℃,保持 1min;分流进样 ,分流比 1︰ 10;
进样口温度 240 ℃;检测器温度为 260℃。
2.3 系统适用性试验 分别取混合对照品溶液 、供
试品溶液各 1μL注入气相色谱仪 ,记录色谱图。溶
剂峰 、内标峰 、土木香内酯峰与异土木香内酯峰均达
到完全分离 ,理论塔板数按土木香内酯峰计算应不
低于 40000。见图 1。
图 1 藏木香气相色谱图
Fig1 GCchromatogramsofZangmuxiang
A.对照品(referencessubstance) B.样品(sample) C.内标(internalstandard) D.空白(blank)
1.内标(internalstandard) 2.土木香内酯(alantolactone) 3.异土木香内酯(isoalantolactone)
2.4 标准曲线和线性范围 精密称取对照品土木
香内酯 、异土木香内酯适量 ,制成浓度均为 6 mg·
mL-1的混合对照品储备液;分别精密吸取此储备液
0.1, 0.2, 0.3, 0.5 , 0.7 mL置 2 mL量瓶中 ,各精密
加入内标溶液 0.5 mL,加乙酸乙酯定容 ,在 “ 2.2”色
谱条件下 ,进样 2 μL,记录色谱图。分别以对照品
浓度为横坐标 ,对照品与内标峰面积之比为纵坐标 ,
进行线性回归。土木香内酯 、异土木香内酯的线性
回归方程(n=5)分别为:
Y=0.9061X-0.0175 r=0.9999
Y=0.9641X-0.0425 r=0.9999
结果表明:土木香内酯 、异土木香内酯进样浓度在
0.6 ～ 4.2 mg·mL-1范围内呈良好的线性关系 。
2.5 精密度试验 精密量取混合对照品溶液 1
μL,在本文色谱条件下 ,连续进样 6次 ,记录色谱
图 ,测定土木香内酯峰面积与内标峰面积比值的
RSD为 1.9%,异土木香内酯与内标峰面积比值的
RSD为 1.8%。
—2059—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)
2.6 重复性试验 按 “供试品溶液制备 ”项下方法
平行制备 6份供试品溶液 ,在本文色谱条件下 ,进样 1
μL,记录色谱图 。结果样品中土木香内酯 、异土木香
内酯含量之和平均值(n=6)为 4.0%, RSD为 1.9%。
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液 1 μL,分别
于 0 , 2, 6, 8, 12, 24 h在本文色谱条件下进样测定 。
根据样品中土木香内酯 、异土木香内酯与内标的峰
面积比值计算 , RSD分别为 2.3%和 2.0%。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量土木香
内酯 、异土木香内酯的 1号样品 0.4 g共 6份 ,每份
分别加入对照品土木香内酯 、异土木香内酯各 2.1
mg,按 “供试品溶液 ”项下方法制得溶液 ,在本文色
谱条件下 ,进样 1 μL,计算土木香内酯平均回收率
(n=6)为 99.0%, RSD为 2.5%;异土木香内酯平
均回收率(n=6)为 96.6%, RSD为 3.0%。
2.9 样品的测定 取 10批藏木香药材 ,按 “供试品
溶液制备”项下方法操作 ,在本文色谱条件下 ,取供
试品溶液 1 μL进样 ,记录色谱图 ,本品以内标法计
算土木香内酯 、异土木香内酯的含量 。结果见表 1。
表 1 各批次藏木香样品中土木香内酯 、
异土木香内酯含量的测定结果(%, n=2)
Tab1 Resultsofcontentsdeterminationof
alantolactoneandisoalantolactone
indifferentsamplesformBaiding, Lasa
样品编号
(sampleNo.)
土木香内酯
(alantolactone)
异土木香内酯
(isoalantolactone)
1 2.2 1.8
2 1.9 1.6
3 2.2 2.0
4 2.2 1.8
5 2.1 1.8
6 2.1 2.0
7 2.0 1.6
8 2.2 1.8
9 2.1 2.1
10 2.0 1.6
3 讨论
3.1 色谱柱温度的选择 在其他色谱条件固定的
条件下 ,对 9种不同的升温程序 。包括初始温度 、升
温速率及末温进行了选择经试验比较 ,考虑分离度 、
分析时间长短及高沸点杂质的影响 ,选择初始温度
50 ℃,以 20 ℃· min-1升至 170 ℃,保持 28 min,再
以 25℃·min-1升至 250 ℃。作为程序升温色谱条
件较为合适 。
3.2 内标物的选择 为消除手动进样量不准确等
因素造成的系统误差 , 选择内标法进行含量测定 。
并对内标物质进行了筛选 。将尼泊金乙酯和尼泊金
丁酯作了对比 ,它们是原样品中不含有的组分 ,但尼
泊金丁酯距离土木香内酯 、异土木香内酯色谱峰更
接近 ,并且不干扰样品色谱峰 ,因此尼泊金丁酯作为
内标物更适合 。
3.3 样品提取完全试验 按 “供试品溶液 ”项下方
法操作 ,在 1h时将乙酸乙酯层移出并洗涤装置 ,定
容至 5 mL量瓶中;再加入 2 mL乙酸乙酯提取 2 h,
移出乙酸乙酯层并洗涤装置 ,定容至 5 mL量瓶;同
理分别得到 5, 7, 9 h的乙酸乙酯层 ,分别定容至 5
mL量瓶;在本文色谱条件下 ,分别取不同时间提取
的供试品溶液 1 μL进样 , 记录色谱图 。结果 5 h
后 ,随时间延长供试品溶液峰面积明显减少 。
3.4 提取时间的确定 按 “供试品溶液 ”项下方法
操作 ,分别提取 1, 3, 5, 7 , 9h,移出乙酸乙酯层 ,分别
加入内标溶液 5 mL,加乙酸乙酯定容至 10 mL量瓶
中 ,在本文色谱条件下 ,进样 1 μL,记录色谱图 , 结
果 5 h后供试品溶液浓度无明显变化 ,所以将提取
时间定为 5 h。
3.5 小结 经过对本法的精密度 、重复性和回收率
的考察 ,结果证明该法具良好的线性 、精密度和回收
率。此法简便 、灵敏 ,专属性强 ,重复性好 ,可用于藏
木香药材的质量控制。
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(本文于 2009年 2月 24日收到)
—2060— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(12)