全 文 ：书收稿日期:2012-04-10; 修订日期:2012-10-22
基金项目:广西南宁市科学研究与技术开发项目( 200901030C)
作者简介:张平刚( 1974-) ，男( 汉族) ，广西平乐人，现任广西大学农学院
讲师，硕士学位，主要从事药用植物栽培研究工作．
* 通讯作者简介:黄荣韶 ( 1964-) ，男( 汉族) ，广西平南人，现任广西大学
农学院教授，博士学位，主要从事药用植物资源利用与开发的科研教学工
作．
高效液相色谱法测定越南槐不同生长季节及不同部位
的苦参碱和氧化苦参碱的含量
张平刚1，沈 亮1，2，甘凤琼1，黄荣韶1*
(1．广西大学农学院，广西 南宁 530004; 2．中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193)
摘要:目的 通过高效液相色谱( HPLC) 法同时测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量确定适宜采收期。方法 采用
超声波辅助提取，选用 C18色谱柱( 250mm ×4． 6mm × 5μm) ，检测波长 215 nm，以甲醇 －水 －三乙胺( 50∶ 50∶ 0． 02) 为流
动相，流速 1． 0 ml /min，柱温 40℃，测定该药材在不同季节及不同部位苦参碱和氧化苦参碱的含量。结果 7 ～ 10 月花期
前后采收的越南槐根部苦参碱及氧化苦参碱含量均较高，分别为 0． 27%和 1． 95%。此外，茎和叶中苦参碱含量为根的
1 /2 左右，氧化苦参碱含量为根的 1 /5 左右。结论 该方法分离度好、稳定、费用低，可用于山豆根药材的质量控制。该研
究为合理确定山豆根药材的采收期及其他部位的合理利用提供了参考。
关键词:越南槐; 苦参碱; 氧化苦参碱; 高效液相色谱
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 01． 061
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2013) 01-0140-02
山豆根为我国常用中药材，始载于宋《开宝本草》，又名广豆
根、山大豆根、小黄连，为豆科槐属植物越南槐(Sophora tonkinen-
sis Gapnep)的干燥根及根茎［1］。越南槐主产广西，主要分布于靖
西、那坡、德保、龙州、凌云等县［2］。主要含有生物碱、黄酮、皂
苷、萜类及多糖等化学成分［3］，其活性成分苦参碱和氧化苦参碱
具有杀虫抗菌、抗乙肝病毒、保肝、抗肿瘤等功效，可以治疗肝炎、
膀胱癌和恶性葡萄胎等症［4］。由于其独特的药理作用，近年来，
许多企业研发以山豆根为原料的各种新药，导致其资源储量急剧
减少，价格不断攀升［5，6］。目前，山豆根人工栽培技术还不成熟，
该药材的市场供应仍以野生资源为主，大量的毁灭性采挖导致分
布地域、蕴藏量正已惊人的速度下降，因此，加强对其资源保护、
药材的合理采收及其有效活性成分高效利用具有重大的意义。
目前有关越南槐不同生长季节、不同部位生物碱含量的 HPLC法
比较分析尚未见报道，本研究首次建立了 HPLC法同时考察越南
槐不同生长季节、不同部位的生物碱含量的差异，为越南槐的合
理采收及其不同部位的高效利用提供参考。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 KQ － 250DE 型数控超声波清洗器(功率 50 W，频率
59 kHz) ，昆山市超声仪器有限公司出品;1702 －电子自动分析天
平，德国生产;water600E 高效液相色谱仪，Waters600E 不锈钢四
位梯度泵系统，Waters 2707 自动进样器，Waters 2487 高灵敏度双
通道紫外检测器，迪马 C18色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)均
为美国 water公司生产;色谱工作站为 Empower 中文色谱管理系
统。
1． 2 试剂 苦参碱(110805 － 200508)和氧化苦参碱(110780 －
200506)对照品由中国药品生物制品鉴定所提供;提取试剂氯仿、
甲醇为国产分析纯，液相试剂甲醇、三乙胺为国产色谱试剂(天
津市四友生物医学技术有限公司出品) ;水为超纯水。
1． 3 材料 不同部位的越南槐整株样品于 2008 － 08 － 19 采自广
西靖西县。不同季节的越南槐样品于 2009 年 9 月至 2010 年 7
月间采自广西靖西县，所采样品均为生长于野生山林 1、3、5、7、
9、11 月份的成熟药材，实验样品均经广西大学农学院黄荣韶教
授鉴定为山豆根正品药材越南槐。将采回的药材洗净，混合取
样，烘干，粉碎，过 60 目筛，储存备用。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 参考杨文远等［7 ～ 9］液相条件略加修改。流动相
甲醇 － 水 － 三乙胺(50 ∶ 50 ∶ 0． 02) ，流速 1． 0 ml /min，柱温
40℃，进样量 10 μl，检测波长 215 nm。外标法定量分析，测得苦
参碱、氧化苦参碱的保留时间分别为 14． 5 min、5 min 左右，样品
待测峰和其它杂峰分离良好见图 1。
图 1 对照品苦参碱(a)和氧化苦参碱(b)及样品(c)HPLC色谱图
2． 2 对照品溶液的配制 精密称取在五氧化二磷干燥剂中干燥
至恒重的苦参碱和氧化苦参碱对照品各 5． 0 mg，置 5 ml 容量瓶
中，加甲醇溶解后定容至刻度，摇匀即得。
2． 3 样品溶液制备 精密称取 0． 500 g样品，加 30 ml氯仿密塞，
称定重量，浸泡过夜。超声提取 50 min，用氯仿补足重量，摇匀过
滤。精密量取续滤液 10 ml 于小烧杯中挥干，用甲醇多次润洗，
定容至 10 ml的容量瓶中备用。
2． 4 线性关系考察 分别吸取各对照品溶液 2，4，6，8，10，12 μl，
按照“2． 1”项的实验条件进行测定，以色谱峰面积为纵坐标(Y) ，
以苦参碱和氧化苦参碱的质量(μg)为横坐标(X)进行线性回
归，计算回归方程。苦参碱的回归方程为 Y = 133． 31X + 6． 28，Ｒ2
= 0． 999 1，线性范围 2． 08 ～ 12． 48 μg /ml;氧化苦参碱的回归方
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1
书程为 Y = 127． 87X － 26． 67，Ｒ2 = 0． 9995，线性范围 2． 01 ～ 12． 12
μg /ml。
2． 5 精密度实验 精密吸取氧化苦参碱对照品溶液 5 μl，连续进
样 6 次，测定其峰面积，结果 ＲSD 为 1． 06%，说明该方法精密度
良好。
2． 6 稳定性实验 精密吸取越南槐样品溶液 10 μl，每隔 2 h 进
样 1 次，连续进样 6 次，测定氧化苦参碱含量，ＲSD = 1． 12%，表
明越南槐样品溶液在 12 h内稳定性良好。
2． 7 重现性实验 精密称取 0． 500 g 越南槐粉末 5 份，按“2． 3”
中超声提取法制备供试品溶液，按照“2． 1”的方法测定，得到
ＲSD为 1． 37%，说明该方法重现性较好。
2． 8 加样回收率实验 精密称取 0． 500 g越南槐粉末 5 份，分别
精确加入一定量苦参碱和氧化苦参碱对照品，按照“2． 3”中的提
取法制备供试品溶液，按照“2． 1”测定方法测定含量。结果苦参
碱平均回收率为 98． 21%，ＲSD为 2． 25%(n = 5) ，氧化苦参碱平
均回收率为 98． 63%，ＲSD为 1． 76%(n = 5) ，表明该方法准确度
较好。
2． 9 样品测定 精密称取样品 0． 500 g，每个样品 3 个重复，按照
“2． 3”中超声提取法制备供试品溶液，按照“2． 1”项的测定方法
测定含量。
3 结果与讨论［10 ～ 13］
3． 1 不同季节采收的越南槐苦参碱含量比较 不同月份采收的
越南槐的苦参碱含量存在着一定的差异(图 2)。由图可知越南
槐苦参碱含量均在 0． 17% ～ 0． 27%之间，苦参碱在一年中的变
化基本呈现出先降低后升高再降低再升高的趋势。分析得知 1
～ 5 月份的含量由 0． 25%降低至 0． 17%，5 ～ 9 月份的含量又逐
渐升高至 0． 27%，9 ～ 11 月份苦参碱含量出现了短暂的下降，11
月份至次年的 1 月份苦参碱的含量逐渐升高并稳定在 0． 25%左
右，其中 9 月份苦参碱含量最高为 0． 27%，而在 5 月份含量最低
为 0． 17%。
图 2 不同月份的越南槐苦参碱的含量比较
3． 2 不同季节采收的越南槐氧化苦参碱含量比较 不同月份采
收的越南槐的氧化苦参碱含量存在着一定的差异(图 3)。由图
可知越南槐氧化苦参碱含量均在 1． 48% ～ 1． 95%之间，氧化苦
参碱在一年中的含量变化也基本呈现出先降低后升高再降低再
升高的趋势。由图可知 1 ～ 5 月份的氧化苦参碱含量由 1． 90%
逐渐降低至 1． 48%，5 ～ 9 月份氧化苦参碱的含量出现快速增长
达到 1． 95%，9 ～ 11 月份氧化苦参碱的含量降低到 1． 72%，11 月
至次年 1 月含量又逐渐升高至 1． 90%。其中 9 月份氧化苦参碱
含量最高为 1． 95%，而在 5 月份含量最低为 1． 48%。
图 3 不同月份的药材氧化苦参碱的含量比较
3． 3 越南槐不同部位的苦参碱和氧化苦参碱含量比较 越南槐
不同部位的苦参碱和氧化苦参碱含量存在着较大的差异(图 4)。
由图可知根的苦参碱含量为 0． 20%，茎为 0． 09%，叶为 0． 11%，
茎和叶的苦参碱含量相差较小，而二者均明显低于根的的苦参碱
含量，方差分析得知茎和叶之间的苦参碱差异不显著，而二者均
与根部差异显著;根中氧化苦参碱含量为 1． 52%，茎为 0． 28%，
叶为 0． 23%，茎和叶的氧化苦参碱含量相差不大，而二者均明显
低于根的的氧化苦参碱含量，方差分析得知茎和叶的氧化苦参碱
差异不显著，但二者与根的氧化苦参碱均差异显著。
柱状图上的不同字母表示差异显著，P ＜ 0． 05
图 4 越南槐不同部位生物碱含量的比较
本研究发现不同季节、不同部位的两种生物碱含量存在一定
的差异。越南槐在 7 ～ 9 月份苦参碱及氧化苦参碱含量较为相
似，其中 9 月份含量最高分别为 0． 27%、1． 95%，而在 5 月份含量
最低分别为 0． 17%、1． 48%;越南槐根中氧化苦参碱含量为
1． 52%，茎和叶的分别为 0． 28%、0． 23%;根中苦参碱的含量为
0． 20%，茎和叶的分别为0． 09%、0． 11%。因此，山豆根的采收期
应该在夏末秋初。越南槐根部生物碱含量最高，但茎叶也含有较
高的生物碱成分，因此可以考虑将茎叶中的活性成分加以利用。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期