全 文 ：HPLC法测定满山红油中 牛儿酮含量
李百强1 ,方芳 2 ,方洪壮 2 ,崔晓彪 3 ,高旭光 1
(1.黑龙江省药品不良反应监测中心 ,黑龙江 哈尔滨 150076;2.佳木斯大学 ,黑龙江 佳木斯 154007;
3.黑龙江龙桂制药有限公司 ,黑龙江 绥化 152051)
摘　要:目的:建立满山红油中 牛儿酮含量测定的高效液相色谱法 。方法:使用 EclipseXDB-C18
(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱 ,流动相为 65%乙腈水溶液 ,流速为 1.0ml·min-1;检测波长为 210nm。
结果: 牛儿酮在 0.1010 ～ 1.010μg范围内与其色谱峰面积线性关系良好 r=0.9996,平均回收率为
100.1%, RSD为 1.0%。结论:本法简便 、准确 、重复性好 ,可用于满山红油中 牛儿酮含量的测定 。
关键词:满山红油; 牛儿酮;含量测定;HPLC法
中图分类号:R282.71　　　文献标识码:A　　　文章编号:1002-2392(2010)03-0085-02
收稿日期:2010-03-02　　修回日期:2010-03-14
基金项目:黑龙江省中医药重点科研项目(ZHY06-Z43)
作者简介:李百强 ,男 ,副主任药师。 E-mail:libaiqiang1966@163.com.
　　满山红油为中药满山红(杜鹃花科植物兴安杜鹃
RhododendrondauricumL.的干燥叶)经水蒸气提取的
挥发油 ,具有止咳 ,祛痰功效 ,用于治疗急 、慢性气管
炎 [ 1] 。药理和临床研究证实 , 牛儿酮为主要有效成
分 [ 2] 。满山红油定量方法 ,现仅见气相色谱法测定
牛儿酮的报道 [ 3] ,但该方法需硅胶柱分离进行前处
理 ,操作较繁杂 。本文采用 HPLC法测定满山红油中
牛儿酮的含量 ,所建立的方法简单 、准确 ,可为满山
红油的质量控制及相关研究提供新的定量方法 。
1　仪器及材料
高效液相色谱仪(Agilent1100系列):四元泵 ,二
极管阵列紫外检测器 , 色谱工作站;ZorbaxEclipse
XDB-C18柱(250mm×4.6mm, 5μm), ZorbaxSB-C18
柱(12.5mm×4.6mm, 5μm)保护柱;20mL定量环 ,针
筒式 0.45μm微孔滤膜。
满山红油由天赐康制药有限公司提供; 牛儿酮
对照品 , 中国药品生物制 品检定所 (111665 -
20060508);乙腈(色谱纯),其它试剂均为分析纯。
2　实验方法
2.1　对照液与供试液　取经五氧化二磷干燥的 牛
儿酮对照品约 5.0mg,精密称定 ,加甲醇溶解并定容至
100mL,摇匀 ,制成对照液(50.50μg·mL),备用。取满
山红油约 0.1g, 精密称定 , 加甲醇溶解并定容至
100mL,摇匀 ,备用。
2.2　测定方法　精密量取一定体积的对照液或供试
液 ,置 10mL量瓶中 ,用 65%乙腈溶液稀释至刻度 ,经
微孔滤膜过滤 ,满量程进样 ,在室温下以流速 1mL·
min-1的 65%乙腈溶液洗脱 , 记录色谱光谱数据或
210nm的峰面积数据并进行相应计算。
3　结果与讨论
3.1　色谱条件
3.1.1　测定波长的选择　对照液的部分色谱 -光谱
图见图 1。由图 1可知 , 牛儿酮在 210 ～ 215nm呈现
最大吸收 ,且较平稳 ,故选定 210nm为测定波长 。
图 1　 牛儿酮光谱 -色谱图
3.1.2　系统适用性　对照液 、供试液稀释液 ,及空白
液的色谱图如图 2。空白液的色谱图表明 ,实验所用
的试剂对样品含量的测定无干扰。比较对照品与样品
的色谱图可知 ,样品在对照品保留时间 20.50min处有
一色谱峰。由色谱工作站峰纯度检定得知 ,该峰为一
纯峰 ,其光谱与对照品一致 ,故确定该峰为 牛儿酮
峰 。在实验的条件下 , 牛儿酮的理论塔板数为 12
530,拖尾因子为 1,供试品中 牛儿酮与相邻峰分离
度大于 1.5。样品中相邻峰对 牛儿酮峰无干扰 、
牛儿酮达到充分分离;对照液稀释液连续 5次重复进
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2010年第 38卷第 3期
Vol.38, No.3, 2010 　　　　　　　　　
中　　医　　药　　学　　报
ActaChineseMedicineandPharmacology
样的色谱峰面积的 RSD为 0.18%,色谱系统有较理想
的重复性。
图 2　 牛儿酮 、满山红油及空白液色谱图
A. 牛儿酮;B.满山红油;C.空白;s. 牛儿酮
3.2　方法验证
3.2.1　稳定性试验　取供试液 10倍的稀释液 ,分别
于 0、2、4、6、8、10、24h进样 , 按上述测定方法 ,考察样
品中 牛儿酮峰面积的变化 ,得 RSD值为 1.6%,表明
满山红油样品中 牛儿酮在 24h内稳定。
3.2.2　线性考察 　精密吸取对照液 1.0、 2.0、 4.0、
6.0、8.0mL,分别置 10mL容量瓶 ,加 65%乙腈定容 ,
另取未稀释的对照液 ,按实验方法的色谱条件分别进
样测定 。以 牛儿酮质量为(X), 牛儿酮峰面积为
(Y),进行回归计算。结果表明 , 牛儿酮对照品在
0.1010 ～ 1.010μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性
关系;回归方程为 , Y=27.69+2941.52X, r=0.9996
(n=6)。
3.2.3　重复性试验　按实验方法分别制备 6份供试
液 ,精密量取各供试液 1mL,分别置 10ml容量瓶中 ,用
65%乙腈定容 ,按测定方法测得峰面积并计算 牛儿
酮质量 ,得到 牛儿酮的质量 RSD值为 1.2%。
3.2.4　加样回收试验　取已知含量的满山红油 9份
各 0.1g,精密称定 ,制备供试液 ,精密量取 0.5mL分别
置 10mL容量瓶中 ,按已知样品 牛儿酮含量的 80%、
100%、120%, 分别精确加入对照液 1.5、 2.0、 2.5mL
各 3份 ,定容 。测定 牛儿酮峰面积 ,经工作方程计算
牛儿酮质量 ,并分别计算回收率 。得到平均回收率
为 100.1%, RSD为 1.0%。回收率结果见表 1。
表 1　加样回收率试验结果
取样量(g)样品含量(mg)加入量(mg)测得量(mg) 回收率(%)
0.0998
0.1020
0.1027
0.1005
0.1000
0.0998
0.0998
0.1023
0.1015
0.1278
0.1306
0.1315
0.1286
0.1280
0.1277
0.1277
0.1309
0.1299
0.1010
0.1010
0.1010
0.1263
0.1263
0.1263
0.1515
0.1515
0.1515
0.2265
0.2300
0.2358
0.2587
0.2568
0.2550
0.2767
0.2818
0.2794
99.0
99.3
101.4
101.5
101.0
100.4
99.1
99.8
99.3
3.3　样品测定
取不同批次的满山红油各约 0.1g,按供试液制备
方法制备样品溶液 ,分别精密量取 1mL置 10mL容量
瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀。按上述色谱条件测
定 , 6批样品中 牛儿酮的平均含量为 25.74%,测定
结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
批号 含量(%) 批号 含量(%)
06-0903-1 25.83 07-0913-2 26.85
06-0903-2 25.49 07-0914-1 24.38
07-0913-1 26.72 07-0914-2 25.20
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会 .中华人民共和国药典 2005版(一部)[ S] .北
京:化学工业出版社 , 2005:283.
[ 2] 　中国医学科学院药物研究所 .中草药现代化研究 [ M].北京:北
京医科大学与协和医科大学联合出版社 , 1996:327-348.
[ 3] 　李玥瑛 ,仲昭庆 .GC法测定满山红油中 牛儿酮的含量 [ J] .中
国药品标准 , 2007, 8(2):53-56.
DeterminationoftheGermacroneinOleumRhododendridauricibyHPLC
LIBai-qiang1 , FANGFang2 , FANGHong-zhuang2 , CUIXiao-biao3 , GAOXu-guang1
(1.HeiLongjiangAdverseDrugReactionMonitoringcenter, Harbin150076, China;
2.JiamusiUniversity, Jiamusi154007, China;
3.LongguiPharmaceuticalCo, Lid, Suihua152051, China)
Abstract:Objective:ToestablishaHPLC methodfordeterminationofgermacroneintheOleum Rhododendri
daurici.Methods:ThedeterminationwasperformedonEclipseXDB-C18(250mm×4.6mm, 5μm)withmobilephaseof
65% acetonitrile.Thevelocityofflowwas1.0ml/minanddetectionwavelengthat210nm.Results:Excelentlinear
rangeofgermacroneisfrom0.101 0μgto1.010μg.(r=0.999 6).Theaveragerecoverywas100.1% with0.10%
RSD(n=9).Conclusion:Themethodisaccurate, convenientandreproducible, canbeusedforthedeterminationof
germacroneinOleumRhododendridaurici.
Keywords:OleumRhododendridaurici;Germacrone;Determination;HPLC
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Vol.38, No.3, 2010