全 文 ：·药理·
过山枫抑制 T细胞增殖及诱导 T细胞
凋亡活性部位的研究
陈佩虹1，丁宗保2，谢 扬2，佟 丽1*
(南方医科大学 1. 中医药学院;2. 药学院，广东 广州 510515)
摘要 目的:通过体外 T淋巴细胞增殖实验筛选过山枫抗炎作用的活性部位;对确定的活性部位进一步探讨
对 T淋巴细胞凋亡的影响。方法:对过山枫乙醇提取物进行分离提取，采用体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验，检测过
山枫不同提取部位对小鼠脾细胞增殖的影响，从中筛选出对小鼠脾细胞增殖有抑制作用的活性部位。采用流式细
胞技术观察活性部位对小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响。结果:过山枫不同极性部位及从过山枫乙酸乙酯部位(GSF-
A)分离得到 3 个组分对体外培养的 T淋巴细胞增殖均有不同程度的抑制作用;GSF-A 3 个活性部位对 T淋巴细胞
凋亡有显著促进作用。结论:过山枫不同极性部位均具有抗炎活性，且 GSF-A的活性显著;从 GSF-A 部位中分离得
到的 3 个部位均具有抗炎活性;过山枫对 T淋巴细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用一致，提示诱导凋亡是过山枫
抑制 T淋巴细胞增殖的机制之一。
关键词 过山枫;淋巴细胞;增殖;凋亡;活性部位
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2010)08-1237-05
Study on the Activated Fraction with Proliferation and Apoptosis
Effect on T Lymphocyte of Celastrus aculeatus
CHEN Pei-hong1，DING Zong-bao2，XIE Yang2，TONG Li1
(1. School of Chinese Medicine; 2. School of Pharmaceutical Sciences，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China)
Abstract Objective:To screen the activated fraction from Celastrus aculeatus and study its effect on T lymphocyte apoptosis.
Methods:Different polarity fractions were isolated from Celastrus aculeatus extract. Flow Cytometry method was used to detect apoptosis
ratio of the active fractions. Results:Different fractions extract from Celastrus aculeatus and GSF-A could significantly inhibit T lympho-
cyte proliferation and induce T lymphocyte apoptosis. Conclusion:The activated fractions isolated from Celastrus aculeatus have anti-in-
flammatory effect. Its mechanism may be related to the apoptosis effect on T lymphocyte.
Key words Celastrus aculeatus Merr.;Lymphocyte;Proliferation;Apoptosis;Activated fraction
收稿日期:2010-10-20
基金项目:美国国立卫生研究院补充替代医学研究基金(FO5AT002013-03) ;广东省科技厅社会发展计划项目(2006B35604001) ;广州市科
技局项目(2007JI-COO81)
作者简介:陈佩虹(1983-) ，女，在读硕士研究生，主要从事中药抗炎免疫药理研究;Tel:13570954759，E-mail:cph1216@ 163. com。
* 通讯作者:佟丽，Tel:020-61648539，E-mail:zyxy2@ fimmu. com。
过山枫 Celastrus aculeatus Merr. 为卫矛科南蛇
藤属植物，民间用于治疗风湿痹症，具有祛风除湿、
行气活血、消肿解毒等功效，临床上常用于治疗类风
湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)〔1，2〕。本课题组
前期研究表明:过山枫乙醇提取物对小鼠热板及扭
体实验、小鼠急性腹膜炎、小鼠背部气囊滑膜炎、大
鼠足肿胀等动物模型具有显著抗炎镇痛作用〔3〕，对
热杀死结核分支杆菌 H37Ra(Mycobacterium tuber-
culosis H37Ra，Mtb)诱导的大鼠佐剂性关节炎(ad-
juvant-induced arthritis，AA)的关节炎症及病情进展
有显著抑制作用〔4〕，但其抗炎的活性部位及成分并
不清楚。本研究对其乙醇提取物进行进一步的分离
提取，采用体外小鼠脾淋巴细胞增殖实验，检测过山
枫不同提取部位对小鼠脾细胞增殖的影响，从中筛
选出对小鼠脾细胞增殖有抑制作用的活性部位。同
时，采用流式细胞技术观察活性部位对淋巴细胞凋
亡的影响，以阐明其药理作用机制。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级 KM 小鼠，雌雄各半，体质
量(20 ± 2)g，由南方医科大学实验动物中心提供，
动物合格证号:SCXK(粤)2006-0015。
1. 2 药物与试剂 过山枫，由中国科学院华南植
物研究所提供并经植物鉴定专家叶华谷教授鉴定为
卫矛科南蛇藤属植物过山枫 Celastrus aculeatus
Merr. 的根;甲氨蝶呤注射液(MTX) ，Ebewe Pharma
公司产品，批号 H20030444;RPMI-1640 干粉、新生
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.08.028
牛血清，均为 GIBCO 公司产品，批号分别为
1279327、600202;MTT、刀豆蛋白 A(ConcanavalinA，
ConA)、二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide，DMSO) ，均
为 Sigma公司产品，批号分别为 2497B516、C-2010、
20080126;红细胞裂解液，Andybio 公司产品，批号
090618;Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒(内含 An-
nexin V-FITC、Propidium Iodide 即 PI、Binding Buff-
er) ，为南京凯基公司产品，批号 090725;其他所用
化学试剂购自广州化学试剂公司，均为 AR 级;D-
Hanks液，自备。
1. 3 主要仪器 W201 恒温水浴锅、SHB-3 循环水
真空泵、R系列旋转蒸发仪，均为上海申生科技有限
公司产品;TC-15 套式恒温器，浙江新华医疗器械
厂;TDL-40B台式离心机，上海安亭公司;精密天平，
德国 Sartorius公司;XDP-EC倒置显微镜，德国 Leica
公司;GALAXYS 二氧化碳孵箱，英国 GALAXY 公
司;2101 酶联免疫检测仪，美国 Sigma 公司;FACS
Calibur流式细胞仪，美国 BD公司。
2 方法
2. 1 过山枫不同极性部位提取分离〔4，5〕 过山枫
乙醇粗提物经乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚按常规方
法提取分离，制成以下部位:乙酸乙酯(GSF-A)、三
氯甲烷(GSF-B)、石油醚(GSF-C) ，GSF-A、GSF-B、
GSF-C以 DMSO 助溶(使 DMSO 浓度为 4%) ，加入
蒸馏水配制成浓度为 2 mg /mL 的溶液，消毒备用，
进行实验时再配制成所需浓度。
2. 2 GSF-A硅胶柱层析分离及活性检测〔6-8〕 称
取柱层析用硅胶 G、GSF-A，以经活化后的柱层析用
硅胶 G拌样，干法上样。依次以不同配比的三氯甲
烷-甲醇为淋洗相，梯度洗脱。分段收集洗脱液，所
得部分以薄层层析色谱法(TLC)跟踪监测，如为相
同成分则合并，共收得 8 份馏分，减压浓缩得浸膏。
将所得 GSF-A 柱层析分离物 8 份样品，以 MTT法检
测对小鼠脾细胞增殖影响，结果仅其中 3 份柱层析
分离物显示明显的对小鼠脾淋巴细胞增殖抑制的活
性(故其余 5 份柱层析样品的实验结果未展示)。
由于 3 份柱层析分离物分别为 GSF-A 在不同三氯
甲烷-甲醇配比之下按序洗脱所得，将其按序命名为
GSFY-A、GSFY-B、GSFY-C。GSFY-A、GSFY-B、GS-
FY-C以 DMSO助溶(使 DMSO浓度为 4%) ，加入蒸
馏水配制成浓度为 2 mg /mL 的溶液，消毒备用，进
行实验时再配制成所需浓度。
2. 3 MTT法检测体外培养小鼠脾细胞增殖〔9-11〕
小鼠脾细胞悬液制备:无菌摘取小鼠脾脏，置无菌培
养皿内研磨，200 目钢筛网过滤到 50 mL离心管中，
加 D-Hanks液至 40 mL，1 700 r /min 离心 9 min，弃
上清。加无菌水 50 μL 去红细胞，台盼蓝染色进行
细胞计数，计算细胞存活率(应在 95%以上) ，以完
全培养基调整细胞数至 5 × 106 /mL。MTT法测定小
鼠脾细胞增殖:将上述细胞悬液加入 96 孔培养板，
每孔总体积为 200 μL，ConA 终浓度为 10 μg /mL。
以完全培养基作为零空白对照，其余每组设 3 个重
复孔，实验分组为:空白对照组(单纯细胞液) ;ConA
对照组(细胞液 + ConA) ;阳性对照组(细胞液 +
ConA + MTX) ;药物组(细胞液 + ConA +不同浓度
过山枫药液)。加样完毕，将 96 孔培养板放入 5%
CO2、37 ℃培养箱培养 68 h。68 h 后，每孔加入 20
μL MTT，继续培养 4 h 后弃培养上清液，每孔加入
170 μL DMSO，震荡溶解结晶物后在酶联免疫检测
仪上检测光密度 D(λ)值，检测波长为 545 nm。采
用以下公式计算细胞增殖抑制率:
细胞增殖抑制率 =［1 －
D(λ)实验组
D(λ)对照组
］× 100%
2. 4 流式细胞术检测体外培养小鼠脾细胞凋亡实
验 小鼠脾细胞悬液制备:无菌摘取小鼠脾脏，置无
菌培养皿内研磨，200 目钢筛网过滤到 50 mL 离心
管中，加 D-Hanks 液至 40 mL，1 700 r /min 离心 9
min，吸弃上清。加入红细胞裂解液室温放置 4 ～ 5
min，终止反应后用 PBS 洗 1 遍，完全培养基重悬。
台盼蓝染色进行细胞计数，计算细胞存活率(应在
95%以上) ，以完全培养基调整细胞数至 5 × 106 /
mL。流式细胞术测定小鼠脾细胞凋亡率:将上述细
胞悬液加入 6 孔培养板，每孔总体积为 3 mL，ConA
终浓度为 10 μg /mL。实验分组为:空白对照组(单
纯细胞液) ;ConA对照组(细胞液 + ConA) ;阳性对
照组(细胞液 + ConA + MTX) ;药物组(细胞液 +
ConA +不同浓度过山枫药液)。加样完毕，将 6 孔
培养板放入 5% CO2、37 ℃培养箱培养 24 h。24 h
后，2 000 r /min离心 5 min 收集各组细胞于不同离
心管，分别用 PBS洗涤细胞 2 次，收集 1 × 105 细胞;
各管加入 300 μL Binding Buffer悬浮细胞，再加入 5
μL Annexin V-FITC 混匀后，加入 5 μL PI，混匀;室
温、避光、反应 5 ～ 15 min;在 1 h 内，进行流式细胞
仪检测各组细胞凋亡率。
2. 5 统计学处理 数据结果用 珋x ± s表示，用 SPSS
13. 0 统计软件进行 One-Way ANOVA 分析，多重比
较用 LSD 法或 Dunnett s T3 法，P ＜ 0. 05 表示具有
统计学意义。
3 结果
3. 1 过山枫不同极性部位对体外培养小鼠脾细胞
·8321· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
增殖的抑制作用 结果如表 1 所示，在体外小鼠脾
细胞培养中加入 ConA，可显著刺激小鼠脾淋巴细胞
增殖，与空白对照组比较差异显著(P ＜ 0. 05) ;
GSF-A、GSF-B、GSF-C及 MTX对小鼠脾淋巴细胞增
殖有显著抑制作用，各药物组抑制率与 ConA 对照
组比较差异显著(F = 71. 217，P ＜ 0. 001) ;GSF-A2
组对小鼠脾淋巴细胞增殖抑制率为 24. 19%，与
GSF-A1 组、GSF-B1 组、GSF-C1 组比较差异显著(P
＜ 0. 05)。提示过山枫不同极性部位均对小鼠脾淋
巴细胞增殖有抑制作用，GSF-A的作用最显著。
表 1 过山枫不同极性部位对小鼠脾淋巴
细胞增殖的抑制作用(珔x ± s，n =3)
组别 质量浓度
/
(μg /mL) D(λ) 抑制率 /%
空白对照组 － 0. 483 ± 0. 011* # －
ConA组 － 0. 769 ± 0. 044# 0
MTX-1 组 10 0. 554 ± 0. 012* 27. 95 ± 0. 01*
MTX-2 组 20 0. 524 ± 0. 017* # 31. 86 ± 0. 02* #
GSF-A1 组 50 0. 620 ± 0. 007* 19. 38 ± 0. 01* #
GSF-A2 组 100 0. 583 ± 0. 008* 24. 19 ± 0. 01*
GSF-B1 组 50 0. 668 ± 0. 013* # 13. 13 ± 0. 02* #
GSF-B2 组 100 0. 588 ± 0. 013* 23. 54 ± 0. 02*
GSF-C1 组 50 0. 705 ± 0. 004* # 8. 32 ± 0. 01* #
GSF-C2 组 100 0. 597 ± 0. 010* 22. 37 ± 0. 01*
F － 71. 217 71. 217
P － ＜ 0. 001 ＜ 0. 001
注:与 ConA组比较，* P ＜ 0. 05;与 GSF-A2 组比较，#P ＜ 0. 05
3. 2 GSF-A不同柱层析分离物对体外培养小鼠脾
细胞增殖的抑制作用 结果如表 2 所示，在体外小
鼠脾细胞培养中加入 ConA，可显著刺激小鼠脾淋巴
细胞增殖，与空白对照组比较差异显著(P ＜ 0. 05) ;
GSFY-A、GSFY-B、GSFY-C及 MTX 对小鼠脾淋巴细
胞增殖有显著抑制作用，各药物组抑制率与 ConA
对照组比较差异显著(F = 13. 500，P ＜ 0. 001) ;GS-
FY-B2 组对小鼠脾淋巴细 胞 增 殖 抑 制 率 为
42. 87%，与 GSFY-A1 组、GSFY-C1 组比较具有统计
学意义(P ＜ 0. 05)。提示 GSF-A柱层析分离物均有
小鼠脾淋巴细胞增殖抑制作用，GSFY-B 的作用最
显著。
3. 3 GSF-A及其柱层析分离物对体外培养小鼠脾
细胞凋亡的影响 在过山枫对体外培养的小鼠脾淋
巴细胞凋亡影响的实验中，Annexin V-PI 双标记流
式细胞术检测显示，过山枫既可诱导早期凋亡，也可
诱导晚期凋亡，但诱导晚期凋亡更明显。结果见图
1:右上区 PI + Annexin V +，为晚期凋亡细胞;左下区
PI- Annexin V-，为正常细胞;右下区 PI- Annexin V +，
为早期凋亡细胞。结果如表 3 所示，GSF-A 及其柱
层析分离物均能诱导淋巴细胞凋亡，与 ConA 组比
较差异显著(F = 133. 061，P ＜ 0. 001) ，GSFY-B 诱导
淋巴细胞凋亡的作用尤其显著。
表 2 GSF-A柱层析分离物对小鼠脾淋巴
细胞增殖的抑制作用(珔x ± s，n =3)
组别 质量浓度
/
(μg /mL) D(λ) 抑制率 /%
空白对照组 － 0. 483 ± 0. 011* －
ConA组 － 0. 769 ± 0. 044# 0
MTX-1 组 10 0. 554 ± 0. 012* # 27. 95 ± 0. 01* #
MTX-2 组 20 0. 524 ± 0. 017* 31. 86 ± 0. 02*
GSFY-A1 组 50 0. 564 ± 0. 059* # 26. 62 ± 0. 08* #
GSFY-A2 组 100 0. 462 ± 0. 034* 39. 92 ± 0. 04*
GSFY-B1 组 50 0. 482 ± 0. 049* 37. 28 ± 0. 06*
GSFY-B2 组 100 0. 439 ± 0. 003* 42. 87 ± 0. 00*
GSFY-C1 组 50 0. 734 ± 0. 109# 4. 55 ± 0. 14#
GSFY-C2 组 100 0. 522 ± 0. 080* 32. 12 ± 0. 10*
F － 13. 500 13. 500
P － ＜ 0. 001 ＜ 0. 001
注:与 ConA组比较，* P ＜ 0. 05;与 GSFY-B2 组比较，#P ＜ 0. 05
表 3 GSF-A及其柱层析分离物对小鼠脾
淋巴细胞凋亡的影响(珔x ± s，n =3)
组别 质量浓度
/
(μg /mL)
凋亡率
%
空白对照组 － 10. 71 ± 2. 70* #
ConA组 － 23. 05 ± 2. 54#
MTX-1 组 10 64. 53 ± 3. 70* #
MTX-2 组 20 40. 65 ± 2. 41* #
GSFY-1 组 50 30. 46 ± 0. 53* #
GSFY-2 组 100 34. 98 ± 1. 81* #
GSFY-A1 组 50 56. 53 ± 4. 38* #
GSFY-A2 组 100 62. 25 ± 4. 58* #
GSFY-B1 组 50 74. 27 ± 2. 91* #
GSFY-B2 组 100 81. 66 ± 3. 60*
GSFY-C1 组 50 45. 89 ± 4. 52* #
GSFY-C2 组 100 64. 52 ± 2. 94* #
F － 133. 061
P － ＜ 0. 001
注:与 ConA组比较，* P ＜ 0. 05;与 GSFY-B2 组比较，#P ＜ 0. 05
·9321·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
图 1 GSF-A及其柱层析分离物对小鼠脾淋巴细胞的凋亡活性
A. 空白对照组 B. ConA 对照组 C. MTX-1 组 D. MTX-2 组 E. GSFY-1 组 F. GSFY-2 组 G. GSFY-A1 组 H. GSFY-A2
组 I. GSFY-B1 组 J. GSFY-B2 组 K. GSFY-C1 组 L. GSFY-C2 组
4 讨论
国内外对过山枫的药理作用及化学成分研究报
道较少，曾有报道从过山枫分离的化学成分有卫矛
醇和 β-谷甾醇等〔12，13〕。为研究过山枫的抗炎作用
及活性组分，本研究采用极性梯次提取与柱层析分
离方法获得过山枫不同极性部位及某一极性部位的
柱层析分离物多组成分，进行体外抗炎活性筛选及
相关机制研究。
实验结果表明，过山枫不同极性部位对体外培
养的 T淋巴细胞增殖均有不同程度的抑制作用，提
示过山枫不同极性部位均具有抗炎活性，且 GSF-A
的活性显著，这可能是过山枫治疗 RA的物质基础。
从 GSF-A分离得到 3 个组分，对体外培养的 T 淋巴
细胞增殖有显著的抑制作用，表明 GSF-A 的 3 个分
离物均具有抗炎活性，其中对 T 淋巴细胞增殖抑制
作用最强的是 GSFY-B分离部位。
按照 RA中 T淋巴细胞的中心理论，RA患者体
内由于某些未知原因导致自身反应的 T 淋巴细胞
激活，这些 T 淋巴细胞浸润滑膜组织，与抗原递呈
细胞递呈的“关节抗原”相结合，激起一系列在滑膜
组织的免疫炎症反应，并分泌多种细胞因子〔14〕。已
有研究结果显示 RA患者和正常人的淋巴细胞自发
性凋亡的水平无差异，但 RA 患者活化的外周血淋
巴细胞(予 PHA诱导淋巴细胞增殖活化以模拟 RA
患者体内淋巴细胞接受多种抗原刺激活化的情况)
出现凋亡缺陷，并与 RA 病情活动程度相关〔15，16〕。
本实验结果表明，在 ConA 诱导淋巴细胞增殖实验
中，ConA组细胞凋亡率显著高于空白对照组(P ＜
0. 05) ，提示由于细胞大量增殖，虽有一部分细胞还
在代偿性地启动凋亡机制，但细胞增殖仍占优势，处
于凋亡缺陷状态。用这种处于凋亡缺陷状态的细胞
模型，可以研究药物对淋巴细胞凋亡的影响。
RA是一种自身免疫性疾病，有关于 RA细胞凋
亡的研究成为近年来的研究热点。自身免疫病常常
伴有自反应性淋巴细胞和自身抗体的产生，其发病
机制十分复杂，大量实验证明，自身免疫病与细胞凋
亡密切相关〔17〕。在生命活动中细胞凋亡与细胞增
殖是矛盾的统一，两者相互制约、相互协调下保证了
机体细胞数量平衡;在活性筛选实验结果基础上，笔
者对其乙酸乙酯 3 个活性部位进行了对 T淋巴细胞
凋亡的研究，结果表明表现为凋亡率大幅提升，这可
能是过山枫治疗 RA 的作用机制之一。过山枫对 T
淋巴细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用一致，提示
过山枫诱导凋亡是其抑制 T 淋巴细胞增殖的机制
之一。
参 考 文 献
［1］唐庆年，炯华 . 南蛇藤治疗风湿，类风湿性关节炎 500
例探讨［J］. 实用中医药杂志，1998，14(3) :20.
［2］赵金华 . 南蛇藤煎剂治疗慢性风湿性关节炎 240 例
［J］. 右江民族医学院学报，1999，21(2) :326.
［3］杨蒙蒙，佟丽，陈育尧 . 南蛇藤乙醇提取物抗炎镇痛作
用的实验研究［J］. 中医药学刊，2005，23(1) :51-52.
［4］佟丽，Kamal D Moudgil，陈育尧，等 . 南蛇藤提取物对
Lewis大鼠佐剂性关节炎(AA)预防及治疗作用［J］. 中
国免疫学杂志，2008，24(5) :421-423.
［5］王衍龙，黄建梅，张硕峰，等 . 灯心草镇静作用活性部位
的研究［J］. 北京中医药大学学报，2006，29(3) :181-
183.
·0421· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月
［6］ Shim Mi Ja，Kim Ha Won，Kim Byong Kak. 灵芝的生物
活性组分及其抑制人体外周血淋巴细胞繁殖的研究
［J］. 华中农业大学学报，2004，23(1) :89-95.
［7］李代，吕腾飞，张春枝 . 虎杖活性成分的提取与分离
［J］. 大连轻工业学院学报，2005，24(3) :189-191.
［8］黄诗前 . 何首乌醇提物的分离纯化及活性研究［J］. 中
国药房，2009，20(30) :2352-2354.
［9］徐叔云，卞如濂，陈修 . 药理实验方法学［M］. 第 3 版 .
北京:人民卫生出版社，2002:1427-1430.
［10］林宗宁，董胜璋，董书芸，等 . MTT法检测 T淋巴细胞
增殖功能的方法学探讨和应用［J］. 中国卫生检疫杂
志，2000，10(1) :8-10.
［11］王翔岩，齐云，蔡润兰，等 . 肉苁蓉多糖的促淋巴细胞
增殖作用［J］. 中国实验动物学报，2009，17(6) :424-
427.
［12］韩燕艺，江淦达 . 过山枫化学成分初步研究［J］. 中药
通报，1982，(2) :30.
［13］季春 . 南蛇藤抗炎及免疫抑制活性部位的研究［D］.
广州:南方医科大学，2009.
［14］蒋明，DAVID，林孝义，等 . 中华风湿病学［M］. 北京:
华夏出版社，2004:266-267.
［15］张浩，董书魁，李雪丽，等 . 类风湿关节炎患者滑膜组
织和外周血 CD4 + T细胞的凋亡分析［J］. 中国免疫学
杂志，2003，19(12) :872-873.
［16］陶怡，陈瑞林，黄成辉 . 类风湿关节炎患者外周血淋巴
细胞的凋亡及其意义［J］. 现代临床医学生物工程学
杂志，2006，12(6) :464-467.
［17］ Kountouras J，Zavos C，Chatzoponlos D. Apoptosis and
autoimmumitu as proposed pathogenetic links between he-
lieobacter pylori infection and ridiopathic achalasia［J］.
Med Hypotheses，2004，63(4) :624-629.
收稿日期:2011-03-02
基金项目:国家自然基金资助项目(81041056) ;广东省科技计划项目(2010B050700024)
* 通讯作者:卢锡林，Tel:13178828677，E-mail:goodxilin@ com。
枸杞提取物对 MPP +诱导的线虫和 PC12
细胞神经毒性的保护作用
姚晓黎，吴婉玲，郑民缨，李 伟，叶城辉，卢锡林*
(中山大学附属第一医院神经科，广东 广州 510080)
摘要 目的:观察枸杞提取物对 MPP +诱导的线虫和 PC12 细胞神经毒性的保护作用并探讨其作用机制。方
法:以不同浓度枸杞提取物预处理 MPP +诱导的线虫和 PC12 细胞多巴胺能神经损伤模型，计算线虫的存活率和选
择性表达绿色荧光的多巴胺能退行性变神经元的数量，以 MTT法和核形态检测 PC12 细胞的损伤，检测 PC12 细胞
的胞内的氧自由基、线粒体膜电位、总 GSH水平。结果:枸杞提取物明显提高了 MPP +处理过的线虫的存活率和
保护了多巴胺能神经元，对 MPP +诱导的 PC12 细胞的具有明显的保护作用，作用呈量效关系。枸杞提取物通过减
少 MPP +诱导 PC12 细胞胞内 ROS的过量积聚，减少线粒体损伤，恢复 GSH水平而发挥其保护作用。结论:枸杞提
取物主要通过抗氧化及恢复 GSH水平而发挥其对 MPP +诱导的线虫和 PC12细胞神经毒性保护作用。
关键词 枸杞提取物;MPP +;线粒体;线虫;总 GSH;氧自由基
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)08-1241-06
Protective Effects of Lycium barbarum Extract Against MPP + -induced
Neurotoxicity in Caenorhabditis elegans and PC12 Cells
YAO Xiao-li，WU Wan-ling，ZHENG Min-ying，LI Wei，YE Cheng-hui，LU Xi-lin
(Department of Neurology，The First Affiliated Hospital，Sun Yat-Sen University，Guangzhou 510080，China)
Abstract Objective:To investigate the neuroprotective effects of lycium barbarum extract against MPP + -induced neurotoxicity in
Caenorhabditis elegans and PC12 cells and its mechanism. Methods:Pretreated MPP + -induced nearotoxicity in C. elegans and PC 12
cells with Lycium barbarum at differert dosages. The viability and DA neurodegeneration was assessed in C. elegans selectively express-
ing green fluorescent protein (GFP)in DA neurons. PC12 cell damage was measured using MTT and nuclear morphology. Intracellular
reactive oxygen species (ROS) ，mitochondrial membrane potential and total GSH were assessed. Results:Lycium barbarum extract pro-
tected against MPP + -induced loss of viability and DA neurodegeneration in C. elegans in a dose-dependent manner. Similar neuropro-
·1421·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 8 期 2011 年 8 月