全 文 ：162 药物分析杂志 Ci h n J Ph~ n Ad Z以抖
,
24 ( 2)
的磷酸溶液 ( 12 : 20 : 68 ) 。
n
.
3 提取溶剂的选择 曾先后选用了甲醇 、 乙醇、
卯% 的乙醇 、 80 % 的乙醇 、 70 % 的乙醇、印% 的乙醇 、
50 % 的乙醇为提取溶剂 , 对样品进行超声处理 45
m in
,结果以 70 % 的乙醇的提出率为最高 ,取得了较好
的提取分离效果 ,故选用 70 % 的乙醇为提取溶剂 。
n
.
4 提取方法的选择 取 1 号样品 2 9 , 共 4
份 , 每 2 份为 1 组 , 分别用 7 0% 的乙醇超声 、 加热
回流处理 , 结果提出率基本相同 , 因超声 比较方
便 ,且提出液的杂质也比回流处理的少 , 故样品选
用超声处理 。
1 1
.
5 提取时间的选择 在上述色谱条件下 ,取 n
号样品 2 9 ,共 8 份 ,每 2 份为 l 组 ,分别用 70 % 乙醇
超声处理 巧 , 30 , 45 , 60 m in ,结果槐角昔的提出率以
15 m i n 为最低 , 3 0 m i n 次之 , 4 5 m i n 和 6() m i n 的提
出率基本相同 ,故确定超声提取时间为 45 m in 。
参考文献
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11 ( 4 )
: 14 5
(本文于 2X() 3年 5 月 26 日收到 )
R P 一 H P L C 法测定照山白中金丝桃昔的含量
许慧君 袁志芳 张兰桐 * 罗永平 杨 洋
(河北医科大学药学院药物分析教研室 石家庄 05 0 17)
摘要 目的 : 建立照山白药材中金丝桃昔的含量测定方法。 方法 :样品用 90 % 的乙醇回流提取 ,提取液滤过 , 以 RP 一 Hp L C
法测定 ,用 iD ~ ns il MT C
I: 色谱柱 ( 25 0 ~ x 4
.
6
~
,
5 卜m ) , 以甲醇 一 5% 磷酸 一 三乙胺 ( 45 : 55 : 0 . 36 )为流动相 ,流速为 1. 0
mL
· 而 n 一 ’ ,检测波长为 360 nm 。 结果 :金丝桃昔的保留时间约为 15 而 n , 且与其它峰的分离度大于 1 . 5 。 金丝桃昔的线性范
围为 0 . 12 ~ 0 . 28 此 ( r = 0 . 卯卯 ) ,最低检测限为 2 . g gn ,定量限为 0 . 02 9 此 ,平均回收率和 RS D 分别为 9 . 8% 和 0 . 90 % 。 结
论 :该方法简便快速 ,结果准确可靠 , 可为照山白药材的质量评价提供有效手段 。
关健词 反相高效液相色谱法 照山白 金丝桃昔 含量测定
R P 一 H P L C D et e n ul n a U 0 n of H y eP ir n in oF ilu m R h
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一 H PL C,凡在“ m Rho 面去了以八拟介m 瓜h i , h yP ier n , a8 aS y
* 通讯作者 ( e o沈目即 n d吨 au ht or
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2004. 02. 008
药物分析杂志 C h in J Ph ~A n a l Z以又
,
24 ( 2)
照山白为杜 鹃花科植物照 山白 ( 五入。面de dn or m
m ic ar hnt
u m T u r c Z
.
)的枝叶 , 味酸 、 辛 , 性温 ,有毒 ;归
心 、肺 、大肠经 。 具有祛痰止咳 、通络止痛 、降血压等
功效 ,主要用于急慢性气管炎 、 哮喘 、 痢疾 、痛经 、 产
后周身疼痛 ;外用治骨折 、疮肿 。 照山白中主要含有
各种黄酮类成分如金丝桃昔及多种皂昔 、揉质和多
糖类成分 。 文献报道黄酮类成分多为发挥药理作用
的主要活性物质 ,其中金丝桃昔具有很好的治疗急
慢性气管炎 、 哮喘的作用川 。 但迄今为止未有专门
报道高效液相色谱法测定照山白药材中金丝桃昔含
量的文献 。 本文采用 了 IR, 一 H PCL 法对其进行了
含量测定 。 本方法简便 、 快捷 、 准确 、 可靠 , 灵敏度
高 ,可用于照山白中金丝桃昔的含量测定 ,为药材的
质量控制建立了分析方法 。
1 仪器与试药
W a et sr 高效液相色谱仪 ( 美国 ) : 5 10 泵 , 24 87
紫外检测器 ;浙江大学色谱工作站 ; CT Q 一 250 超声
波清洗器 (北京医疗设备二厂 ) 。
试剂 : 甲醇 (色谱纯 ,美国迪马公司 ) ,水为二次
蒸馏水 , 其它试剂均为分析纯 。
金丝桃昔对照品 : 批号 巧21 一 20 2 0 2 ,供含量
测定用 ,购于中国药品生物制品检定所 。 照山白 : 购
于石家庄市乐仁堂 , 经河北医科大学药学院聂凤提
教授鉴定 。
2 色谱条件
色谱柱 :迪马公司 D iam o n s i l T M e l。分析柱 ( 2 5 0
m m x 4
.
6 m m
,
5 林m ) ;流动相 : 甲醇 一 5% 磷酸 一 三
乙胺 ( 4 5 : 5 : 0 . 3 6 ) ;流速 : 1 . 0 m L · 而 n 一 ’ ;检测波
长 : 3 6 0 n m :进样量 2 0 林L ;灵敏度 0 . 5 AU SF 。 在以
上色谱条件下 ,样品中金丝桃昔与其它组分的色谱
峰分离度良好 ,其分离度为 1 . 9 。 见图 1。
图 l 色谱图
F ig 1 H p LC e hor mat
o孚 ar sn
A
. 金丝桃昔对照品 ( r e fe r e n c e 、 b st an ce of h刀姆 ir n )
B
. 照山白 (凡之~ 双肠山山心八形比m川人O
1
. 金丝桃昔 ( h” 神 r i n )
3 溶液制备
3
.
1 供试品溶液 取本品粉末 (过 30 目筛 )约 0 . 2
g
,精密称定 , 置 50 m L 圆底烧瓶中 , 精密加人 90 %
乙醇 2 0 m L ,称定质量 , 回流 l h 。 称定重量 ,补足损
失 90 % 乙醇的量 ,摇匀 , 滤过 。 弃去初滤液 ,精密量
取续滤液 2 m L , 置 10 m L 量瓶中 , 加 90 % 乙醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,用 0 . 45 林m 的微孔滤膜过滤 , 即得 。
3
.
2 对照 品贮备液 精密称定金丝桃昔对照 品
1
· 浮60 m g ,置 5 m L 量瓶中 ,加 90 % 乙醇制成每 1 m L
含 0 . 2 3 2 m g 的溶液 , 即得 。
4 线性范围试验
分别精密量取金丝桃昔对照品贮备液 0 . 25 ,
0
.
3 0
,
0
.
3 5
,
0
.
4 0
,
0
.
4 5
,
0
.
5 0
,
0
.
5 5
,
0
.
6() m L
, 置 10
m L 量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 。 各吸取 20
林L 注人液相色谱仪 , 测定峰面 积 。 以进样量 X
(此 )为横坐标 , 峰面积 ( x lo 一 “ ) Y 为纵坐标 , 绘制
标准曲线 ,经回归处理得回归方程 ( n 二 8) 为 :
Y = 8
.
7 9 l X 一 0
.
0 2 2 5 r = 0
.
9 9 9 9
结果表明金丝桃昔在 0 . 12 一 0 . 28 卜g 范围内线性关
系良好 。
5 稳定性试验
取照山白药材粉末 ( 30 目筛 )约 0 . 2 9 , 精密称
定 ,按 “ 3 . 1 ” 项下同法操作制备供试品溶液 , 分别于
0
,
1
,
2
,
3
,
4
,
5
,
6
,
7
,
s h
, 按上述色谱条件测定峰面
积 。 结果表明 , 供试品溶液于 s h 内 , 色谱峰面积无
明显变化 , SR D 为 0 . 39 % ,说明在 s h 内供试品溶液
中金丝桃昔稳定 。
6 精密度试验
精密量取对照品储备液 0 . 4 mL ,置 10 mL 量瓶
中 ,加流动相稀释至刻度 ,摇匀 。 在上述色谱条件下 ,
连续进样 5 次 , 测定其 峰面积 , 计算其 SR D 为
0
.
2 3%
。
7 重复性试验
取照山白药材粉末 ( 30 目筛 )约 0 . 2 9 ,共 5 份 ,
精密称定 ,按 “ 3 . 1” 项下方法制备供试品溶液 ,按上
述色谱条件测定 ,计算含量 ,其 R SD 为 1 . 1% ,该法
重复性良好 。
8 最低检测限及最低定 t 限
取上述对照 品贮备液 , 逐步稀释 ,进样 , 直至信
噪比 S/ N ) 3 , 此时进样量即为最低检测限 , s/ N 二
10 时即为最低定量限 。 金丝桃普的最低检测限为
2
.
9 n g
,最低定量限为 0 . 029 此。
, 加样回收率试验
取已知含量为 D . 4 9% 的照山白药材粉末 ( 30 目
药物分析杂志 Ci hn J Phr am n A以 2(X抖 , 24 ( 2 )
筛 )约 0 . 1 9 ,共 5 份 ,精密称定 。 分别精密加金丝桃
昔对照品溶液 (精密称取金丝桃昔对照品 3 . 18 m g ,
用 90 % 乙醇定容至 5 m L 量瓶中 ) 0 . s m L , 按 “ 3 . 1 ”
项下方法操作制备溶液 ,按上述色谱条件测定 。 结
果表明平均回收率为 9 . 8% , RSD 为 0 . 0 % , 可见
本方法的准确度高 ,精密度好 ,方法可行 。
10 样品测定
精密称定照山白药材粉末 ( 30 目筛 )约 0 . 2 9 ,
按 “ 3 . 1” 项下制备供试品溶液 , 按上述色谱条件测
定峰面积 , 然后计算其含量 。 3 批样品中金丝桃昔
的含量分别为 0 . 49 % , 0 . 49 % , 0 . 48 % 。
1 1 讨论
1 1
.
1 流动相选择 黄酮昔类成分在 H PL C 测定
时易拖尾 , 流动相中加人酸类可抑制其拖尾 。 曾
使用了低浓度 ( 0 . 05 % , 0 . 1% ) 的磷酸和 0 . 5% 醋
酸 ,峰形对称性不好 ,后用 甲醇 一 0 . 5% 磷酸 ( 45 :
5 5 )得到较好的效果 。 但实验中发现仍有轻微的
拖尾现象 , 且由于含 0 . 5% 磷酸的流动相酸度较大
( p H < 3 )
, 考虑到对色谱柱的影响 , 故用三乙胺调
整 p H 并改善峰形 (三乙胺能与 O D S 柱键合相的
残余硅醇基相互作用 , 削弱测定组分分子的亲硅
醇基效应 ,有助于改善峰形 ) 。 经反复试验发现在
1 L S% 磷酸中加人 3 . 6 m L 三乙胺时分离效果最
佳 ,经多次 , 多批样品的测定 , 系统具有良好的重
复性和稳定性 。
1 1
.
2 检测波长选择 据文献报道 , 金丝桃昔在
2 5 6 ( 2 5 7 )和 3 5 5 ( 3印 ) n m 处均有吸收 { 2 一 4〕。 经紫
外扫描和液相色谱测定表明在 360 lun 处测得供试
溶液干扰较少 ,且分离效果良好 ,故选用此波长 。
n
.
3 提取方法选择 本实验曾试过超声振荡提取
和热乙醇回流法 ,结果证明热乙醇回流法提取效率
高 。 本实验还就不同提取时间 ( 1 , 2 , 3 , 4 h) 和不同
乙醇浓度 ( 50 % , 70 % , so % , 90 % ) 进行了 比较试
验 ,最后选择了提取效率高的 90 % 乙醇回流 l h 作
为供试品溶液的制备方法 。
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(本文于 2 0 3 年 6 月 6 日收到 )
高效液相色谱法测定人血浆中那格列奈的含量
郁 健 , 杜春波 2 杨 劲 ,
( 1
. 中国药科大学分析化学教研室 ; 2 . 中国药科大学制药有限公司 ;3 . 中国药科大学药物代谢动力学研究中心 南京 21 以X冷 )
摘要 目的 :建立高效液相色谱法测定人血浆中那格列奈含量 。 方法 :使用固相 C l。提取柱 ,将那格列奈和双氛芬酸钠 ( 内标 )
从血浆中提取 ,在 OD s s 四 , 4 . 6 ~ x 150 ~ 柱上 , 以流动相 0 . 05 mo l · L 一 ’磷酸二氢钾溶液 一 乙睛 ( 1:6 1 0 ;用 l mol · L 一 ’氢
氧化钠溶液调节 p H 6 . 3) 进行分离 ,流速 l mL · 面 n 一` , Z 10 nm 波长检测 。 结果 :血药浓度线性范围 0 . 05 一 20 此 · m L 一 ’ ( r =
0
. 卯% ) ,血浆中最低检测浓度 0 . 05 此 · .mI 一 ’ ,萃取回收率在 82 . 4% 一 92 . 2% , 相对回收率 98 . 4% 一 9 . 7% , 日内及 日间 sR D
分别为 4 . 3% 一 8 . 2% 和 4 . 0% 一 8 . 6 % 。 结论 :本法简便 、准确 ,精密度高 ,重现性好 ,可应用于那格列奈人体药代动力学研究
和生物等效性研究 。
关链词 那格列奈 高效液相色谱法 血药浓度
H P L C D e et n 刘恤 a t i o n of N a et gn 城d e i n H u团。 a n lP as m a
Y u J ian
l , n u e h u n 一 加 2 an a 狱 N e J i n 3
( 1
. 及铆时帐瓜 of A, 刘浏 ` 陵沉山匀 ; 之记沪 U月肠口阴比川众` 以 , `以 . ; 3 . 及笋时侧瓜 of 尸陇的子。呱肠留心众3 , 。 云` 书月钻用~ ` 必以 助` 译。勿 ,肠呼昭 21 (X 刃)
A b s t r a e t o 讨ec Uve : OT e s ta b l i s h H P LC m e ht o d of ht e d e et mr i n at i o n o f n a te gl i n id e i n h u m a n p las m a . M e t b o d :