全 文 ：工作简报
反相高效液相色谱法测定卫矛科植物韧皮部中
雷公藤红素含量
陈　兰1 , 许舒雯2 , 任凤莲1 , 焦志敏1 , 陈龙胜2＊
(1.中南大学 化学化工学院 , 长沙 410083;　2.安徽省分析测试中心 , 合肥 230031)
摘　要:提出了反相高效液相色谱法测定卫矛科植物韧皮部雷公藤红素的方法。样品用索氏提
取法 ,以氯仿为提取剂于 75 ℃提取 。提取液以 Kromasail C18色谱柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm)为
分离柱 ,以乙腈和 0.005 mol·L-1磷酸溶液以体积比 80比 20混合的溶液为流动相 ,在 425 nm 波
长处进行分光光度测定。雷公藤红素的质量浓度在 0.021 32 ～ 0.106 6 g ·L-1范围内与其峰面积
呈线性关系 。用标准加入法测得平均回收率为 97.2%。方法用于 18种卫矛科植物韧皮部中雷公
藤红素含量的测定 ,腺蕚南蛇藤中雷公藤红素含量最高为 1.41%。
关键词:反相高效液相色谱法;雷公藤红素;卫矛科植物
中图分类号:O652.63　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-4020(2010)05-0488-03
RP-HPLC Determination of Tripterine in Phloem
from Celastraceae Plants
CHEN Lan1 , XU Shu-wen2 , REN Feng-lian1 , JIAO Zhi-min1 , CHEN Long-sheng2＊
(1.College of Chemistry and Chemical Eng ineering , Central South Uni versity , Changsha 410083 , China;
2.Anhui Prov incial Analy tical and Testing Center , He f ei 230031 , China)
Abstract:RP-HPLC w as applied to the de te rmination o f t ripterine in phloem f rom celastraceae plants.The
sample was treated by Soxhlet ex traction w ith chloro form as so lvent at 75 ℃.The ex tract obtained was separa ted on
K romasail C18 co lumn(250 mm×4.6 mm , 5μm)w ith a mix ture of acetonitrile and 0.005 mol· L -1 phospho ric acid
so lution(mixed in the ra tio of 80 to 20) as mobile phase and the content of tripterine wa s determined
spectropho tometrica lly at the waveleng th of 425 nm.Linear relationship between the value s of peak area and mass
concentra tion of t ripterine w as obtained in the range o f 0.021 32-0.106 6 g· L-1 .The value of av erage recovery
found by standard addition method was 97.2%.The propo sed method was used in the analy sis of 18 kinds o f
celastraceae plants , and the highest content(1.41%)o f tripte rine was found in cela st raceae o rbiculatus.
Keywords:RP-H PLC;T ripterine;Celastraceae Plant
　　雷公藤红素(C29H 38O)又名南蛇藤素 ,是一种
存在于卫矛科植物雷公藤 、南蛇藤等植物中的五环
三萜类物质[ 1-2] 。研究表明:雷公藤具有抗氧化 、抗
风湿 、抗老年痴呆症等功效 ,而近年来的药理研究证
收稿日期:2009-03-21
基金项目:2007年合肥市人才发展基金项目
作者简介:陈兰(1981-), 女 ,湖南祁阳人 ,硕士研究生 , 研究
　方向为天然产物化学。
＊联系人
实雷公藤红素还具有抗癌性 。微摩尔级雷公藤红素
是一种潜在的蛋白酶体通路抑制剂 ,可以通过抑制
细胞的增值 、迁移和小管的形成 ,促进凋亡蛋白如哺
乳动物细胞凋亡基因(Bax)等的降解来活化凋亡蛋
白酶(Caspase)信号通路 ,从而诱导 Caspase依赖主
要的细胞凋亡[ 3] 。关于雷公藤红素的报道集中于药
理药效方面 ,在雷公藤红素的测定方面主要集中在
雷公藤药材及相关制剂的质量控制[ 4-5] 和雷公藤红
素在人体中代谢方面[ 6-8] 。
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陈 兰等:反相高效液相色谱法测定卫矛科植物韧皮部中雷公藤红素含量
本工作采用反相高效液相色谱法测定卫矛科植
物韧皮部中雷公藤红素含量。结果表明:该方法结
果准确 ,稳定性高 ,可作为卫茅科植物中雷公藤红素
含量的定量分析方法 。
1　试验部分
1.1　仪器与试剂
KNAUER型高效液相色谱仪 ,配 K-1800型输
液泵 、K-2501 型紫外可见检测器 、Eurochrom for
window s色谱工作站;Angilent 1100系列高效液相
色谱仪 ,配备 HP 化学工作站;Agi lent 6110 型质
谱;XT-4型显微熔点仪;Nicolet 670型傅里叶变换
红外光谱仪;BRUKER 500型核磁共振仪。
雷公藤红素对照品溶液:称取雷公藤红素对照
品 5.33 mg 于 10 mL 容量瓶中 ,用甲醇溶解并定
容 ,得到 0.533 g ·L-1对照品溶液 。
甲醇 、乙腈为色谱纯 ,其他试剂为分析纯 ,水为
二次蒸馏水。
1.2　色谱条件
Kromasil C18 色谱柱(250 nm ×4.6 mm ,
5μm),流动相为乙腈与 0.005 mol ·L-1磷酸溶液
以体积比 80 比 20 混合的溶液 ,流量为 1.0 mL ·
min
-1 ,柱温为 25 ℃,检测波长为 425 nm ,进样量为
50 μL ,峰面积外标法定量。
1.3　试验方法
1.3.1　雷公藤红素对照品的制备
将南蛇藤根皮粉碎后 ,氯仿提取后 ,蒸干 ,加甲
醇溶解 ,过滤。将滤液挥干后 ,用甲醇溶解硅胶拌
样 ,过硅胶柱 ,用甲醇-氯仿(65+35)溶液洗脱 。收
集红色馏分 , 挥干后以甲醇溶解 , 在 C18 色谱柱
(30 mm×300 mm ,5μm)分离 ,收集目标馏分 ,馏分
浓缩干燥 ,用乙醇-水重结晶得到红色晶体 。样品经
核磁共振仪 、质谱仪 、红外光谱仪 、紫外仪检测 ,相关
数据与文献[ 2]报道相符;经 HPLC 面积归一化计
算 ,雷公藤红素的质量分数为 99.24%。
1.3.2　样品溶液的制备与测定
将药材分为木质部和韧皮部 ,取韧皮部粉碎 ,过
250 μm 筛后 ,于 105 ℃干燥至恒重 。称取样品粉末
5.0 g ,置于索氏提取器中 ,加氯仿 50 mL ,于 75 ℃
回流提取至提取液无色 ,提取液转移至茄形瓶 ,分别
用加入氯仿 10 mL 洗涤圆底烧瓶 2次并转移至茄
形瓶 ,减压蒸干 。加入甲醇 20 mL 超声溶解转移至
50 mL 容量瓶中 ,分别用甲醇 10 mL 洗涤 2次茄形
瓶 ,洗涤液并入 50 mL 容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,作为供试品溶液 ,按色谱条件对对照品溶
液和样品溶液进行测定 。
2　结果与讨论
2.1　检测波长的选择
紫外可见扫描表明:雷公藤红素最大吸收波长
为 425 nm ,在此波长下干扰性杂质吸收较低 ,试验
选择 425 nm作为检测波长。
2.2　流动相的选择
试验分别考察了甲醇和乙腈流动相体系 ,结果
表明:甲醇体系中雷公藤红素峰出现前延峰 ,在乙腈
体系中前延峰消失 ,峰形得到明显改善 。试验进一
步考察了不同 pH 值和水含量对分离效果的影响 ,
结果表明:随着乙腈比例增大 ,目标峰保留时间变
短 ,峰宽变窄;在酸性条件下 ,随着 pH 值增大 ,目标
峰拖尾情况加重;当 pH 值小于 3.0时 ,色谱峰拖尾
情况基本消失 。考虑到色谱柱耐酸性 ,试验选择乙
腈-0.005 mol·L -1磷酸(80+20)混合的溶液为流
动相 ,此体系 pH 值为 2.26。
标准品和腺萼南蛇藤样品的色谱图见图 1。
(a)　雷公藤红素标准品
(b)　腺萼南蛇藤样品
图 1　雷公藤红素色谱图
Fig.1　Ch romatogram s of t ripterine
2.3　方法的稳定性和重复性
按色谱条件对对照品溶液和样品溶液进行分
析。每 2 h进样 1次 ,进样量为 50μL ,共测定 5次 ,
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陈 兰等:反相高效液相色谱法测定卫矛科植物韧皮部中雷公藤红素含量
峰面积的相对标准偏差为 0.98%。供试品溶液在
10 h内基本稳定。
取雷公藤红素对照品溶液 ,连续进样 5次 ,进样
量为 50 μL , 测得峰面积的相对标准偏差为
0.18%。 　
2.4　标准曲线
移取 0.533 g ·L-1雷公藤红素对照品溶液 ,配
制成 0.021 32 , 0.042 64 , 0.063 96 , 0.085 28 ,
0.106 6 g · L-1标准溶液 , 按色谱条件分别进样
3次 ,以峰面积平均值为纵坐标(A),对照品进样质
量浓度(g · L-1)为横坐标(ρ), 线性范围为
0.021 32 ～ 0.106 6 g ·L-1 ,线性回归方程为 A =
124 057 ρ-761.2 ,相关系数为 0.999 9。
2.5　回收试验
称取含雷公藤红素质量分数为 0.152%的毛枝
南蛇藤5.0 g ,分别加入雷公藤红素对照品溶液 ,按
试验方法进行样品处理 ,并按色谱分析条件测定样
品中雷公藤红素含量 , 加入雷公藤红素对照品
5 mg ,回收量为 4.86 mg , 平均回收率(n =5)为
97.2%。 　　
2.6　重现性试验
称取毛枝南蛇藤 5.0 g ,按试验方法制备样品溶
液 ,按色谱条件进行测定 ,峰面积的相对标准偏差
(n=4)为 1.52%,样品重现性良好。
2.7　样品分析
前期试验发现 , 18种卫矛科药材中雷公藤红素
主要分布于韧皮中 ,为茎秆中含量的 18 倍以上 ,由
于雷公藤红素含量过低 ,茎秆无法作为制备雷公藤
红素的原料 ,因而选择韧皮为研究对象。按试验方
法对韧皮样品进行处理与测定 ,试验发现:雷公藤属
中昆明山海棠根皮中未检出雷公藤红素;测得雷公
藤中雷公藤红素的质量分数为 0.016%,南蛇藤属
中雷公藤红素的质量分数均高于 0.090%,其中雷
公藤红素含量最高为腺蕚南蛇藤 , 质量分数为
0.141%。因此可将南蛇藤植物根皮作为雷公藤红素
制备的原料。
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