全 文 ：豹皮樟总黄酮对大鼠酒精性
脂肪性肝炎的防治作用及部分机制
王媛媛 1 ,李　俊1 ,曹　琦 1 ,黄　艳 1 ,邹宇宏1 ,程文明 1 ,李　浩 1 ,贺晓昕1 ,胡向阳 2
2007 - 03 - 09接收
基金项目:国家自然科学基金项目(编号:30470775), 安徽省科技攻
关计划项目(编号:06013134B),安徽省高等学校省级自
然科学研究重点项目(编号:2006ki095A)
作者单位:1 安徽医科大学药学院 ,合肥　 230032
2 安徽医科大学第一附属医院病理科 ,合肥　230032
作者简介:王媛媛 ,女 , 26岁 ,硕士研究生;
李　俊 ,男 , 47岁 ,教授 ,博士生导师 , 责任作者 , E-mai l:li-
jun@ ahm u. edu. cn
摘要　目的　探讨豹皮樟总黄酮(TFLC)对大鼠酒精性脂肪
性肝炎的防治作用及部分机制。方法　以酒精联合脂肪乳
剂灌胃 , 每天 2次 ,连续 6周 , 制备大鼠酒精性脂肪性肝炎模
型。给药组同时灌服相应药物。于实验的第 6周末采血 , 检
测血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨基转移酶
(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆
固醇(TC)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)及肝脏 TG、 TC、
SOD、MDA、GSH-PX, 并行肝脏病理学检查 。结果　 TFLC
(200、400 mg /kg)组能明显降低酒精性脂肪性肝炎大鼠血清
AST、ALT、ALP、γ-GT水平;降低血清和肝匀浆中 TC、 TG、
MDA含量 , 增强 SOD和 GSH-PX活性;同时病理组织学显示
TFLC能明显改善酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝细胞脂肪变
性。结论　TFLC对大鼠酒精性脂肪性肝炎具有较好的防治
作用。其作用机制与抗氧化和调节脂质代谢有关。
主题词　肝炎 , 酒精性 /预防和控制;脂肪肝 ,酒精性 /预防和
控制
自由词　豹皮樟总黄酮
中图分类号　R 575. 5;R 282. 71
文献标识码 A 文章编号 1000 -1492(2007)02 - 0179 -04
　　豹皮樟 ,属樟科 、木姜子属 。以其的嫩梢和叶片
为原料制成的饮品 ,是我国江南农村的一种传统饮
料 ,又称老鹰茶。老鹰茶中含有多种活性成分 ,经我
院天然药物化学教研室研究 ,确定了豹皮樟的有效
部位为总黄酮。本实验室前期研究表明 ,豹皮樟总
黄酮( tota l flavonoids of litsea coreana level, TFLC)对
非酒精性脂肪肝具有较好的防治作用 。因此 ,为进
一步探讨 TFLC的药理作用 ,本研究采用酒精联合
脂肪乳剂灌胃复制大鼠酒精性脂肪性肝炎模型 ,观
察 TFLC对酒精性脂肪性肝炎的防治作用 ,为将
TFLC开发为治疗酒精性脂肪性肝炎的药物提供实
验依据。
1　材料与方法
1. 1　实验动物　SD大鼠 60只 , ♂,体重 200 ～ 220
g,由安徽医科大学动物中心提供(普通级 )。
1. 2　主要药物和试剂　TFLC ,为安徽医科大学药
学院提取 ,经我院天然药物化学教研室鉴定 ,总黄酮
含量 >70%。凯西莱 ,临用前均用 0.5%羧甲基纤
维素钠溶液配成相应浓度的悬液 。无水乙醇为国产
分析纯试剂 ,胆固醇购自国药集团化学有限公司 ,脱
氧胆酸钠购自北京奥博星生物技术责任有限公司 ,
丙二醇 、吐温 80(AR级 ),玉米油 、白砂糖 、全脂奶
粉 、动物用复合维生素 (市售),丙氨酸氨基转移酶
(ALT)、天门冬氨基转移酶 (AST)测定试剂盒购自
上海荣盛 , γ-谷氨酰基转移酶 (γ-GT)、碱性磷酸酶
(ALP)测定试剂盒购自长春汇力公司 , 总胆固醇
(TC)、甘油三酯 (TG)测定试剂盒购自北京福瑞生
物工程公司 , 超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛
(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)、考马斯亮
蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所 。
1. 3　大鼠酒精性脂肪性肝炎模型的建立及给药方
法　参照 Liber-Decarli液体食物模型 [ 1] ,以酒精联
合脂肪乳剂灌胃 , b id,连续 6周 。酒精剂量计算采
用下列公式:酒精剂量 (g) =乙醇体积 (m l)×预配
酒精浓度 (%)×0.8(g /m l)。脂肪乳剂组成为玉米
油 35 g,胆固醇 10 g,蔗糖 10 g,胆盐 1 g,奶粉 10
g,复合维生素 0.3 g,矿物质 0.2 g,吐温 -80 3.1 g,
丙二醇 3.64 g,加蒸馏水至 70 m l,制备方法参见文
献[ 2] 。造模前 3天以 30%(V /V)酒精 5 g /(kg d)
适应性灌胃 ,自第 4天起 ,每 3天酒精的浓度增加
5%,剂量增加 0.6 g /(kg d)。至酒精浓度 50%,
剂量 8 g /(kg d)止。脂肪乳剂灌胃量 10 m l /(kg
d)不变 。正常喂养 1周后的大鼠 , 按体重随机分
为 6组 (每组 10只 ):正常组 , 模型组 , TFLC 组
(100、200、400 mg /kg)和凯西莱阳性对照组 (60
mg /kg)。模型组按上述方法造模 。用药组在造酒
179 安徽医科大学学报　Acta Un iversitatis Medicina lis Anhui　2007 Apr;42(2)
精性脂肪肝模型的同时 ,按相应药物给药剂量灌胃
给药。阳性对照药凯西莱剂量为人常用有效剂量经
体表面积折算 。模型组和给药组自由饮用 15%的
糖水。对照组则灌服同剂量生理盐水 ,自由饮水 ,给
予普通饲料 。于第 6周末 ,所有大鼠禁食 12 h,称
重 ,麻醉 ,腹主动脉采血 ,常规制备血清。取肝脏相
同部位 ,常规制备肝匀浆 ,并行病理组织学检查 。
1. 4　观察指标及测定方法　实验期间每周记录体
重 2次 ,观察大鼠一般情况;血清 ALT、AST、ALP、γ-
GT、TG、TC、SOD、MDA、GSH-PX和肝匀浆 TG、TC 、
SOD、MDA、GSH-PX含量的检测按试剂盒要求规范
操作。肝脏组织以 10%的中性福尔马林固定 ,石蜡
包埋切片进行常规 HE染色 ,在光镜下观察肝脂肪
变性和炎症活动情况 。肝脏组织学诊断标准参考中
华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组所
制订的酒精性肝病诊断标准[ 3] 。
1. 5　统计学处理　计量资料以 –x ±s表示 。各组间
实验数据的比较用 t检验 ,多组间比较用方差分析。
2　结果
2. 1　一般情况　模型组的大鼠食欲减退 ,嗜睡 ,少
数有腹泻。正常组大鼠则毛发有光泽 ,体态活泼 ,食
量及大便正常 ,无嗜睡现象 。
2. 2　TFLC对大鼠肝指数 、体重变化的影响　结果
如表 1所示 ,与正常组比较 ,模型组大鼠肝脏指数显
著升高 , 2、4、 6周末体重变化明显降低。 TFLC组
(400 mg /kg)能明显降低大鼠肝脏指数 , 2、4、6周末
体重变化显著升高 。
2. 3　TFLC对大鼠血清 AST、ALT、ALP、γ-GT的
影响　结果如表 2所示 ,与正常组比较 ,模型组大鼠
血清 AST、ALT、ALP、γ-GT均显著增高 。凯西莱组 、
TFLC组 (200、 400 mg /kg)能明显降低大鼠血清
AST、ALT、ALP含量 ,但 TFLC组对 γ-GT含量的降
低无明显影响 。
2. 4　TFLC对大鼠血清和肝脏 TG、TC的影响　
结果如表 3所示 ,与正常组比较 ,模型组大鼠血清和
肝脏 TG、TC水平均显著升高。凯西莱组 、TFLC组
(100、200、400 mg /kg)能显著降低血清 TC含量和
肝脏中 TG、TC含量;凯西莱组 、TFLC组 (200、400
mg /kg)能明显降低血清 TG含量 。
2. 5　TFLC对大鼠血清和肝脏 SOD、MDA、GSH-
PX的影响　结果如表 4所示 ,与正常组比较 ,模型
组大鼠血清和肝脏 MDA含量显著增加 ,而 SOD和
GSH-PX含量显著下降。与模型组相比 ,凯西莱组 、
TFLC组 (200、400 mg /kg)能明显抑制 MDA的增
加 ,并且显著提高 SOD和 GSH-PX的活性 。
2. 6　肝脏病理学变化　模型组大鼠出现典型脂肪
肝病变:肝细胞索排列紊乱 ,肝细胞肿胀 ,细胞内充
满大小不一的脂滴 ,小叶内出现碎片状坏死及散在
的点状或灶型坏死 ,汇管区有炎细胞浸润 ,但未见肝
纤维化。各给药组可明显减轻肝脏脂肪变性和炎
症。见图 1。
表 1　TFLC对大鼠肝指数 、体重变化的影响(n=8, –x ±s)
组别 剂量(m g /kg) 肝指数(%) 2周末体重变化(g) 4周末体重变化(g) 6周末体重变化(g)
正常 - 2. 84±0. 05　　 91. 87±15. 04　　 128. 13±27. 48　　 154. 88±10. 61　　
模型 - 4. 08±0. 06△△ 65. 25±14. 64△△ 92. 36±25. 75△△ 118. 63±13. 15△
TFLC 100 3. 79±0. 11** 61. 13±21. 36 98. 25±17. 74 125. 25±12. 33
200 3. 11±0. 05** 85. 25±20. 15* 112. 50±17. 40 144. 75±18. 27
400 2. 98±0. 05** 89. 44±23. 24** 127. 22±26. 71** 163. 87±10. 44*
凯西莱 60 3. 23±0. 10** 74. 44±19. 74 109. 55±22. 86 138. 87±15. 32
　　与正常组比较:△P<0.05, △△P<0.01;与模型组比较:*P <0. 05, **P<0. 01
表 2　TFLC对大鼠血清 AST、ALT、ALP、γ-GT的影响(n=8, –x±s)
组别 剂量(m g /kg) AST(U /L) ALT(U /L) ALP(U /L) γ-GT(U /L)
正常 - 102. 54±5. 05　　 25. 28±1. 85　　 116. 32±1. 39　　 9. 71±0. 99　　
模型 - 193. 99±13. 51△△ 50. 28±4. 27△△ 148. 20±0. 96△△ 13. 49±1. 54△
TFLC 100 174. 83±13. 94 42. 50±5. 78 140. 03±0. 97** 11. 92±1. 40
200 147. 33±6. 40** 36. 53±6. 01* 134. 08±1. 33** 11. 61±0. 64
400 110. 87±5. 11** 28. 75±2. 22** 122. 47±2. 71** 10. 26±1. 03
凯西莱 60 132. 54±9. 44** 31. 39±3. 36** 128. 09±3. 38** 10. 10±1. 52*
　　与正常组比较:△P<0.05, △△P<0.01;与模型组比较:*P <0. 05, **P<0. 01
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表 3　TFLC对大鼠血清和肝脏 TG、TC的影响(n=8, –x±s)
组别 剂量(m g /kg) 血清
TG(103 U /L) TC (μm o l /L)
肝脏
TG (mg /L) TC (m g /L)
正常 - 0. 87±0. 13　　 1. 14±0. 10　　 889. 5±8. 58　　 490. 8±4. 07　　
模型 - 2. 08±0. 18△△ 2. 32±0. 08△△ 1968. 4±10. 28△△ 968. 5±3. 64△△
TFLC 100 1. 87±0. 19 1. 98±0. 10* 1723. 7±5. 75* 820. 7±6. 11*
200 1. 33±0. 15** 1. 56±0. 16** 1328. 9±10. 41** 649. 2±5. 77**
400 1. 04±0. 07** 1. 42±0. 10** 1013. 1±4. 06** 566. 2±3. 15**
凯西莱 60 1. 09±0. 12** 1. 56±0. 11** 1097. 4±6. 80** 668. 8±2. 70**
　　与正常组比较:△P<0.05, △△P<0.01;与模型组比较:*P <0. 05, **P<0. 01
表 4　TFLC对大鼠血清和肝脏 SOD、MDA、GSH-PX的影响(n=8, –x±s)
组别 剂量(mg /kg)
血清
SOD
(103 U /L)
MDA
(μm ol /L)
GSH-PX
(酶活力单位)
肝脏
SOD
(10 - 3 U /g prot)
MDA
(μm ol /g prot)
GSH-PX
(活力单位)
正常 - 64. 47±0. 82　　 136. 96±3. 73　　 103. 88±7. 03　　 31. 91±2. 80　　 44. 40±7. 03　　 5. 96±0. 61　　
模型 - 56. 17±0. 85△△ 189. 25±5. 72△△ 66. 00±5. 53△△ 14. 14±0. 82△△ 97. 62±9. 30△△ 2. 50±0. 77△△
TFLC 100 59. 10±0. 61 171. 57±5. 50 84. 00±7. 98 19. 89±0. 75 83. 93±8. 99 3. 60±0. 81
200 62. 75±0. 95** 149. 44±8. 07** 96. 00±8. 39* 24. 12±1. 09** 64. 29±7. 26** 4. 13±0. 22*
400 64. 36±0. 97** 138. 48±6. 58** 100. 13±13. 65** 28. 22±2. 69** 48. 81±7. 35** 5. 38±2. 03**
凯西莱 60 61. 80±1. 85** 166. 52±8. 71* 92. 63±5. 79* 26. 09±2. 99** 55. 36±8. 48** 4. 61±0. 65**
　　与正常组比较:△P<0.05, △△P<0.01;与模型组比较:*P <0. 05, **P<0. 01
图 1　TFLC对大鼠肝脏组织病理学的影响　HE×100
A:正常组;B:模型组;C:TFLC 400 m g /kg组;D:凯西莱组
3　讨论
本实验采用酒精联合脂肪乳剂灌胃的方法诱导
大鼠酒精性脂肪性肝炎模型 ,结果发现 6周后模型
组大鼠肝指数显著增高 , 血清 ALT、AST、ALP、γ-
GT、TG、TC、MDA及肝脏 TG、TC、MDA含量明显增
高 。而 SOD和 GSH-px含量显著下降 。病理组织学
检查提示 ,肝脏出现典型脂肪肝病变且伴有炎症 、坏
死 。结果表明 ,本实验成功制备了大鼠酒精性脂肪
性肝炎模型 。
目前国内关于老鹰茶的实验研究资料较少 ,其
药理作用仅见抗氧化作用研究 ,我们前期研究表明
TFLC具有显著的抗炎免疫作用 [ 4] 。本实验研究发
现 ,与模型组比较 TFLC组 (200、400 mg /kg)能显著
降低酒精性脂肪性肝炎大鼠血清 AST、ALT水平以
及 ALP、γ-GT的含量;肝脏组织病理学检查发现 ,
TFLC组 (200、400 mg /kg)比模型组脂肪变性和炎
症程度明显减轻 ,肝指数明显下降 ,均提示 TFLC对
大鼠酒精性脂肪性肝炎具有明显的防治作用 。
酒精性脂肪性肝炎的高甘油三酯血症来源于乙
醇及其氧化产物与肝内脂质代谢的相互作用 。临床
检验发现酒精性脂肪肝线粒体损伤可以加强体内脂
肪酸积聚 ,促进 TG形成 ,使 TG在体内合成增多 ,促
进肝脂肪化的形成 [ 5] 。本实验结果表明 ,模型组大
鼠血清和肝脏中 TG、TC含量显著增高 , TFLC(200、
400 mg /kg)可显著降低大鼠血清和肝脏 TG 、TC的
含量 。提示 , TFLC防治大鼠酒精性脂肪性肝炎形成
的机制可能与其调节脂质代谢作用有关 。
D i Luzio et al
[ 6]最早提出 ,由高活性自由基引起
的脂质过氧化反应是酒精性脂肪性肝炎发病机制中
最重要的环节 ,并已被其他学者所证实 [ 7 - 8] 。抗氧
化治疗则能有效防治酒精性肝损伤 [ 9 - 10] 。另有实
验证实 ,脂质过氧化反应干扰了肝内脂质代谢 ,而脂
质沉积的增多又加重了过氧化反应 [ 11] 。本实验结
果显示 ,模型组血清和肝脏中的 SOD和 GSH-PX的
181 安徽医科大学学报　Acta Un iversitatis Medicina lis Anhui　2007 Apr;42(2)
含量与正常组相比明显下降 ,脂质过氧化反应的终
产物 MDA含量显著增加。表明在酒精代谢过程
中 ,体内产生许多氧应激产物(ROS),使得氧化与抗
氧化失衡 ,有害自由基产生增多 ,并与细胞内多不饱
和脂肪酸作用从而启动细胞内脂质过氧化反应 [ 12] 。
而 TFLC能显著降低大鼠血清和肝组织 MDA含量 ,
增强 SOD活性 ,增加肝脏 GSH含量。提示 , TFLC
防治大鼠酒精性脂肪性肝炎形成的机制可能与其抗
氧化作用有关。
以上结果提示 , TFLC对大鼠酒精性脂肪性肝炎
具有防治作用。其作用机制可能是与其调节脂质代
谢和抗氧化有关 。
参考文献
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The protective and therapeutic effects of total flavonoids of litsea
coreana level on alcoholic steatohepatitis and itsm echan ism s
W ang Yuanyuan, Li Jun, Cao Q i, et al
(S chool of pharmacy, AnhuiMedica lUniversity, Hefei　230032)
Abstract　Objective　To exp lo re the protective and therapeutic effects o f tota l flavono ids o f litsea coreana leve l
(TFLC)on alcoho lic steatohepatitis and itsmechanism s.Methods　The ra ts of themodel g roup w e re fed w ith etha-
nol and fat emulsion tw ice a day fo r 6 w eeks. A t the same time, the rats of TFLC group and tiopron in group we re ad-
m inistrated w ith re lative dose o f medic ine. By the end o f the 6th w eek, all rats w ere sacrificed. The se rum ALT,
AST, ALP, γ-GT, TG , TC , SOD , MDA , GSH-PX and hepa tic TG , TC , SOD, MDA , GSH-PX were measured respec-
tive ly. Hepatic h istopatho logy w as observed by m icroscope. Results　Serum leve ls o f ALT、AST、ALP、γ-GT de-
creased significantly in adm inistration of TFLC(200、400 mg /kg), both serum and hepa tic leve ls o f TG、TC、MDA
markedly reduced , meanwh ile the activity o f SOD andGSH-PX were enhanced. The h istopa tho log ical ana ly sis sug-
gested tha tTFLC could significantly ameliora te fatty degeneration o f hepa tocy tes. Conc lusion　TFLC has positively
pro tective and therapeutic effects on alcoho lic steatohepa titis. The pharmacologicalmechanisms are rela ted w ith anti-
ox idation and adap ting b lood lipid componen.t
MeSH　hepa titis, a lcoholic / prevention＆ con tro l;fatty live r, alcoho lic / preven tion＆ contro l
Free word　 tota l flavonoids of litsea coreana level
182 安徽医科大学学报　Acta Un iversitatis Medicina lis Anhui　2007 Apr;42(2)