全 文 ：HPLC法同时测定不同产地满山红中 4种黄酮成分的含量＊
梁泰刚 ,孟旭鹏 ,赵承孝 ,班树荣 ,李青山＊＊
(山西医科大学药学院 ,太原 030001)
摘要　目的:建立同时测定满山红药材中金丝桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素含量的高效液相色谱方法。方法:采用 Agilent
ZorbaxSBC18色谱柱(4.6 mm×150 mm, 5μm);流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸水溶液(B), 梯度洗脱(0 ～ 20 min, 35% A※
60% A;20 ～ 40 min, 60% A※ 70%A),流速 0.8mL· min-1;检测波长为 360 nm(0 ～ 29min, 测定金丝桃苷 、槲皮素和山柰酚)
和 299 nm(29 ～ 40 min, 测定杜鹃素);柱温 25 ℃。结果:金丝桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素线性范围分别为 6.40 ～ 160.0 μg
· mL-1(r=0.9995), 3.33 ～ 83.33 μg· mL-1(r=0.9993), 0.80 ～ 20.0 μg· mL-1(r=0.9998), 2.67 ～ 66.67 μg· mL-1(r=
0.9996);金丝桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素回收率(n=3)分别为 96.5% ～ 99.2%(RSD为 1.2% ～ 1.6%), 96.6% ～ 98.9%
(RSD为 0.9% ～ 2.8%), 96.4% ～ 101.7%(RSD为 2.0% ～ 2.9%), 95.9% ～ 100.4%(RSD为 0.4% ～ 2.2%)。结论:该方法
简便快速 ,结果准确可靠 , 可用于中药满山红的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;满山红;金丝桃苷;槲皮素;山柰酚;杜鹃素
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)02-0279-03
HPLCsimultaneousdeterminationoffourflavonoids
inRhododendrondauricumL.＊
LIANGTai-gang, MENXu-peng, ZHAOCheng-xiao, BANShu-rong, LIQing-shan＊＊
(SchoolofPharmaceuticalScience, ShanxiMedicalUniversity, Taiyuan030001, China)
Abstract　Objective:ToestablishanHPLCmethodforsimultaneousdeterminationofhyperoside, quercetin,
kaempferolandfarrerolinRhododendrondauricum.Methods:TheseparationwasperformedonanAgilentZorbax
SBC18column(4.6 mm×150 mm, 5 μm)bygradientelution(0-20 min, 35% A※60% A;20-40 min, 60% A
※70% A)usingmethanol(A)and0.2% phosphoricacid(B)asthemobilephase.Theflowratewas0.8 mL·
min-1;Thedetectionwavelengthwas360nm(0-29min)forhyperoside, quercetin, kaempferol, and299nm(29-
40 min)forfarrerolwithcolumntemperatureat25 ℃.Results:Thelinearrangesofhyperoside, quercetin,
kaempferolandfarrerolwas6.40-160.0μg· mL-1(r=0.9995), 3.33-83.33μg· mL-1(r=0.9993), 0.80
-20.0μg·mL-1(r=0.9998), and2.67-66.67 μg· mL-1(r=0.9996), respectively;Theaveragerecoveries
(n=3)was96.5%-99.2% withRSDof1.2%-1.6%, 96.6%-98.9% withRSDof0.9%-2.8%, 96.4%
-101.7% withRSDof2.0%-2.9%, 95.9%-100.4% withRSDof0.4%-2.2% respectively.Conclusion:
Themethodissimple, accurateandcanbeusedforqualitycontrolofRhododendrondauricum.
Keywords:HPLC;RhododendrondauricumL.;hyperoside;quercetin;kaempferol;farerol
　　满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃 Rhododendron
dauricumL.的干燥叶 [ 1] ,具有止咳 、祛痰之功效 ,用
于治疗急 、慢性支气管炎 ,哮喘等病症 ,其化学成分
主要有黄酮 、萜类和挥发油等 [ 2] 。本课题组前期药
理学研究表明 [ 3] ,满山红总黄酮具有明显的抗炎 、
止咳 、祛痰等作用 ,属于活性有效部位 ,因而有必要
对黄酮类化合物进行质量控制 。目前国内对满山红
的质量研究主要集中在对杜鹃素进行含量测
定 [ 4, 5] ,尚未见到对多种黄酮化合物如金丝桃苷 、槲
皮素 、山柰酚和杜鹃素同时测定的相关报道 。本文
采用高效液相色谱法对不同产地满山红中金丝桃
苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素进行了含量测定 ,为全
—279—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(2)
＊
＊＊
山西省科技攻关项目(NO.2006031201-01);山西医科大学校青年基金资助项目(NO.2006011)
通讯作者　Tel:(0351)4690322;E-mail:qingshanl@yahoo.com
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.02.017
面控制其质量奠定基础 。
1　仪器和试药
LC-10ATvp液相色谱仪 , SPD-10Avp检测器
(日本 SHIMADZU公司);UV-260紫外可见分光光
度计(日本 SHIMADZU公司);N2000色谱工作站
(浙江大学智达信息工程有限公司)。金丝桃苷对
照品(批号 1521 -200202)、槲皮素对照品(批号
10081 -9905)、杜鹃素对照品 (批号 110850 -
200604)均购自中国药品生物制品检定所 , 山柰酚
(纯度大于 99%)对照品购自 Sigma公司;甲醇为色
谱纯;水为重蒸水;其余试剂均为分析纯;满山红药
材采自黑龙江 、吉林 、辽宁等地 ,经山西医科大学药
学院高建平教授鉴定为杜鹃花科植物兴安杜鹃
RhododendrondauricumL.的干燥叶 。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　混合对照品储备液　精密称取对照品金丝
桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素适量 ,加甲醇配制成
浓度分别为 320, 68, 40, 133 μg· mL-1的混合溶液 ,
即得 。
2.1.2　供试品溶液　精密称取干燥至恒重的满山
红粉末(60目)约 1 g,于具塞锥形瓶中 ,精密加入甲
醇 25 mL,称重 ,冷浸 1 h后 ,超声(150 W, 40 kHz)
提取 40min,放冷 ,补足失重 ,摇匀 , 0.45 μm微孔滤
膜滤过 ,取续滤液 ,即得 。
2.2　色谱条件　色谱柱:AgilentZorbaxSBC18色谱
柱(4.6mm×150 mm, 5 μm);流动相:甲醇(A)-
0.2%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0 ～ 20 min, 35%
A※60% A;20 ～ 40 min, 60% A※70% A), ,流速
0.8 mL·min-1;检测波长:360nm(0 ～ 29 min,测定
金丝桃苷 、槲皮素和山柰酚)和 299 nm(29 ～ 40
min,测定杜鹃素);柱温:25 ℃;进样量:20 μL。对
照品及样品色谱图见图 1。
2.3　线性关系考察　精密量取混合对照品储备液
0.2, 0.4, 1, 2, 3, 4, 5mL,分别置 10 mL量瓶中 ,加甲
醇 -水(80∶20)定容 ,摇匀 ,配制成系列浓度混合对
照品溶液 。按上述色谱条件 ,分别进样 20 μL,记录
色谱峰面积 ,以峰面积(Y)为纵坐标 ,浓度 X(μg·
mL-1)为横坐标 ,进行线性回归 ,得金丝桃苷 、槲皮
素 、山柰酚和杜鹃素的标准曲线回归方程分别为:
Y=4.79×103X-2.25×103　r=0.9995
Y=1.02×103X-1.76×103　r=0.9993
Y=9.96×102X+1.68×102　r=0.9998
Y=1.55×103X-2.27×103　r=0.9996
图 1　对照品(A)及黑龙江齐齐哈尔产样品(B)色谱图
Fig1　Chromatogramsofchemicalreferencesubstances(A)andsam-
plefromQiqihaer, Heilongjiang(B)
1.金丝桃苷 (hyperoside)　 2.槲皮素 (quercetin)　 3.山柰酚
(kaempferol)　 4.杜鹃素(farrerol)
金丝桃苷在 6.4 ～ 160.0 μg· mL-1 ,槲皮素在 3.33
～ 83.33 μg· mL-1 , 山柰酚在 0.80 ～ 20.0 μg·
mL-1 ,杜鹃素在 2.67 ～ 66.67μg·mL-1范围内线性
关系良好。
2.4　精密度试验　取混合对照品溶液 ,按上述色谱
条件 ,连续进样 6次 ,记录色谱峰面积 ,计算金丝桃
苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素峰面积的 RSD分别为
1.1%, 0.8%, 1.6%, 1.2%。
2.5　重复性试验 　精密称取同一批黑龙江齐齐哈
尔产满山红样品粉末 6份 ,各约 1.0g,照 “2.1.2”项
下方法制备供试品溶液 ,测定金丝桃苷 、槲皮素 、山
柰酚和杜鹃素的含量 ,计算各组分含量平均值分别
为 0.220%, 0.051%, 0.030%, 0.096%;RSD分别
为 1.7%, 2.3%, 1.8%, 2.6%。
2.6　稳定性试验 　取供试品溶液 ,分别于配制后
0, 2, 4, 8 , 12, 24, 48 h进样 20μL,记录峰面积 ,结果
金丝桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素峰面积的 RSD
分别为 1.6%, 1.1%, 1.8%, 2.3%,表明供试品溶
液在 48 h内稳定。
2.7　加样回收率试验　精密称取已测知含量的黑
龙江齐齐哈尔产满山红样品粉末 9份 ,每份约 0.5
g,分别精密加入金丝桃苷对照品储备液 3 mL、槲皮
素对照品储备液 4 mL、山柰酚和杜鹃素对照品储备
液 5 mL,按 “ 2.1.2”项下方法操作 ,制备所需溶液 ,
进样测定并计算加样回收率 ,结果见表 1。
—280— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(2)
表 1　回收率测定结果(n=3)
Tab1　RecoveryofHPLCassay
组分
(component)
加入量
(addedamount)
/mg
平均回收率
(averagerecovery)
/%
RSD
/%
金丝桃苷(hyperoside) 0.960 96.5 1.2
1.28 99.2 1.4
1.60 97.2 1.6
槲皮素(quercetin) 0.204 98.6 2.6
0.272 96.9 0.9
0.340 98.9 2.8
山柰酚(kaempferol) 0.120 101.7 2.6
0.160 96.4 2.0
0.200 98.1 2.9
杜鹃素(farerol) 0.399 100.4 2.2
0.532 95.9 0.4
0.665 96.5 1.6
2.8　样品含量测定 　取不同产地满山红样品 ,按
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取对照
品混合液(金丝桃苷 、槲皮素 、山柰酚和杜鹃素浓度
分别为 64.0, 13.6, 8.00, 26.7 μg·mL-1)和供试品
溶液各 20 μL,注入液相色谱仪 ,照上述色谱条件分
析测定 ,外标法计算满山红中各组分的含量 ,结果见
表 2。
表 2　样品含量测定结果(%, n=3)
Tab2　Resultsofdeterminationofsamples
样品
(sample)
金丝桃苷
(hyperoside)
槲皮素
(quercetin)
山柰酚
(kaempferol)
杜鹃素
(farerol)
黑龙江齐齐哈尔(Qiqihaer,
Heilongjiang)
0.220 0.051 0.030 0.096
黑龙江佳木斯(Jiamusi,
Heilongjiang)
0.267 0.068 0.034 0.108
黑龙江哈尔滨(Haerbin,
Heilongjiang)
0.204 0.040 0.028 0.089
辽宁沈阳(Shenyang, Liaoning) 0.213 0.064 0.022 0.076
辽宁抚顺(Fushun, Liaoning) 0.284 0.073 0.036 0.117
吉林长春(Changchun, Jilin) 0.191 0.049 0.020 0.083
吉林松原(Songyuan, Jilin) 0.236 0.072 0.029 0.114
吉林四平(Siping, Jilin) 0.215 0.063 0.039 0.091
3　讨论
3.1　供试品溶液制备方法的确定　本实验考察了
不同浓度甲醇 、乙醇等溶剂的提取效率 ,同时比较了
不同的提取方法(超声 、回流),并对提取时间及提
取溶剂的量进行了优化 ,结果发现采用 25 mL甲醇
超声提取 40 min效果最好 。
3.3　检测波长的选择　由于金丝桃苷 、槲皮素和山
柰酚在 360nm附近有最大吸收 ,而杜鹃素的最大吸
收波长位于 299 nm,在上述色谱条件下金丝桃苷 、
槲皮素和山柰酚的保留时间在 29 min之前 ,杜鹃素
的保留时间在 29 min之后 ,为提高方法灵敏度 、减
少干扰 ,本实验设定程序变化检测波长 0 ～ 29 min
为 360nm, 29 ～ 40 min为 299nm。
3.4　流动相的选择　曾尝试采用甲醇 -水 、甲醇 -
醋酸水溶液 、乙腈 -醋酸水溶液等体系进行等度洗
脱 ,但均难以达到 4种组分在短时间内完全分离 ,而
选用甲醇 -0.2%磷酸水溶液进行线性梯度洗脱 ,可
使 4种成分在较短的时间内完全分离 ,满足测定需
要 。
3.5　小结　本实验建立了同时测定满山红中 4种
黄酮类成分含量的方法 ,为系统评价满山红的质量
提供理论依据。由测定结果可知 ,各产地满山红样
品中 ,金丝桃苷与杜鹃素的含量较高 ,而山柰酚的含
量相对较低 。
参考文献
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(本文于 2009年 6月 20日修改回)
—281—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(2)