全 文 ：香料香精化妆品　2009年 12月第 6期
FLAVOURFRAGRANCECOSMETICS　December, 2009, NO.6 研究报告
www.fc-journal.com
超高效液相色谱法测定天然提取物中的黄樟素
作　者
1.红塔烟草集团有限责任公司技术中心 ,玉溪　653100;
2.云南民族大学化学与生物技术学院 ,昆明　650031;
3.云南大学化学科学与工程学院 ,昆明　650091
王海利 1, 2 　孟昭宇 1 　汤建国 1 　陆舍铭 1………………
朱瑞芝 1 　刘正聪 3 　刘春波 2
作 者 简 介
王海利 , 在读硕士研究生 , 研究方
向:烟草化学 。
电话:0877-2968271
E-mail:hailiwang 2009@163.com
摘　要
　　建立了利用超高效液相色谱仪检测天然提取物中黄樟素含量的方法。 以无水乙醇为溶剂 ,振荡萃取黄樟素后 , 直接进
样。经配置 FLRD检测器的超高效液相色谱于激发波长 288 nm、发射波长 325 nm下对其进行检测。所得回归方程为:Y= 5.
51×106X + 3.48×105 , (R2 = 0.9986, n= 5),平均回收率为 95.1%, 检测限为 38.3 ng/g。该方法简便 、准确 , 适用于对天然
提取物中黄樟素的测定。
关键词
黄樟素　香精　超高效液相色谱
DeterminationofSafroleinNaturalExtractsbyUPLC
WANGHaili1, 2 　MENGZhaoyu1 　TANG Jianguo1 　 LU Sheming1 　ZHU Ruizhi1 　 LIU Zhengcong3 　
LIUChunbo2
(1.TechnologyCenterofHongtaTobacco(Group)Co., Ltd., Yuxi　653100, China;2.SchoolofChemistryand
Biotechnology, YunnanNationalitiesUniversity, Kunming　650031 , China;3.ColegeofChemicalScienceand
Engineering, YunnanUniversity, Kunming　650091, China)
Abstract　Amethodisestablishedfordeterminationofsafroleinnaturalextracts.Thesafroleinsamplewasextractedwithsolventof
anhydrousethanolundershaking, anddetectedbyUPLCwithFLRD, theλExwassetat288nmandtheλErawassetat325nm.There-
gressionequation:Y= 5.51×106X + 3.48×105(R2 = 0.9986, n= 5).TheaveragerecoveryofSafrolewas95.1%, Thelimitof
detectionwas38.3ng/g.Thismethodissimple, quickandaccurateforthedeterminationofsafroleinnaturalextracts.
Keywords　safrole　flavor　UPLC
收稿日期:2009-05-31
　　黄樟素又称黄樟脑 、黄樟醚 ,化学名称为 1-烯
丙基-3, 4-二氧亚甲基苯 ,它广泛存在于天然芳香植
物提取物中 。此外 ,腐烂的生姜中含有较多的黄樟
素 。然而有研究显示 ,黄樟素会导致肝癌 [ 1] 。美国
食品药物管理局(FDA)的研究显示[ 2] ,黄樟素可引
起肝癌 ,在小鼠的饲料中添加 0.04% ～ 1%的黄樟
素 , 150天到 2年即可诱导小鼠产生肝癌。黄樟素
经过代谢转化为活性致癌物的过程如下:黄樟素在
小鼠体内首先代谢为苯乙醇形式 ,接着被激活转化
为乙酸盐或硫酸盐 ,成为最终的致癌物。黄樟素若
与氧化剂结合 ,会生成具有更强致癌活性的环氧黄
樟素 [ 3] 。在美国 ,黄樟素是不允许作为食物添加剂
的。最近 ,欧盟专家委员会决定 ,在欧盟范围内制
定的食用香料香精法规中规定黄樟素在食品和饮
料中最大限量为 1 ～ 25 mg/kg,进一步降低黄樟素
的允许剂量 ,以减少对人体的危害 。鉴于此 , 检测
香精中的黄樟素含量很有意义 。
目前 ,分析植物中黄樟素的方法主要有 GC/
MS[ 4-6] 、HPLC[ 7-9] 。与 GC/MS相比 , HPLC具有更为
快速 、灵敏度高等优点。 UPLC的原理与 HPLC相
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同 ,但 UPLC提高了分析的速度 、灵敏度及分离度 ,
扩大了色谱柱的 pH值范围。同时检测香精中黄樟
素鲜有报道 ,因此建立了 UPLC法分析香精中黄
樟素。
1　材料和方法
1.1　材料和仪器
材料:甲醇 、无水乙醇(AR,汕头市达濠精细化
学品公司);磷酸(AR,广东汕头市西陇化工厂);甲
醇(色谱纯);二次蒸馏水(使用前经 0.22 μm水系
滤膜过滤);肉豆蔻油 、桂叶油 、肉桂皮油 、大茴香
油 、丁香花蕾油。
仪器:Waters超高效色谱仪(配备真空脱气机 、
二元梯度泵 、自动进样器 、恒温柱箱 、FLRD检测器
和色谱工作站);AE240电子分析天平 (精确至
0.0001 g, Metler公司);Certomat电子摇床;SZ-93
自动双重纯水蒸馏器;
1.2　样品的处理与分析
1.2.1　样品的处理
称取天然提取物肉豆蔻油样品 0.1000 g,桂叶
油 、肉桂皮油 、大茴香油 、丁香花蕾油各 1.0000 g,分
别置于 50 mL锥形瓶中 ,加入 10 mL无水乙醇 ,室温
下振荡 15 min后 ,静置 2 min,取上清液 1 mL,经 0.
22 μm滤膜过滤后待测 。
1.2.2　分析条件
色谱柱:BEH-C18 (2.1 mm×50 mm, 1.7 μm)
柱;流动相:乙腈-水(1∶ 1), 流速 0.3 mL/min;柱
温:40℃;进样量:1 μL;激发波长 288 nm,发射波长
325 nm。
采用与标样对比保留时间定性 ,外标法定量。
2　结果与讨论
2.1　分析条件的选择
2.1.1　提取方法的选择[ 4, 6-7]
黄樟素提取方法有水蒸汽蒸馏法 、萃取法 、同
时蒸馏萃取法 、超声萃取法 。在实际应用中水蒸气
和萃取法各有不足[ 6] ,同时蒸馏萃取法将水蒸汽蒸
馏和馏分的溶剂萃取两个步骤合二为一 ,但萃取时
间有些长同时不易把有机相回收完全 ,并且超声萃
取温度逐步升高 ,所测物质挥发性较强 [ 4] 受损失 ,
因此本实验选择振荡提取 。
2.1.2　提取条件的选择
本实验对比了不同振荡时间 、转速对提取率的
影响 ,振荡 15、20、30 min,转速 120、135、150 r/min
下的提取效果差别不大 ,由于所测物质挥发性较
强 ,因此提取条件选择室温下振荡 15 min, 转
速 120 r/min。
2.1.3　色谱条件的优化
对比了波长 282、235、288 nm作为激发波长 ,柱
温 30、35、40℃,甲醇 、乙腈分别作为有机相 ,加入 0.
025 mol/L磷酸 ,流动相不同比例 、不同流速下的标
品谱图。乙腈∶水 =3∶2(v∶v),标品峰型较好 ,但
实际样品谱图不好 ,综合考虑以上因素 ,将 288 nm
作为激发波长 , 325 nm为发射波长 , 40℃柱温 ,乙腈
∶水 = 1∶1(v∶v),峰型尖而窄 ,灵敏度高 ,因此作
为实验色谱条件。
2.2　工作曲线与检测限
精密量取黄樟素标品(郑州烟科院提供),将其
溶于无水乙醇 ,逐级稀释 ,分别配制成 0.1、1、2、5、
10 mg/kg标准溶液。分别吸取上述溶液 1 μL注入
液相色谱仪 ,记录峰面积 ,以峰面积 Y对浓度 X作
图。在 0.1 ～ 10 mg/kg浓度范围内 ,黄樟素的 FLRD
响应与其浓度线性相关。所得工作曲线图 1,其回
归方程为:Y=5.51 ×106 X+3.48 ×105 ,相关系数
R2 =0.9986,保留时间:2.498 min,检测限①为:38.
3 ng/g。
图 1　黄樟素工作曲线
　　注:①按 CL=Ksbl/S[ 10] 计算。式中 , CL———检测限;sbl———空
白测量的相对偏差;S———校正曲线斜率;K=3;3sbl——— 90%的置
信度
3　回收率与精密度
选取不含黄樟素的天然提取物桂叶油 ,分别添
加 3个不同浓度的标样 ,按方法 1.2.1处理分析样
品 ,计算相应回收率 , 结果见表 1。平均回收率为
95.1%,表明方法准确可靠 。
表 1　桂叶油中黄樟素的回收率(%)
加入量 /μg 测定值 /μg 回收率 /% 平均回收率 /%
0.284 0.302 103.5
0.568 0.544 95.8
0.929 0.800 86.1
95.1
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　　采用本方法平行测定肉豆蔻油中黄樟素 5次 ,
结果见表 2。RSD为 0.75%,表明本方法具有很好
的重复性。
表 2　肉豆蔻油中黄樟素的重复性
测定次数 黄樟素含量 /(μg/g)
1 138.6
2 140.0
3 138.0
4 137.4
5 138.0
RSD/% 0.75
2.4　实际样品的检测
采用本方法分别对 5种天然提取物中的黄樟素进
行了检测 ,结果(表 3)表明 ,肉豆蔻油中黄樟素含量较
高 ,不宜用作食品添加剂 ,桂叶油 、肉桂皮油 、大茴香
油 、丁香花蕾油未检出黄樟素 ,可作为食品添加剂。
表 3　部分天然提取物中黄樟素的含量(μg/g)
香料名称 黄樟素含量 /(μg/g)
肉豆蔻油 139.0
桂叶油 0.0
肉桂皮油 0.0
大茴香油 0.0
丁香花蕾油 0.0
3　结论
本方法利用 UPLC,可在 4分钟内分析一个样品
中的黄樟素 ,分析时间短 ,同时采用荧光检测器检
测 ,提高了灵敏度 , 并且前处理简单 , 成本低 。总
之 ,该方法快速 、准确 ,检测限低 ,适用于检测天然
提取物中黄樟素。
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CompendiumofAnalyticalNomenclature[S] .Oxford:Pergamon
Press, 1978.
最新消息
关于 “第八届(2010年)中国香料香精化妆品学术研讨会 ”征集论文的通知
　　据中国香料香精化妆品工业协会文件 ,协会拟于 2010年 6月在广州举办 “第八届(2010年)中国香料香
精化妆品学术研讨会 ”。从现在开始面向国内外香料香精 、化妆品及相关行业的从业和研究人士征集论文 。
论文涉及的范围为香料香精 、化妆品及相关行业。主要内容为:科学研究;新产品开发;新材料 、新工
艺 、新设备 、新技术推广与应用;分析与检测方法;法规政策与技术标准等方面。论文按要求的格式撰写 ,并
通过电邮或邮寄的方式于 2010年 3月 15日前报送至中国香料香精化妆品工业协会秘书处。
协会科技工作委员会将组织国内香料香精 、化妆品行业的权威专家 、学科带头人 ,对征集的论文进行公
开 、公平 、公正的评审和评选。征集的全部论文将分别汇编成 《论文集 》,印刷及制作成书籍和光盘 ,免费提
供给需求者及国家有关部门参阅。对获一 、二 、三等奖的论文作者分别颁发获奖证书和奖金 ,并由协会负责
在研讨会论文讨论区张贴 、以资鼓励并开展讨论。
学术研讨会对涉及行业重大科技进步 、自主创新发展的优秀论文 ,将在学术研讨会上发表或进行专题
演讲;将邀请国内外专家就企业 、消费者和政府共同关注的热点 、难点 、重点问题进行专题演讲并研讨;将邀
请统计部门或信息咨询公司发布香料香精 、化妆品行业的统计数据或信息 ,分析香料香精 、化妆品行业的现
状及前景。
请香料香精 、化妆品及相关行业的人士密切关注 、积极参与。 (本刊讯)
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