全 文 ：第 43 卷第 16 期
2015 年 8 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 43 No. 16
Aug. 2015
朝鲜当归源紫花前胡素对 LPS损伤 THP － 1 细胞的研究*
李 莉1，杜纪坤2，邹丽宜1，夏海珊1，张振声1，唐梓华1，吴 铁1
(1 广东医学院，广东 东莞 523808;2 深圳市宝安区沙井人民医院，广东 深圳 518104)
摘 要:THP － 1 细胞在佛波酯 (PMA)的作用下，分化为巨噬细胞样细胞后进行脂多糖(LPS)诱生炎性细胞因子，探讨朝
鲜当归源紫花前胡素对 LPS 诱导 TPH － 1 分泌肿瘤坏死因子 － α(TNF － α)、白细胞介素 － 1β(IL － 1β)、单核细胞趋化蛋白 － 1
(MCP － 1)的调节作用。结果表明，紫花前胡素能够提高 LPS所致 PMA 诱导分化的 THP － 1 的细胞活力的降低，并抑制 LPS诱导
产生的炎性细胞因子 TNF － α、IL － 1β和 MCP － 1。紫花前胡素对 LPS损伤的 THP － 1 细胞具有保护作用，可能是通过抑制 LPS 刺
激细胞所诱生的炎性细胞因子 TNF － α、IL － 1β和 MCP － 1 的水平而发挥炎症调节作用实现的。
关键词:THP － 1;紫花前胡素;抗炎症
中图分类号:R963 文献标志码:A 文章编号:1001 － 9677(2015)016 － 0088 － 03
* 基金项目:湛江市科技计划项目 (No. :2012C3104018) ;深圳市科技计划项目 (No. :201302173) ;广东医学院大学生创新实验项目 (No. :
2014ZYDM007)。
第一作者:李莉 (1981 －) ，女，助理研究员。
通讯作者:杜纪坤 (1980 －) ，男，助理研究员。
Protective Effect of Dercursin Purified from Angelica gigas Nakai
on LPS － induced Toxicity in THP － 1 Cells*
LI Li1，DU Ji － kun2，ZOU Li － yi1，XIA Hai － shan1，ZHANG Zhen － sheng1，TANG Zi － hua1，WU Tie1
(1 Guangdong Medical College，Guangdong Dongguan 523808;
2 Shenzhen Baoan Shajing Peoples Hospital，Guangdong Shenzhen 518104，China)
Abstract:To investigate the protective effect of decursin on LPS － induced toxicity in THP － 1 cells and its
underlying mechanism，the cell viability，TNF － α content，IL － 1β content and MCP － 1 content in LPS － induced
toxicity in THP － 1 Cells with and without coenzyme decursin were detected. The results showed that decursin reduced
LPS － induced cytotoxicity in THP －1 cells. Treatment of cells with decursin diminished intracellular generation of TNF －
α、IL － 1β and MCP － 1 in response to LPS. Decursin augments cellular anti － inflammatory defensed capacity，thereby
protecting the THP －1 cells from LPS － induced toxicity.
Key words:THP －1;decursin;anti － inflammatory
炎症反应有利于机体清除入侵的病原微生物，清除损伤坏
死的细胞及异常聚集沉积的蛋白质，促进损伤组织的修复。同
时也可产生大量的促炎性细胞因子，如 IL － 6、TNF － α、TGF
－ β、MCP － 1 等［1］。TNF － α、IL － 1β 和 TGF － β 是参与机体
炎性反应和一系列病理生理过程的重要介质。
中、日、韩三国药典分别收载了三种当归种属，朝鲜当归
(韩国) (A. gigas Nakai)、中国当归(A. sinensis (oliv. )Diels)
和日 本 当 归 (A. acutiloba Kitagawa or A. acutitoba Kitagawa
var. suglyama Hikino)。虽然三种当归的药理作用很相似，但是
其化学成分却相差迥异，香豆素类化合物为韩国当归的主要
成，其中紫花前胡素含量达到其干燥根的 4. 56%［2 － 3］，而在中
国当归和日本当时中却未发现类似化合物。研究表明，紫花前
胡素具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、抗老年痴呆、抗氧化、抗血栓
及血小板凝集作用［4］，然而紫花前胡素是否能有效抑制炎症反
应所致的损伤，鲜有报道。
本文 通 过 观 察 朝 鲜 当 归 源 紫 花 前 胡 素 对 脂 多 糖
(lipopolysaccharide，LPS)诱导的 THP － 1 细胞炎症性细胞因子
释放的调节作用，探讨紫花前胡素对 THP － 1 细胞炎症损伤的
保护作用与机制，为有效防治炎症疾病提供有益的实验数据，
可望为炎症疾病提出一种新的更好的治疗方案和药物或功能性
食品。
1 材料与方法
1. 1 材 料
人急性单核细胞白血病细胞 THP － 1，韩国细胞库 KCLB;
紫花前胡素 (由 Inje University Dr. MJ Kim教授提供) ;RPMI +
GlutaMAXTM － l 培养基，GIBCO;马血清，Invitrogen;MTT 试
剂盒，Biochem;PMA，Sigma － Aldrich;Bio － Plex Multiplex 细
胞因子试剂盒，Bio － Rad。
1. 2 细胞培养
将 THP － 1 细胞置于含 10%马血清的 RPMI + GlutaMAXTM
第 43 卷第 16 期 李莉，等:朝鲜当归源紫花前胡素对 LPS损伤 THP － 1 细胞的研究 89
－ l培养基 (含青霉素 100 IU/mL，链霉素 100 IU/mL)中，于 37
℃、5% CO2培养箱静置培养。该细胞株悬浮生长，每两天换液
一次。细胞复苏后，传至 3 ～ 5 代后方可用于建模。选取对数
生长期细胞进行实验。
1. 3 实验分组及药物处理
实验分组为:正常对照组、LPS 模型组(1 μg /mL)、紫花
前胡素(2. 5 μM)+ LPS (1 μg /mL)低浓度处理组、紫花前胡素
(5 μM)+ LPS (1 μg /mL)中浓度处理组及紫花前胡素(10 μM)
+ LPS (1 μg /mL)高浓度处理组。
离心收集对数期 THP － 1 细胞，106 个 /孔接种于 96 孔板，
加入 50 ng /mL PMA刺激活化 24 h 后去除培养上清，以 37 ℃温
育的 RPMI + GlutaMAXTM － l 培养基洗涤 3 次，洗去未贴壁的
THP － 1 细胞。用 PMA处理后的贴壁细胞，即为分化成熟的巨
噬细胞。将每孔培养基吸出，用 PBS 洗涤 3 遍，换新鲜 RPMI
+ GlutaMAXTM － l培养基继续培养 24 h 后，各组吸弃原培养液，
分别加入 LPS (1 μg /mL)、不同浓度 (0、2. 5、5、10 μM)的
紫花前胡素继续孵育 24 h后，检测各项实验指标。
1. 4 MTT 法检测紫花前胡素对 LPS 诱导分化的
THP －1 细胞活性的影响
细胞在线粒体能量代谢过程中产生的玻拍酸脱氢酶可将淡
黄色的四甲基氮哇盐 (MTT)还原成不溶于水的蓝紫色
Formazan 结晶，形成的结晶与增殖的细胞数成正比，将结晶溶
解，在最大吸收峰波长测定溶液吸光度值，能直接反映活细胞
的数量及其新陈代谢强度。各组细胞按上述方法处理后到相应
时间点，加入 MTT (5 mg /mL)20 μL /孔，继续培养 4 h 后吸除
上层液体，加入 DMSO 100 μL /孔，于 37 ℃培养箱 15 min，待
蓝紫色结晶物完全溶解后，酶标仪检测各组细胞在 490 nm 下
的吸光值。以为正常对照组细胞生长率为 100%，其余各组按
下列公式计算细胞存活率:
细胞存活率 =各组吸光值 /正常对照吸光值 × 100%
1. 5 紫花前胡素对 LPS 诱导分化的 THP －1 细胞炎
性细胞因子分泌影响
取细胞匀浆上清，按照 Bio － Rad公司试剂盒说明书，使用
Luminex 100 analyzer (Luminex Corp.，Austin，TX)进行炎性细
胞因子 TNF － α、 IL － 1β 和 MCP － 1 含量测定，利用
MasterPlexTM QT Analysis version 2 (MiraiBio，Alameda，CA)制作
标准曲线进行定量。
1. 6 统计学处理
本文中的各项实验每组均重复 3 次以上，数据用 Mean ±
SD 表示，结果比较采用单因素方差分析和 ANOVA检验统计分
析。p ＜ 0. 05 为差异有显著性意义。
2 结 果
2. 1 紫花前胡素减轻 LPS 诱导分化的 THP －1 细胞
活性降低
为了确立分化的 THP － 1 细胞损伤模型中合适的 LPS浓度，
首先分析不同浓度的 LPS 下分化的 THP － 1 细胞活力的变化。
结果显示:细胞活力与 LPS浓度呈负相关，即与正常对照组相
比，各实验组细胞活力随 LPS 浓度增大而下降。其中 1 μg /mL
LPS组，当作用时间为 24 h 时细胞活力约为 70%，选取 1 μg /mL
LPS浓度制作炎症损伤模型(图 1)。
图 1 不同浓度 LPS对分化的 THP － 1 细胞活性的影响
Fig. 1 Cell viability of LPS in THP － 1 cells
图 2 紫花前胡素对 LPS诱导的 THP － 1 细胞的活性的影响
Fig. 2 Effect of decursin on LPS － induced toxicity in THP － 1cells
如图 2 所示，THP － 1 细胞在不同浓度紫花前胡素中预孵
育 24 h，紫花前胡素对细胞活性呈剂量依赖性增加，紫花前胡
素小剂量组细胞活性较模型组未见明显升高(p ＞ 0. 05) ，在用
5 μM 紫花前胡素处理细胞时，细胞的存活率与 LPS 组相比有
显著提高(p ＜ 0. 05) ，在使用 10 μM 紫花前胡素处理细胞时，
细胞存活率达到峰值(p ＜ 0. 01)。表明紫花前胡素对 LPS 诱导
的 THP － 1 细胞的炎症损伤具有保护作用。
2. 2 紫花前胡素抑制 LPS 诱导分化的 THP －1 细胞
炎性细胞因子分泌
图 3 紫花前胡素对 LPS诱导的 TNF － α分泌的影响
Fig. 3 Effects of decursin on LPS － induced TNF － α secretion in THP － 1cells
对各组细胞进行细胞因了检测，结果显示(图 3 ～ 图 5) :
LPS能有效刺激 PMA 诱导分化的 THP － 1 细胞分泌炎性细胞因
子 TNF － α、IL － 1β 和 MCP － 1，与正常对照组相比有显著性
差异(p ＜ 0. 01)。紫花前胡素作用时，TNF － α、IL － 1β和 MCP
－ 1 产生的量显著低于 LPS 刺激所诱导的量，显示了紫花前胡
素对 LPS 诱导的炎性细胞因子分泌的抑制作用，且呈剂量依赖
性增加(p ＜ 0. 05)。
90 广 州 化 工 2015 年 8 月
图 4 紫花前胡素对 LPS诱导的 IL － 1β分泌的影响
Fig. 4 Effects of decursin on LPS － induced IL － 1β secretion in THP － 1cells
图 5 紫花前胡素对 LPS诱导的 MCP － 1 分泌的影响
Fig. 5 Effects of decursin on LPS － induced MCP － 1secretion in THP － 1cells
3 讨 论
炎性反应对机体的影响是一把双刃剑。在炎性反应发生初
期，当巨噬细胞受到相应刺激后便会被激活，这些活化的巨噬
细胞可分泌 TNF － α、IL － 1β 和 TGF － β，而 TNF － α、IL － 1β
和 TGF － β 又可通过特异性地作用于外周血中的单核细胞和细
胞信号传导激活核因子 － κB (nuclear factor，NF － κB) ，造成单
核细胞的进一步募集和活化，进而更多的炎性介质释放，最终
导致炎症的进一步发展［5 － 6］。因此，TNF － α、IL － 1β 和 TGF
－ β在炎性反应的发生发展中起着举足轻重的作用，降低 TNF
－ α、IL － 1β和 TGF － β的表达水平有助于阻止早期炎性反应。
脂多糖 (LPS)又称为内毒素，是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要
成分，能够刺激单核 －巨噬细胞高分泌 TNF － α、IL － 1、IL － 6
等促炎性细胞因子［7］。本实验采用 LPS 孵育经 PMA 诱导的
THP － 1 细
胞，建立了炎症细胞模型，通过 MTT法发现紫花前胡素能够提
高 LPS致 THP － 1 细胞的细胞活力的降低。为了进一步了解紫
花前胡素防御 LPS 致 THP － 1 细胞的炎症损伤，通过检测各实
验组 TNF － α、IL － 1β 和 TGF － β 含量发现，与模型组比较，
紫花前胡素能够抑制 LPS诱导的 THP － 1 细胞 TNF － α、IL － 1β
和 TGF － β的升高。实验结果提示，紫花前胡素可能通过调节
炎性因子 TNF － α、IL － 1β 和 TGF － β 的分泌，从而实现对细
胞的保护作用。
4 结 论
本实验研究结果表明，紫花前胡素对 LPS 损伤的 THP － 1
细胞具有保护作用，能够降低炎性细胞因子的分泌，提示紫花
前胡素可能对相关炎症疾病具有保护作用。这些研究为紫花前
胡素用于防治炎症、增加其临床适应症提供一定的依据，但是
其在分子水平的作用机理还有待进一步研究。
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