全 文 ：0 9黑龙江医药 H e iL on gj ia飞 M e a ie al J o ur n al v 0 I· 1 1N O. 2 18 9 9
立即涂平皿置于 37℃恒温避光培养 . 然后挑选不同
形态的单菌落接斜面 ,进行摇瓶筛选 .
2 实验结果
2
.
1 摇瓶筛选
紫外线诱变处理时 ,必须确定合适的处理时间 ,
不同照射时间 ,抱子致死率不同 ,结果如表 1 .
表 1 紫外线照射不同时间的致死率
表 3 摇瓶复谛结果比较
菌株号
平均效价
( U /m l )
F : 一 Z F : 一 3 F : 一 4 F : 一 6 P Z一 S F -
2 1 0 2 0 2 14 3 0 2 2 9 9 4 2 2 3 3 1 2 2 0 1 4 2 0 5 0 0
提高百分率
( % )
2
·
5 4
.
5 1 2
.
2 8
.
9 7
.
4 对照
照射时 间 ( s )
致死宝 (% )
2 0 3 0 4 0
5 0 7 0 7 5
从照射时间为 2 0 5 、 30 5 的平皿中经培养后挑选
20 个长势旺盛形态各异的菌落接斜面 (所挑选的菌
落形态见表 2) 根据摇瓶发酵结果挑选出 8 个发酵水
平较高的菌株作为第 2 轮诱变的出发菌株 , 以同样
剂量和时间进行照射和复筛 , 在复筛过程中同时考
察各菌株传代的稳定性 ,将传代中表现不稳定的 F :
一 1 , F : 一 5 , F : 一 7 逐步淘汰 , 其他几个菌株的平均结
果见表 3 。
表 2 菌落形态
苗落形态 直径 数量 ( % )
1
、 梅花型 . 边缘有浅棕色底座 4 . 5 ~ 6 . 0 70
2
、轮形 .泡子致密洁 日 4 , 。~ 4 . 5 15
3
、 草 帽形 . 中间突起边缘有放射条纹 3 . 。 ~ 4 . 5 10
4
、 扁平型 .绒状物多 4 . 5 ~ 6 . 0 5
由表中可见 F : 一 4 较原始出发菌株提高了 12 . 2 % ,
由此推出 F : 一 4 菌株较原菌株如其他菌株生产能力
能强 ,从而获得新高产菌株 .
3 讨论
本文经紫外线诱变处理和摇瓶复筛后获得新菌
株后 F : 一 4 比出发菌株效价提高 1 2 . 2% 。 说明紫外
线诱发育种优于原先采用的以 自然分离的方式进行
的菌种的纯化和复壮 .
参考文献
1 祷知告 . 实用 医 学实脸设计 . 北京 医科大 学中
国协和医科大学联合 出版社 , ” 92 ; 73 一 79
2 彭乍肚 ,等 . 徽 生物学通报 . 19 95 ; 2 24 : 197
收稿日期 : 1 9 9 7一 1 1一 2 6
高效液相色谱法测定满山红中斜皮素含量
乔凤云 宋爱华 刘 臣
哈尔滨中药二厂
提要 用 H P L C 法测定满 山红 中拼皮素含重 ,在 lC 。柱上 以 甲醉 一水一冰 乙酸 (5 0 , 50 , 25)
为 流 动 相 . 栓 测 波 长 3 70 n m , 满 山 红 中拼皮素与其 它成分得到 良好 分 离 , 回 收 率 为 9 9 . 2 % 士
。 . 26 % 。 本文所 建立 的方 法可应用于满 山红的质量拉制 .
关键词 高效液相 色谱法 ;拼皮素 ;含全测定
满山红为杜鹃花科植物兴安杜鹃的干燥叶具有 酮单体的研究 , 以此控制满山红原料的质量 .
止咳 、 祛痰 , 用于急慢性支气管炎 (1) ,其中的有效成 l 仪器与试药
分有杜鹃素 、 杜鹃酮 、 榭皮素 。 懈皮素还可诱导人 白 高效液相色谱仪 : w at er s 51 5 型泵
血病细胞系 H L 一 60 细胞程序性死亡山 . 以往的原 W at er s枷 4 86 紫外检测器
料检验都 只控制总黄酮含量 , 而懈皮素含量未曾有 w at er s7 46 积分仪
过报道 、 本文 以裕 皮素含量为标准进行满山红中黄 甲醇 、冰乙酸 、 乙醇均为分析组
DOI : 10. 14035 /j . cnki . hl jyy . 1998. 02. 025
黑龙江医药 He i Lo ng jia ng M e die a l Jo u a r n l VO I .1 1 NO . 21 9 9 5
懈皮素标准品 中国生物制品检定所提供
色谱条件
色谱柱 A l l t。 。 e 圣, C , , . 5拜m 4 . 6 rn m x Z o o m m
流动相 : 甲醇一 水 一冰乙酸 ( 50 : 50 : 2 5)
检测波长 3 7 0n m
流速 1 . 2m l /m i n
柱温 室温
此条件下色谱分离结果见图 1
的.闪工ù一
榭皮素对照 品 样品
a 撇皮素 b 、 。 其它成分及杂质
3 样品溶液的制备
精密称取满山红 一 0 0 1 2 9 ,置 i o o m l 具塞磨口三
角瓶中 . 加 40 写乙醇 4 o m l超声提取 30 分钟 ,滤过 ,
用 4。% 乙醇定容至 50 m l容量瓶中 ,作为样品溶液 。
4 对照品溶液的制备
精密称取千燥至恒重的懈皮素对照品 .1 75 m g
置 s oml 棕色容量瓶中 ,加 40 % 乙醇溶解并定容至刻
度 ,制成 。 . 0 35 m g / m l 的对照品溶液 。
5 搬皮素峰面积与浓度的线性关系考察
按本文所述色谱条件分别进样对照品溶液 2川、
4拜 I、 s产I、 1 2拌 I 、 1 6产 l 、 2 0拜I ,测定峰面积 , 结果 (见表 1 )
裕皮素进样量在 。 . 07 ~ 。 . 7产g 范 围内呈现 良好的线
性关系 . 回归方程为 :
y = 1 0 5 3 1
·
4+ 68 0 1 0 9 2
.
7 x r = 0
.
9 9 9 7
表 1 椒皮素进样量与峰面积的关系
挽牛皮素进徉
量 (拜g )
0
.
0 7 0 1 4 0
.
2 8 0
,
4 2 0
.
5 6 0
.
7 0
6 精密度试验
同一样品 . 相同体积 , 重复进样 6 次 , 蜂面积积
分值的 R s D ~ .0 86 %
7 重复性实验
同一批样品 ,按样 品制备方法平行制备 5 份 , 依
法测定 ,含量平均值的 R S D ~ .0 98 % .
8 回收率试验
分别称取已测知含量的样品 0 . 50 249 , 加入对照
品溶液适量 (相 当于懈皮素 。 . 15 m g ) ,按文中方法测
定 ,算得回收率为 ” . 2% 士 .0 26 % .
9 样品测定
分别取六批不同产地的满山红样品 , 依法测定
含量 ,结果见表 2 。
表 2 不同产地满山红中搬皮素含量测定结果 n ~ 6
样品 平均含量 ( % )
林 口 o · 1 3 8
海林 .0 15 9
牡丹江 .0 0 9 8 5
五林 o · 1 4 6
宁安 o · 1 1 2
柴河 .0 15 。
l 。 讨论
10
.
1 曾试验 用 30 % 乙 醇和 40 % 乙 醇 分别 超声
Z o m in
,
3 o m in 提取样 品 ,结果 4 0 % 乙醇超声 3 o m i n
提取完全 ,测定量最高 , 因此 ,选定作为样 品的提取
方法 。
10
.
2 各产地满山红中拼皮素含量不同 ,其中以海
林的满山红含量最高 。
1 0
.
3 按文中配制的对照品溶液和样品溶液最好采
用棕色容量瓶 ,在 3小时内完成测定 . 随着时间的增
加 ,温度 ,光照的变化含量稍有下降 . 因此 . 本实验最
好在低温 、遮光条件下进行 .
参考文献
1 中国药典 . 1 9 95 一部
2 肖东子 . 中成药 . 1 9 9 7 ; 1 9 ( 1 0 ) : 3 1一 3 2
峰面积
47 450 2 94 96 6 8 1 89 8 13 7 294 8 20 5 38 13 3 58 4 73 76 90
( A )