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不同加工方法对中药溪黄草主要化学成分的影响



全 文 :第 21 期
收稿日期:2014-03-14
基金项目:国家中药材扶持项目[(工信部消费(2008)425 号)]
作者简介:潘雪峰(1988-),男,四川达州人,在读硕士研究生,研究方向为中药资源与质量控制,(电话)15802878377(电子信箱)
741762936@qq.com;通讯作者,李 明,硕士研究生导师,主要从事中药资源与鉴定研究,(电子信箱)lm862002@yahoo.com.cn;
邓乔华,高级制药工程师,主要从事中药 GAP 基地的建设与申报,(电子信箱)13826298768@126.com。
不同加工方法对中药溪黄草主要化学成分的影响
潘雪峰 1,2,张慧晔 2,林建云 2,徐小飞 2,李 明 1,邓乔华 2
(1.广东药学院中药学院,广州 510006;2.广州白云山和记黄埔中药有限公司,广州 510515)
摘要:为比较不同加工方法对 3 个品种溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.) Hara]药材中迷迭香酸、总二萜、
总黄酮含量的影响,以寻找出溪黄草药材的最适加工方法,为溪黄草药材 GAP 基地的建设提供一定的参
考 ,以溪黄草、线纹香茶菜 [Rabdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)Hara]、纤花香茶菜 [Rabdosia
lophanthoides (Buch.-Ham.ex D.Don)Hara var.graciliflora (Benth.)Hara]为材料,分别采用不同的加工方
法处理,采用 HPLC 测定样品中迷迭香酸含量,采用紫外-可见分光光度法测定样品中总二萜和总黄酮的
含量。 结果表明,不同加工方法对迷迭香酸的含量影响较大,而对总二萜和总黄酮的含量影响不显著,经
远红外干燥和烘干工艺处理的样品中 3 种成分的含量普遍偏低, 而经阴干工艺处理的样品中 3 种成分
含量普遍偏高。 说明不同加工方法对中药溪黄草中 3 种成分含量有影响,从活性成分的损失和节约生产
成本等方面综合考虑,建议对溪黄草品种采用鲜切段后再阴干的加工方法,线纹香茶菜和纤花香茶菜采
用阴干后再干切段的方法质量较好。
关键词:溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.) Hara];加工方法;迷迭香酸;总二萜;总黄酮
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2014)21-5217-04
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.043
Effects of Different Processing Methods on the Main Chemical Compositions of
Linearstripe Rabdosia Herb
PAN Xue-feng1,2, ZHANG Hui-ye2, LIN Jian-yun2, XU Xiao-fei2, LI Ming1, DENG Qiao-hua2
(1.School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China;
2.Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Company Limited, Guangzhou 510515, China)
Abstract: To find out the optimal processing method of Linearstripe Rabdosia Herb and further provide a reference for
building the GAP planting base of Linearstripe Rabdosia Herb, the effects of different processing methods on the content of
rosmarinic acid, total diterpenoids and total flavonoids were studied. The materials included Rabdosia serra (Maxim.) H.Hara,
Rabdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don) H.Hara, Rabdosia lophanthoides (Buch.-Ham.ex D.Don) H.Hara var.graciliflora
(Benth.) H.Hara. The content of rosmarinic acid was analyzed by HPLC. The content of total diterpenoids and total flavonoids
were determined by UV spectrophotometry. The results showed that the effect of different processing on the content of
rosmarinic acid were higher. The influence on the content of total diterpenoids and total flavonoids was not significant by
different processing methods. The contents of three kinds of chemical component were generally lower when treated by far-
infrared dryer and stoving. The contents of the three components were generally higher when dried in shade. It is indicated
that processing method had influence on the contents of chemical component in Linearstripe Rabdosia Herb. It is advised that
the Rabdosia serra (Maxim.) H.Hara should be fresh-cut first and then dried in the shade. Rabdosia lophanthoides (Buch.-
Ham.ex D.Don) H.Hara var.graciliflora (Benth.) H.Hara should be dried in the shade first and then drily cut considering the
comprehensive evaluation of active constituents and cost of production.
Key words: Rabdosia serra (Maxim.) Hara; processing method; rosmarinic acid; total diterpenoids; total flavonoids
第 53卷第 21期
2014年 11月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 53 No.21
Nov.,2014
湖 北 农 业 科 学 2014 年
表 1 样品的加工方法
方法编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
加工方法
鲜切段后远红外干燥
鲜切段后烘干
鲜切段后阴干
鲜切段后晒干
60%~70%干度切段后远红外干燥
60%~70%干度切段后烘干
60%~70%干度切段后阴干
60%~70%干度切段后晒干
全草远红外干燥后切段
全草烘干后切段
全草阴干后切段
全草晒干后切段
注: 远红外干燥和烘干温度控制在 60℃;60%~70%干度是指晒
干到 60%~70%干度。
溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.) Hara]为民间
习用草药,具有清热解毒、利湿退黄、散瘀消肿的功
效,主治湿热黄疸、胆囊炎等疾病,主产于长江以南
的广东、广西、江西、福建等省区,俗称熊胆草、黄汁
草、手擦黄等,因喜生山谷溪旁潮湿处,新鲜叶片揉
搓有棕黄色液汁而得名[1,2]。广东省作为药用的溪黄
草品种主要有:线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides
(Buch.-Ham.ex D.Don)Hara]及其变种纤花(细花)
香茶菜[Rabdosia lophanthoides (Buch.-Ham.ex D.
Don)Hara var.graciliflora (Benth.)Hara] [3,4],另外 ,
溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.)Hara]在部分药材
市场上也被用作溪黄草药材流通。 《中药大辞典》
(下册)[5]中记载:溪黄草地上部分主要含有的二萜
类化合物具有抗肿瘤活性,其黄酮类物质对羟自由
基和氧自由基具有清除作用。 近年来,有研究发现
溪黄草中含有迷迭香酸成分 [6],迷迭香酸为天然抗
氧化剂[7],而溪黄草药材治疗肝炎的物质基础,即涉
及抑制乙肝病毒的有效部位和活性成分,可能与高
效抗氧化物质对细胞的保护作用有关[8]。
中药材在采收后, 一般都须进行产地加工,产
地加工是保证药材质量的重要环节,对于药材进一
步加工炮制起着决定性作用。 早在唐代孙思邈的
《千金翼方》就有“夫药采取不知时节,不知阴干曝
干,虽有药名,终无药实”的论述,阐明了正确的采
收加工对中药质量的重要意义。 目前,文献关于溪
黄草药材的产地加工研究较少,笔者经多年产地调
研发现各地种植户采用的基本是采收后直接晒干
的方法。 鉴于其他草本类中药材,如穿心莲 [9]、马齿
苋 [10]、黄花蒿[11]等在经过不同加工方法后其主要有
效成分含量变化显著。 为了提高溪黄草药材的质量
及为 GAP基地的建设提供参考资料,有必要对溪黄
草药材的加工方法进行探索。 本试验通过测定经不
同加工方法处理后的溪黄草药材中迷迭香酸、总二
萜、总黄酮 3 种活性成分的含量,以期为确定溪黄
草药材最佳产地加工方法提供科学依据,为按中药
材 GAP 原则制定相关标准操作规程(SOP)并实施
推广应用提供基础研究资料。
1 材料与方法
1.1 材料
仪器和试剂:Agilent1260 型高效液相色谱仪(包
括四元泵、DAD 二极管阵列检测器、自动进样器,安
捷伦科技有限公司);UV-2550 型紫外-可见分光光
度计(日本岛津);H.H.S6 型电热恒温水浴锅(上海
浦东荣丰科学仪器有限公司);DHG-9240A 型电热
恒温鼓风干燥箱 (上海一恒科学仪器有限公司);
766-OAT 型远红外辐射干燥箱(上海锦屏仪器仪表
有限公司通州分公司);BT214D 和 CP225D 型电子
分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)等。 迷
迭香酸对照品(纯度≥98%)购自成都曼思特生物科
技有限公司 , 冬凌草甲素和芦丁对照品 (批号
111721-200602,100080-200306) 均购于中国药品
生物制品检定所。 甲醇为色谱纯,水为去离子水,其
他试剂均为分析纯。
样品: 本试验所用 3 个品种溪黄草药材均采
自广州白云山和记黄埔中药有限公司溪黄草基
地,经广东药学院中药学院李明教授鉴定为线纹香
茶菜[Rabdosia lophanthoides(Buch.-Ham.ex D.Don)
Hara]、纤花香茶菜[Rabdosia lophanthoides (Buch.-
Ham.ex D.Don) H.Hara var.graciliflora (Benth.)
Hara]、溪黄草[Rabdosia serra (Maxim.) Hara]。
1.2 方法
1.2.1 样品加工方法 3 个品种药材采收后随机分
组,采用不同的加工方法处理(表 1)后粉碎并过 60
目筛,备用。
1.2.2 迷迭香酸的含量测定
1)色谱条件:Dikma Diamonsil(2)C18色谱柱(250
mm×4.6 mm,5 μm); 流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶
液(43∶57);柱温 25 ℃;检测波长 330 nm;流速 1.0
mL / min, 进样量 10 μL。 理论塔板数按迷迭香酸计
应不低于 5 000,分离度大于 1.5。
2)对照品溶液的制备:精密称取迷迭香酸对照
品 2.00 mg,置 100 mL 容量瓶中,加 70%乙醇溶液
稀释制成 0.02 mg / mL 的溶液,摇匀,即得。
3)供试品溶液的制备:取样品粉末约 0.1 g,精
密称定,置 150 mL 具塞锥形瓶中,加入 70%乙醇溶
液 20 mL,摇匀,置 85 ℃水浴加热回流 1 h,放冷,滤
5218
第 21 期
过,用溶剂洗涤残渣 2~3 次,合并滤液,再用溶剂定
容至 25 mL容量瓶中。进样前过 0.45 μm微孔滤膜,
取续滤液供 HPLC分析。 按以上色谱条件得到对照
品迷迭香酸和 3个品种样品色谱图(图 1、图 2)。
4) 方法学验证: 迷迭香酸进样量在 0.04~0.60
μg 时线性关系良好, 其回归方程为 Y=2 801.8X+
12.395(R2=0.999 9,n=6);精密度、稳定性、重复性
RSD 分别为 0.46%、1.07%、2.91%; 平均回收率为
100.9%,RSD为 2.38%。
1.2.3 总二萜、总黄酮的含量测定
1)方法与条件:本试验采用紫外可见分光光度
法测定总二萜和总黄酮的含量,以冬凌草甲素为对
照品,在 238 nm 处测定总二萜的含量,以芦丁为对
照品,在 257 nm处测定总黄酮的含量。
2)对照品溶液的制备:①冬凌草甲素对照品溶
液制备:精密称取冬凌草甲素对照品 5.07 mg,置于
20 mL 容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得 0.253 5
mg/mL的标准溶液。②芦丁对照品溶液制备:精密称
取芦丁对照品 15.08 mg,置于 50 mL 容量瓶中,加甲
醇稀释至刻度,即得 0.301 6 mg/mL的标准溶液。
3)供试品溶液的制备:取本品粉末约 1.0 g,精
密称定,置 250 mL 具塞锥形瓶中,加入 50%乙醇溶
液 40 mL,摇匀,水浴回流 45 min,放冷,滤过,用溶
剂洗涤残渣 2~3 次,合并滤液,用溶剂定容至 50 mL
容量瓶中,摇匀,精密吸取 0.5 mL 溶液,置于 25 mL
容量瓶中,再加溶剂稀释至刻度,摇匀,即得。
4) 方法学验证 : 冬凌草甲素质量浓度在
0.005 07~0.050 70 mg / mL 时线性关系良好,其回归
方程为 A1=25.032C1-0.000 2,R2=0.999 8;精密度、稳
定性、 重复性 RSD 分别为 0.97%、2.36%、2.38%;平
均回收率为 99.89%,RSD 为 2.54%。 芦丁质量浓度
在 0.003 77~0.060 32 mg/mL 时线性关系良好,其回
归方程为 A2=29.755C2-0.002 3,R2=0.999 9;精密度、
稳定性、 重复性 RSD 分别为 0.34%、1.27%、1.82%;
平均回收率为 100.94%,RSD为 2.09%。
2 结果与分析
不同加工方法的 3 个品种溪黄草药材主要化
学成分含量(以干燥品计)测定结果见表 2。 由表 2
可见,不同加工方法对所有样品 3 种化学成分的含
量均有一定的影响,其中对迷迭香酸的含量影响较
大,而对总二萜和总黄酮的含量影响不显著。 溪黄
草品种所含迷迭香酸的量较其他两个品种偏低,而
3 个品种所含总二萜和总黄酮的量差异较小。 经远
红外干燥和烘干工艺处理的样品中 3 种成分的含
量普遍偏低,经阴干工艺处理的样品中 3 种成分含
量普遍偏高, 这可能与高温易破坏成分的结构有
关,故阴干有助于提高溪黄草药材的质量,干燥前
是否切段对成分的含量会产生一定的影响。
溪黄草品种经方法 9 处理的样品 3 种成分的
含量均最低,总含量为 5.424%,其中迷迭香酸的含
量仅为 0.034%,与最高含量组(方法 8)0.554%相差
近 16 倍,而总二萜和总黄酮的含量差异较小;经方
法 3处理的样品 3 种成分总含量最高, 为 9.425%,
且总二萜和总黄酮含量均最高。 线纹香茶菜品种经
方法 1 处理的样品 3 种成分的含量均最低,总含量
为 7.184%, 经方法 11 处理的样品 3 种成分的含量
均最高,总含量为 16.229%,两种方法所得迷迭香酸
的含量相差近 11 倍, 而总二萜和总黄酮的含量相
差 1倍左右。 纤花香茶菜品种经方法 9处理的样品
迷迭香酸含量最低,仅为 0.064%,与最高组(方法
11)1.124%相差近 17 倍,而经方法 2 处理的样品总
二萜和总黄酮的含量均最低; 经方法 11 处理的样
品 3种成分总含量最高,为 11.299%。 由此说明,溪
黄草药材的产地前处理在一定程度上会影响该药
材的质量。
3 小结与讨论
干燥是中药材生产与品质形成的重要环节,除
少数需鲜用的药材外,绝大多数新采的药材均需经
过干燥才能成为合格的商品药材。 晒干是最常用、
最简便、最经济的药材干燥方法,多数药材可用此
法;阴干适用于不宜久晒或暴晒的药材,如薄荷 [12]、
当归等;烘干由于温度可控,不受天气影响,效率高
图 1 迷迭香酸对照品 HPLC 图
0 5 10 15 20 25 30
迷失香酸
图 2 3 个品种样品 HPLC 图
0 5 10 15 20 25 30
迷失香酸
纤花香茶菜
线纹香茶菜
溪黄草
潘雪峰等:不同加工方法对中药溪黄草主要化学成分的影响 5219
湖 北 农 业 科 学 2014 年
(责任编辑 曾德芳)
表 2 不同加工方法的 3 个品种溪黄草药
材主要化学成分含量 (n=3)
品种
溪黄草
线纹香
茶菜
纤花香
茶菜
方法
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
迷迭香酸
含量//%
0.134
0.123
0.512
0.284
0.453
0.413
0.322
0.554
0.034
0.110
0.367
0.247
0.204
0.236
1.976
1.094
1.199
1.371
1.433
1.431
0.577
0.454
2.443
1.046
0.266
0.110
0.803
0.241
0.510
0.764
0.314
0.553
0.064
0.106
1.124
0.402
总二萜
含量//%
4.401
4.437
5.689
4.678
4.829
4.545
5.571
5.603
3.495
4.110
5.652
5.367
4.518
4.554
8.621
6.857
6.951
7.024
8.191
7.877
6.271
6.123
9.184
6.296
5.604
4.087
6.737
5.269
6.144
6.830
5.996
6.518
4.468
4.619
6.759
6.674
总黄酮
含量//%
2.513
2.471
3.224
2.661
2.680
2.474
2.996
3.116
1.895
2.258
3.170
2.894
2.462
2.467
4.372
3.539
3.606
3.620
4.192
4.074
3.377
3.297
4.602
3.304
3.174
2.371
3.699
2.880
3.316
3.629
3.263
3.439
2.633
2.517
3.416
3.626
总含量
%
7.048
7.031
9.425
7.623
7.962
7.432
8.889
9.273
5.424
6.478
9.189
8.508
7.184
7.257
14.969
11.490
11.756
12.015
13.816
13.382
10.225
9.874
16.229
10.646
9.044
6.568
11.239
8.390
9.970
11.223
9.573
10.510
7.165
7.242
11.299
10.702
而被广泛应用,但热风干燥会使药材的有效成分损
失,甚至严重降低药材品质;远红外干燥适用于含
水量大、有效成分对热不稳定、易腐烂变质或贵重
药材及饮片的快速干燥,如鹿茸、西洋参等;微波干
燥具有穿透力强、加热均匀、反应灵敏、热效率高、
有效成分破坏少等优点,但不适用于热敏类成分的
中药,如人参、杭白菊 [13]等;真空冷冻干燥能很好地
保持中药材的色、香、味,可最大程度地保留物料原
有的天然品质,挥发性成分丢失少,但设备投资和
运转费用高、冻干时间长、缺少在线快速检测水分
的手段; 高压电场干燥法干燥过程物料不升温,干
燥条件灵活可调, 伴有杀菌作用, 设备造价低,节
能,如赤芍、知母、厚朴 [14]等的干燥可采用。 中药干
燥技术各有优劣,在具体应用中要针对所干燥药材
的要求,采用最合适的加工方法。
为了充分发挥中药多成分性、多靶向性及多效
应性的特色和优势,本试验依据溪黄草药材中主要
有效成分迷迭香酸、总二萜、总黄酮的收率进行加
工方法综合评价。根据试验结果,结合产地加工条件
的可行性、方法的简便性、经济性,笔者建议中药溪
黄草的产地加工方法如下:溪黄草品种采用鲜切段
后再阴干的方法处理其品质较佳;线纹香茶菜和纤
花香茶菜采用阴干后再干切段的方法处理其品质
较佳。 同属药材出现不同的最佳加工方法的结果可
能与不同种的原因有关。 本试验为寻找中药溪黄草
的最佳产地加工方法提供了数据支持,对于溪黄草
药材的产地加工和 GAP 基地的建设具有一定的指
导意义,但溪黄草药材加工方法的改变对其化学成
分和药效作用的影响的相关性还有待进一步研究。
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