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猪殃殃中绿原酸的薄层色谱鉴别及扫描



全 文 :第 40 卷第 24 期
2012 年 12 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 40 No. 24
December. 2012
猪殃殃中绿原酸的薄层色谱鉴别及扫描
刘频健,陈 剑,任亚楠
( 九江学院基础医学院,江西 九江 332000)
摘 要:建立猪殃殃中绿原酸的薄层色谱鉴别方法。猪殃殃药材经醇提,以绿原酸为对照品,以乙酸乙酯∶甲酸∶水 (14∶
1∶1)为展开剂,显色剂为 2% Fecl3 溶液。结果:甲醇作溶剂提取猪殃殃中绿原酸时所得 Rf值与绿原酸对照品 Rf值基本保持一
致,呈亮黄色斑点。可快速,准确地对猪殃殃中绿原酸进行鉴定。
关键词:猪殃殃;绿原酸;薄层色谱;薄层扫描
中图分类号:R9 文献标识码:A 文章编号:1001 - 9677(2012)24 - 0122 - 02
作者简介:刘频健 (1977 -) ,男,实验师,主要从事药学专业实验教学和科研工作。
Cleavers Chlorogenic Acid TLC Identification and Scanning
LIU Pin - jian,CHEN Jian,REN Ya - nan
(Jiujiang University School of Medicine,Jiangxi Jiujiang 332000,China)
Abstract:The cleavers of chlorogenic acid TLC identification methods were established. Cleavers herbs extracted by
the alcohol,chlorogenic acid as the reference,ethyl acetate∶formic acid∶water (14∶1∶1)as developing agent,the
chromogenic agent was 2% FeCl3 solution. The result showed that methanol as solvent extraction cleavers chlorogenic acid
Rf values obtained the same with chlorogenic acid reference substance Rf value,and had bright yellow spots. This method
used to identify the cleavers chlorogenic acid was quickly and accurately.
Key words:Cleavers;chlorogenic acid;TLC;TLC scanning
猪殃殃 [Galium aparine L. var tenerum (Gren. Et Godr. )
Reichb]又名锯锯草,活血草,拉拉藤,是茜草科拉拉藤属小
草本。据说猪食之有病,故名猪殃殃。猪殃殃广泛分布于我国
南北各省区,此外,在日本、朝鲜、巴基斯坦也有分布。多生
于荒地、菜园、路旁、田边及土壤肥沃处。于夏季花果期采
收,鲜用或除去泥沙晒干后用[1]。临床用于治疗肿瘤,痢疾,
乳腺炎,尿路感染,妇女闭经,创伤肿胀,胆病,骨病及脉
热,遗精[2 - 3]。据文献报道猪殃殃含有多种化学成分:挥发油
主要有十六烷酸,芳樟醇,6,10,14 -三甲基 - 2 -十五烷酮,
3 -乙基 - 1,4 - 己二烯,2 - 戊 - 呋喃,2 - 己烯醛,己醛,
(Z)-香叶醇及 α -松油醇,植醇等[4];苯丙素类化合物,其
中绿原酸为其主要活性成分[5 - 6]。为了更好地开发利用猪殃殃
的植物资源,本课题在参考大量文献基础上,将绿原酸作为指
标成分加以鉴别。为猪殃殃药材的鉴定,开发利用及质量标准
的制订提供相关依据。
1 仪器与材料
三用紫外分析仪,超声波清洗机,瑞士 Camag薄层扫描仪
(TLC Scanner 3) ,高速中药粉碎机,层析缸;绿原酸对照品
(中国药品生物制品检定所 110753 - 200413)所用试剂均为分
析纯。猪殃殃 (安徽源真堂中药饮片批号 201016)经九江学院
药学教研室高春华教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 以绿原酸为对照品建立薄层色谱
(1)对照品溶液的制备:取绿原酸对照品适量,加甲醇制
成每 1 mL含 0. 2 mg的溶液,作为对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备:称取药材粗粉 5 g,加甲醇 30 mL,
超声处理 50 min,冷后,滤过,滤液作为甲醇提取供试品溶液。
(3)薄层色谱鉴别:照薄层色谱法试验吸取对照品溶液及
供试品溶液各 10 μL,分别点于同一硅胶板上,以乙酸乙酯∶
甲酸∶水 (14∶1∶1)为展开剂,上行展开,取出,晾干,至
紫外光灯 (365 nm)下检视定位。结果,供试品色谱中,在与
对照品相同位置上,显相同斑点。再喷以 2% Fecl3 溶液,供试
品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同的亮黄色斑
点。上述实验重复 3 次,结果见表 1、图 1。
表 1 绿原酸、样品的薄层层析结果
成分 上升高度 / cm 展开剂 / cm Rf 平均值
绿原酸 10. 2 12. 8 0. 80 0. 82
10. 4 12. 6 0. 83
9. 6 11. 7 0. 82
样品 10. 2 12. 8 0. 80 0. 82
10. 4 12. 6 0. 83
9. 7 11. 7 0. 83
第 40 卷第 24 期 刘频健等:猪殃殃中绿原酸的薄层色谱鉴别及扫描 123
图 1 猪殃殃甲醇提取液及绿原酸标准品薄层图谱
2. 2 以绿原酸为对照品进行薄层扫描
2. 2. 1 扫描条件
双波长反射锯齿扫描,对绿原酸斑点在 200 ~ 600 nm 范围
内扫描,线性参数 SX = 3,灵敏度中度。
2. 2. 2 薄层扫描结果
由薄层扫描图谱,甲醇作溶剂提取猪殃殃中绿原酸时所得
Rf值与绿原酸对照品 Rf 值基本保持一致,因此表明猪殃殃化
学成分中含有苯丙素类化合物“绿原酸”,见图 2、图 3。
图 2 绿原酸标准品薄层扫描图
图 3 甲醇提取液薄层扫描图
3 讨 论
3. 1 绿原酸的不稳定性
绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸结合而成[咖啡酸(3,4 -二羟
基肉桂酸)的羧基与奎尼酸(1,3,4,5 -四羟基环己羧基) ]的 3
位羟基结合而成的酯类化合物,是植物体在有氧呼吸过程中经
莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。该成分易于氧化和水
解[7],中草药的提取工艺不同,有可能会造成绿原酸的提取不
完全,或引起不同程度的降解和损失,从而影响绿原酸的薄层
鉴别[8]。
3. 2 绿原酸的保存
绿原酸分子结构中含有不饱和双键,酯键及多元酚等不稳
定结构,在从植物的提取过程中,分子内酯基水解及不饱和双
键迁移而发生异构化,所以提取时不能高温,强光及长时间加
热[9]。绿原酸的供试品溶液放置于棕色瓶,冰箱 (2 ℃)保存
时最稳定[10]。
3. 3 展开剂的选择
猪殃殃的薄层色谱鉴别,曾以 2010 版一部金银花药材的
TLC展开条件对样品进行鉴别,发现 Rf值较低,斑点间分离度
较差,经反复试验,显示以乙酸乙酯∶甲酸∶水 (14∶1∶1)
为展开剂,展开后效果较好。
4 结 论
TLC不需特殊的仪器,操作简便,加之近年来高效吸附
剂、商品化的预制板、摄像装置的应用,极大的提高了分离效
果、检出灵敏度、准确性和重现性,使 TLC法已成为目前应用
最多的生药理化鉴别方法。该鉴别方法对应的样品色谱斑点清
晰,无拖尾、背景无干扰且重复性好。本试验用甲醇作溶剂提
取猪殃殃中绿原酸。以乙酸乙酯∶甲酸∶水 (14∶1∶1)为展
开剂,2% FeCl3 溶液为显色剂时对猪殃殃中绿原酸进行薄层色
谱鉴定,结果与绿原酸标准品在同一位置显示相同斑点,薄层
色谱扫描图谱基本一致,本方法可快速,准确地对猪殃殃中绿
原酸进行鉴定。
参考文献
[1] 李娟,陈春霞,皮慧芳,等. 猪殃殃的生药学研究[J]. 中国药业,
2009,18(20) :65 - 66.
[2] 国家中医药管理局编委会.中华本草·藏药卷[M]. 上海:上海科
学技术出版社,2001:309.
[3] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第 71 卷第二分
册) [M].北京:科学出版社,1999:233 - 237.
[4] 蔡小梅,王道平,杨娟. 猪殃殃挥发油化学成分的 GC - MS 分析
[J].天然产物研究与开发,2010,22(6) :1031 - 1035.
[5] 倪志诚. 西藏经济植物(第一版) [M]. 北京:北京科学技术出版
社,1990:618.
[6] Seabra RM,et al. PlantaMed Phytother,1993,26(1) :49.
[7] 陈少州,吕飞杰,台建祥. 葵粕中绿原酸的研究进展与应用前景
[J].食品与发酵工业,2002,28(11) :51 - 54.
[8] 易昌华,贺建华.紫外分光光度法测定中草药提取物中绿原酸的含
量[J]. 兽药与饲料添加剂,2004,9(01) :24 - 25.
[9] 黄芳华.绿原酸及其中药注射剂的安全性问题状况分析[J]. 中国
中药杂志,2008(22) :2716 - 2717.
[10] 邓良,袁华,俞宗浣,等.绿原酸的研究进展[J].化学与生物工程,
2005(7) :4 - 6.