全 文 ：　　失眠是临床常见病之一 ,严重影响人们的身心健康。定
宁片是由中药复方黄连解毒汤化裁而来 ,本实验研究了定宁
片的镇静催眠作用。
1　实验材料
1.1　药品
定宁片:由酸枣仁 、黄连 、黄柏组方 , 提取酸枣仁皂苷 、黄
连 、黄柏生物碱组成。
戊巴比妥钠:辽宁制药厂生产 , 批号:200624;
安定:南京制药厂生产 , 批号:201105。
1.2　动物
昆明种小白鼠 ,体重 18 ～ 22g , ♀♂各半 , 封闭型普通级
(Ⅰ级)。由湖北省医学科学院实验动物中心提供。
2　实验方法与结果
2.1　对小鼠自发活动的研究[ 1]
昆明种小白鼠 75 只 , ♀♂各半 , 随机分成 5 组:生理盐
水对照组 ,定宁对照组 , 定宁片小 、中 、大剂量组 , 每组 15 只。
给药前把小鼠投入动物活动箱(DJ系列 ,江苏苏州长桥净化
设备厂)中适应 5min , 记录 2min 的动物走动时间和前肢向
上抬举次数作为正常值。按表 1 所示剂量 ig 给药 ,连续 3d。
于末次给药后 60min 按同法测定小鼠走动时间以及双前肢
向上抬举次数。组间 t 检验比较。结果定宁片组动物自发
活动较生理盐水组明显减少(表 1)。
表 1　定宁片对小鼠自发活动的影响( x±s , sec , n=15)
组别 剂量(g·kg -1) 走动时间 抬举次数
生理盐水 20mL·kg-1 96.81±10.21 16.22±5.83
安定组 0.001 24.18±16.822) 0.94±0.812)
小剂量组 0.75 58.96±20.131) 2.04±1.472)
中剂量组 1.50 30.28±15.432) 1.95±1.122)
大剂量组 3.00 28.26±14.242) 1.61±1.012)
　　注:与生理盐水组比较:1)P<0.05 , 2)P<0.01。
2.2　对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响
昆明种小白鼠 75 只 , ♀♂各半 , 随机分成 5 组 ,每组 15
只。按表 2 所示剂量给药 , 连续 3d , 于末次给药后 30min , ip
戊巴比妥钠 40mg·kg-1 , 记录小鼠的睡眠时间(以翻正反射
消失为入睡时间 ,从翻正反射消失到恢复时间为睡眠时间)。
结果安宁片组小鼠睡眠时间较生理盐水组明显延长(表 2)。
2.3　对小鼠戊巴比妥钠阈下睡眠时间的影响
昆明种小白鼠 75 只 , ♀♂各半 , 随机分成 5 组 , 每组 15
只。按表 2 所示剂量给药 , 连续 3d ,于末次给药后 30min , ip
戊巴比妥钠 30mg·kg -1 , 记录入睡动物数(15min 内小鼠翻
正反射消失时间达 1min 的鼠数为入睡动物数), 计算入睡率
并进行卡方(χ2)检验。结果见表 2。
表 2　 定宁片对小鼠睡眠时间的影响( x±s)
组别 剂量(g·kg-1)
动物数
(只)
睡眠时间
(min)
入睡动物
数(只)
入睡率
(%)
生理盐水20 ml·kg -1 15 33.21±19.34 2 13.33
安定组 0.001 15 96.87±17.292) 12 80.003)
小剂量组 0.75 15 40.25±21.34 3 20.00
中剂量组 1.50 15 65.55±19.981) 7 46.671)
大剂量组 3.00 15 88.29±16.522) 11 73.333)
　　注:与生理盐水组比较:1)P<0.05 , 2)P<0.01 , 3)P<0.001。
3　分析与讨论
现代生活节奏加快 , 激烈的竞争以及就业 ,升学 ,工作压
力导致身心疾病患者连年增多。长期以来 , 失眠焦虑 , 心理
障碍困扰着越来越多的人们 , 相当一部分患者长期依赖巴比
妥类及苯二氮类药物如安定等才能入睡 , 尽管如此 , 仍出现
多梦 , 恶梦等睡眠障碍 , 但其毒副作用是显而易见的。长期
应用该类药物治疗 , 停药后可出现精神病及大脑的症状 , 常
见焦虑 , 恐惧 ,不安 , 活动加强 ,反应过度及失眠;也可出现精
神错乱及妄想狂精神病 , 烦躁不安 , 幻觉及惊厥。神经肌肉
性症状 , 常见无力及发抖 , 也有见肌肉挛缩。 植物神经症状
以无食欲 , 恶心及头痛为常见。有的药物有成瘾性[ 2] 。寻找
高效低毒的天然镇静催眠药物已经显得刻不容缓。
定宁片由酸枣仁 、黄连 、黄柏组方 , 方中酸枣仁定惊安
神 ,黄连 、黄柏清心泄火 , 该制剂有清心泄火 , 镇静安神之功
效。本研究发现 , 定宁片能抑制小鼠自发活动 , 对小鼠睡眠
时间的影响与戊巴比妥钠有协同作用 , 并且表现出一定的量
效关系 ,说明该制剂有明显的镇静催眠作用 , 适用于心火亢
盛 , 烦躁不安之睡眠障碍患者。
参考文献:
[ 1] 　李仪奎.中药药理实验方法学[ M ] .上海:上海科学技术出版
社 , 1991:329.
[ 2] 　王士凡 ,孙定人.药物不良反应[ M ] .北京:人民卫生出版社 ,
1998:354-363.
RP-HPLC测定复方溪黄草颗粒中栀子苷的含量
戴向东
(广西药品检验所 ,广西 南宁 530021)
收稿日期:2003-06-09
作者简介:戴向东(1968～ ),广西恭城人 ,主管药师,从事化学分析及药品质量标准研究 ,电话:0771-2611940。
关键词:复方溪黄草颗粒;栀子苷;RP-HPLC
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2003 年 12 月
第 25 卷　第 12期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Dec., 2003
Vol.25　No.12
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2003)12-1015-01
　　复方溪黄草颗粒由广西梧州神龙药业有限公司开发研
制 ,内含溪黄草 、栀子 、柴胡等 11 味中药 ,用于治疗湿热邪毒
所致乙型肝炎。方中臣药栀子的主要成分为栀子苷(genipo-
side)[ 1] , 《中国药典》 2000 版一部收载有 HPLC 法测定栀子
苷含量的方法[ 2] 。为了有效地控制药品质量 , 笔者将此法应
用到栀子的复方制剂中 , 排除其它成分和辅料的干扰 , 建立
了 RP-HPLC 法测定复方制剂中栀子苷含量的方法。
1　仪器与试药
美国Waters 600 型高效液相色谱仪 ,Waters 717 型自动
进样器 , Waters 2487 型紫外检测器 , Waters Millennium32 色
谱工作站。
乙腈为色谱纯 ,水为超纯水 , 其他试剂均为分析纯。
复方溪黄草颗粒:由广西梧州神龙药业有限公司提供
(批号:20010420、20011021 、20011022、20011023);栀子苷对
照品:由中国药品生物制品检定所提供 , 供含量测定用(批号
0749-200007)。
2　色谱条件
色谱柱:Luna C18(4.6mm ×250mm , 5μm), Phenomenex
公司生产;流动相:乙腈-水(15∶85);流速:1.0mL·min-1;柱
温:30°C;检测波长:238nm;进样量:20μL。
3　方法与结果
3.1　对照品溶液的制备:精密称取栀子苷对照品适量置量
瓶中 ,加流动相使溶解 , 制成 30μg·m L-1的溶液。
3.2　供试品溶液的制备:取供试品 , 研细 , 取约 5g , 精密称
定 ,置 50mL 量瓶中 ,加水适量 , 超声处理 20min ,放冷 , 加水
至刻度 ,摇匀 , 滤过。弃去初滤液 ,精密量取续滤液 10m L ,置
已处理好的 D101型大孔吸附树脂柱(内径 1.5cm , 长 10cm),
用水洗脱 ,至洗脱液无色 , 弃去水液 ,再用 50%乙醇 50mL洗
脱 ,弃去前 8 ～ 10m L洗脱液 , 收集其余洗脱液 , 蒸干。 残渣
用水饱和的正丁醇 50mL 分次溶解并转移至分液漏斗中 , 用
正丁醇饱和的氨试液提取 2 次 ,每次 5mL , 合并水液 ,正丁醇
液备用。 水液再用水饱和的正丁醇振摇提取 6 次 , 每次
10m L ,合并正丁醇提取液并与备用的正丁醇液合并 , 蒸干。
残渣加流动相转移至 10mL 量瓶中并加流动相至刻度 , 摇
匀 ,用微孔滤膜(0.45μm)滤过 ,取续滤液 , 作为供试品溶液。
3.3　阴性对照溶液的制备:取缺栀子的其它各味中药按处
方工艺制成阴性对照品 , 按 3.2 项下方法制成阴性对照溶
液。
3.4　色谱行为:分别精密吸取上述 3 种溶液各 20μL , 注入
色谱仪 , 在上述色谱条件下测定 ,结果供试品中栀子苷峰与
其它组分分离良好 , 与对照品栀子苷的保留时间(9.42min)
一致 , 阴性对照溶液在栀子苷出峰的时间 , 没有任何的杂质
峰。色谱图见图 1。
3.5 　线性关系考察:精密称取栀子苷对照品适量(约
20mg), 置 100mL 量瓶中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 ,精密
量取5 , 10 , 15 , 20 , 25mL , 分别置100m L量瓶中 ,加流动相至
图 1　HPLC图谱
A 对照品 B供试品 C阴性对照品
刻度 , 摇匀。精密吸取上述溶液各 20μL , 分别注入色谱仪 ,
测定峰面积值 , 以进样量为横坐标 , 峰面积值为纵坐标进行
线性回归 , 得回归方程为:
A =-1.0330×104+1.5033×106C , r=0.9999
结果表明:栀子苷浓度在 0.2024 ～ 1.0120μg 范围内时 ,
其峰面积与进样量之间线性关系良好。
3.6　精密度试验:精密吸取上述栀子苷对照品溶液(30μg·
mL-1)20μL ,反复进样 8 次 , 结果测定栀子苷峰峰面积值的
RSD 为 0.3%。
3.7　重复性试验:取同批样品(20011021)5 份 , 按 3.2 项下
方法制备供试品溶液 , 按上述色谱条件测定 , 平均含量为
0.2665mg·g -1 , RSD 值为 1.0%。
3.8　稳定性试验:取栀子苷对照品溶液 , 室温放置 , 分别于
0 , 2 , 4 , 6 , 8h 进样 1 次 , 依上法测定峰面积 , 结果表明在 8h
内峰面积值无明显变化 , RSD 为 0.98%(n =5)。
3.9　加样回收试验:取已知栀子苷含量的样品(0.2665mg·
g-1)25g , 研细 ,精密称取 6 份 , 每份 2.5g , 置 50mL 量瓶中 ,
分别精密加入栀子苷对照品水溶液(0.1225mg·m L-1)5 , 5 ,
5 , 10 , 10 , 10mL , 加水适量 ,按 3.2 项下方法操作 , 分别注入
色谱仪 , 在上述色谱条件下测定峰面积 , 计算回收率。结果
见表 1。
3.10　样品含量测定　分别精密吸取上述供试品溶液各
20μL , 注入色谱仪 ,在上述色谱条件下测定 ,结果见表 2。
4　讨论
4.1　本品方中含有 11 味药材 , 成分较为复杂 , 多含有萜类
化合物 、皂苷 、黄酮等成分 , 且剂型为颗粒剂 , 含有大量的糖
(约为药材稠膏量的 5 倍), 对色谱结果的干扰较大。故应用
大孔吸附树脂 , 用50 %乙醇洗脱 , 既可有效地去除糖的干
表 1　 加样回收率试验(n=6)
编号 加入量(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.6125 0.5933 96.87
2 0.6125 0.5850 95.51
3 0.6125 0.5878 95.97
4 1.2250 1.1801 96.33 96.30 0.6
5 1.2250 1.1889 97.05
6 1.2250 1.1768 96.07
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第 25 卷　第 12期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
Dec., 2003
Vol.25　No.12
表 2　 复方溪黄草颗粒中栀子苷含量(n=3)
批号 栀子苷含量(mg·g-1) 相对平均偏差(%)
20011021 0.2665 0.96
20011022 0.2696 1.07
20011023 0.2822 0.14
20010420 0.2516 0.55
扰 ,又可富集制剂中栀子苷成分 , 再经正丁醇提取 ,氨试液洗
涤以除去水溶性黄酮等杂质 ,则可达到纯化样品的目的。制
得样品溶液使被测成分栀子苷能得到很好分离 ,保留时间也
与对照品一致 , 阴性对照溶液亦无干扰(图 1)。
4.2　本文建立了复方溪黄草颗粒中栀子苷含量测定方法 ,
实验结果表明本法便捷 , 灵敏 、准确 , 重现性好 , 可以控制该
药品的质量。
参考文献:
[ 1] 　刘燕平 ,吕高荣 ,鲁静.栀子中环烯醚萜苷类成分的 HPLC 法
含量测定[ J] .中国中药杂志 , 1993 , 18(5):298.
[ 2] 　中华人民共和国药典(2000版)一部[ S] .北京:化学工业出版
社.
薄层扫描法测定千喜胶囊中脱水穿心莲内酯的含量
陈丽华 , 　欧阳胜 , 　毛友昌
(江西中医学院 ,江西 南昌 330006)
收稿日期:2002-10-21
作者简介:陈丽华(1972～ ),女 ,江西崇仁人 ,硕士 ,助理研究员.主要研究方向:中药制剂研究 ,电话:0791-7118826。
关键词:薄层色谱扫描法;千喜胶囊;脱水穿心莲内酯
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2003)12-1017-02
　　千喜胶囊由千里光和穿心莲中草药组方而成 ,功能清热
解毒 , 消炎止痛 ,止泻止痢[ 1] 。有关脱水穿心莲内酯含量测
定方法的文献报道有《中国药典》2000 版一部穿心莲药材及
穿心莲片的薄层扫描法含量测定方法[ 2] 、容量法[ 3] 、紫外分
光光度法[ 4] 、薄层层析-紫外分光光度法 、离子对高效液相色
谱法[ 5] 、薄层扫描法[ 6]等 , 本文采用薄层扫描法测定千喜胶
囊中所含脱水穿心莲内酯的量。现研究报道如下:
1　仪器与试药
1.1　仪器:CS-930 型双波长薄层扫描仪(日本岛津);Met-
tler AE240 十万分之一天平(瑞士梅特勒公司);939 型薄层
制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);超声波清洗器(北京
天鹏电子技术有限公司);微量进样器(上海安亭微量进样器
厂);EF-Ⅱ 型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);
TG328 型分析天平(上海天平仪器厂)。
1.2　试剂:批号 20010607 、20010612 、20010616 千喜胶囊由
江中药业科技开发公司提供;穿心莲对照药材(1082-9901)
中国药品生物制品检定所;脱水穿心莲内酯对照品(0854-
9601)中国药品生物制品检定所;硅胶 G(层析用)青岛海洋
化工厂;所用试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　薄层层析与扫描
吸取对照品溶液 4μL , 供试品溶液 、缺穿心莲阴性对照
液各 5μL , 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶
GF254薄层板上 ,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(20∶15∶2)为展开剂 ,
在28°C以下展开 , 取出 , 晾干。 在波长 200-370nm 扫描 , 可
见在 263nm 处有一吸收峰 , 370nm 处为光谱基线 ,故选择λs
为 263nm ,λR 为 370nm ,与文献一致。照薄层色谱法进行扫
描 , 结果显示千里光对脱水穿心莲内酯的测定没有干扰。
2.2　溶液的制备
2.2.1　供试品溶液的制备:取本品 10 粒内容物 , 精密称定 ,
研细 , 取 0.5g ,精密称定 , 精密加入甲醇 25mL , 称定重量 , 冷
浸 1h , 超声处理 30min ,放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失
的重量 , 摇匀 ,滤过 , 取续滤液作为供试品溶液。
2.2.2　对照品溶液制备:精密称定脱水穿心莲内酯对照品 ,
加甲醇制成每 1mL 含 1mg 的溶液 ,作为对照品溶液。
2.2.3　对照药材溶液制备:取穿心莲对照药材 0.5g , 加甲
醇 30mL ,超声处理 30min , 滤过 ,滤液浓缩至约 5mL ,作为对
照药材溶液。
2.2.4　缺穿心莲阴性对照溶液制备:取缺穿心莲样品 0.
1g ,加甲醇 25m L ,冷浸 1h ,超声处理 30min , 摇匀 ,滤过 , 取续
滤液为缺穿心莲阴性对照溶液。
吸取供试品溶液 , 对照药材溶液及缺穿心莲阴性对照液
各 5μL ,对照品溶液 3μL , 分别点于同一以羧甲基纤维素钠
为黏合剂的硅胶 GF254薄层板上 , 以氯仿-醋酸乙酯-甲醇(20
∶15∶2)为展开剂。在 28°C以下展开 , 取出 , 晾干 , 分别置紫
外光灯(254nm)下检视 ,供试品色谱中在与对照药材色谱和
对照品色谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑点 ,喷以 2%3 , 5-
二硝基苯甲酸乙醇溶液与 2mol·L-1氢氧化钾溶液等容的混
合液(临用前配制), 立即置日光下检视 ,供试品色谱中 ,在与
对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑
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Vol.25　No.12