全 文 ：第 42 卷第 24 期
2014 年 12 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 42 No. 24
Dec. 2014
高效液相法色谱法测定猪殃殃中绿原酸含量
陈 剑，刘频健，李洁琼
(九江学院基础医学院，江西 九江 332000)
摘 要:建立了猪殃殃中绿原酸含量的 HPLC测定方法。色谱柱为 Diamonsil C18 5 μm(250 mm ×4. 6 mm)色谱柱;流动相为
甲醇 － 0. 04%磷酸 (23∶77) ;检测波长为 324 nm;流速为 1 mL /min;进样量为 20 μL;柱温 25 ℃。经方法学考察，该方法线性
关系、精密度、重现性和稳定性好。可快速、准确用于猪殃殃中绿原酸的含量测定。
关键词:猪殃殃;绿原酸;高效液相色谱法
中图分类号:S571 文献标志码:A 文章编号:1001 － 9677(2014)024 － 0116 － 03
作者简介:陈剑 (1977 －) ，女，副教授，主要从事药学专业教学和科研工作。
Determination of Chlorogenic Acid in Cleaver by HPLC
CHEN Jian，LIU Pin － jian，LI Jie － qiong
(School of Medicine，Jiujiang University，Jiangxi Jiujiang 332000，China)
Abstract:The HPLC method for determination the content of chlorogenic acid in cleavers was established. The
column was Diamonsil C18 5 μm (250 mm ×4. 6 mm) ，the mobile phase was methanol － 0. 04% phosphoric acid (23∶
77) ，the detection wavelength was 324 nm，the flow rate was 1 mL /min，and the column temperature was 25 ℃. Through
the methodology study，it had the characteristics of the linear relation of the method，precision，reproducibility and
stability，which can be used identified Cleavers chlorogenic acid quickly and accurately.
Key words:Cleaver;chlorogenic acid;HPLC
猪殃殃［Galium aparine L. var tenerum (Gren. Et Godr. )
Ｒebb.］，茜草科拉拉藤属小草本，多生于荒地、菜园、路旁、
田边及土壤肥沃处。于夏季花果期采收，鲜用或除去泥沙晒干
后用［1］。主要含苯丙素类化合物，药材中绿原酸为其主要活性
成分之一［2］。药理显示绿原酸具有良好的抗菌、抗炎、抗病
毒、抗氧化剂及自由基等作用［3］。民间用于治疗感冒，牙龈出
血，急、慢性阑尾炎，痈疖肿毒，跌打损伤等［4］。为了更好地
开发利用猪殃殃的植物资源，本试验对其有效成分的提取及含
量测定进行进一步的探索与研究，建立了高效液相测定猪殃殃
中绿原酸含量的方法。
1 材料与方法
1. 1 材 料
高效液相色谱仪，安捷伦 Agilent LC1200;TU － 1901 双光
束紫外可见分光光度计，北京普析通用。
磷酸 (AＲ，0801291)，汕头市西陇化工有限公司;绿原酸
对照品(110753 － 200413)，中国药品生物制品检定所;甲醇;
超纯水。
1. 2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为色谱柱 Agilent C18 (5 μm，150 mm × 4. 6 mm) ;
流动相为甲醇:0. 04%磷酸 (23∶77) ，检测波长 329 nm，分
析时间 20 min，柱温 30 ℃。理论塔板数按绿原酸计算应不低
于3 000。
1. 3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品 10 mg 置于 10 mL 容量瓶中，用甲
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为 1 mg /mL的母液。精
密量取 0. 2 mL、0. 5 mL、1 mL、1. 25 mL、2. 5 mL 分别置于五
个 25 mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标 1、
2、3、4、5 对照品溶液，浓度分别为 8 μg /mL、20 μg /mL、
40 μg /mL、50 μg /mL、80 μg /mL，用微孔滤膜(0. 45 μm)滤
过，取滤液，即得。
1. 4 供试品溶液的制备
取猪殃殃粗粉 50 g 置于 1 000 mL 圆底烧瓶，加 75%甲醇
300 mL于水浴上微沸加热 2 h，提取后稍冷却，抽滤。在药渣
中再加 200 mL 75%甲醇溶剂，同法操作两次。合并三次的提
取液，于水浴上加热浓缩，直至总浸膏量约为 20 mL。将所得
的总浸膏分别用甲醇溶解，用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤，精密吸
取 5 mL供试品溶液置于 100 mL容量瓶中，甲醇定容，即得。
1. 5 测定波长的选择
取浓度为 40 μg /mL 的绿原酸标准溶液，以甲醇作空白，
紫外分光光度计在 200 ～ 400 nm 波长范围内扫描，绿原酸在
201、218、329. 40 nm处分别有 3 个波峰。故选择最大吸收波
长为 329. 40 nm。
2 结果与分析
第 42 卷第 24 期 陈剑，等:高效液相法色谱法测定猪殃殃中绿原酸含量 117
2. 1 对照品液相色谱图
取对照品溶液 1，绿原酸浓度 8 μg /mL 进样 20 μL，按上
述色谱条件进行 HPLC分析(见图 1)。
图 1 对照品溶液 1 的高效液相色谱图
2. 2 供试品液相色谱图
将样品溶液分别经 0. 45 μm 滤膜过滤，进样 20 μL，按上
述色谱条件进行 HPLC 分析，保留时间、峰面积、浓度(见表
1)，液相图谱(见图 2)。
表 1 样品溶液高效液相色谱法测得结果
保留
时间 /min
峰面积
浓度 /
(μg /mL)
平均值 /
(μg /mL)
ＲSD /%
7. 120 7763048 15. 6764
7. 087 7784055 15. 7188
7. 111 7690174 15. 5292
15. 6415 0. 6362
图 2 样品溶液 1 高效液相图谱
由表 1 可得绿原酸浓度的平均值为 15. 641 5，ＲSD =
0. 6362%，计算可知原液中绿原酸含量为 6. 256 6 mg，即每 1 g
猪殃殃药材中含有 0. 125 mg绿原酸。
2. 3 线性关系的考察
分别吸取各绿原酸标准品溶液约 3 mL，过 0. 45 μm 滤膜，
每次进样前均先用甲醇清洗，再用待进溶液润洗 3 次，各溶液
均进样 20 μL。按上述色谱条件进行 HPLC 分析，以对照品浓
度为横坐标，绿原酸标准溶液的峰面积为纵坐标，绘制标准曲
线，计算回归方程。测得各标准品的峰面积(见表 2)，标准曲
线及线性方程(见图 3)。
表 2 高效液相色谱法标准溶液浓度
标准溶液 浓度 /(μg /mL) 峰面积 Ｒ2
1 8 3196795
2 20 8521161
3 40 18680608
4 50 23723742
5 100 50827648
0. 9952
图 3 高效液相色谱法标准曲线
2. 4 精密度试验
分别精密吸取质量浓度为 40 μg /mL 的绿原酸标准品溶液
20 μL，按上述色谱条件进行 HPLC分析，重复进样 3 次，测得
峰面积见表 3。样品中绿原酸峰面积的 ＲSD 为 0. 0032%，可知
仪器精密度很好。
表 3 准溶液测得峰面积
保留时间 /min 峰面积 半峰宽 ＲSD /%
6. 878 18680608 15. 8
6. 897 18680693 15. 9
6. 875 18681671 16. 1
0. 0032
2. 5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液 20 μL，按上述色谱条件，分别于制
备后 0、1、2、3、4 h 测定，ＲSD 为 0. 29%，结果表明样品在
4 h 内稳定。
2. 6 重复性试验
精密吸取同一容量瓶中供试品溶液 20 μL 3份，按含量测定
方法测定分别测定含量，见表 4。结果表明样品测定重现性好。
表 4 样品溶液高效液相色谱法测得结果
供试品
保留
时间 /min
峰面积
浓度 /
(μg /mL)
平均值 /
(μg /mL)
ＲSD /%
1 7. 087 7784055 15. 7188
2 7. 111 7690174 15. 5292
3 7. 120 7763048 15. 6764
15. 6415 0. 6362
3 结果与分析
(1)高效液相色谱法精密度试验测得各溶液 ＲSD 为
0. 0032%，可知仪器精密度良好，测得供试品溶液中绿原酸浓
度的平均值为 15. 641 5，ＲSD = 0. 6362%，计算可知原液中绿
原酸含量为 6. 256 6 mg，即每 1 g 猪殃殃药材中含有 0. 125 mg
绿原酸。
(2)绿原酸分子结构中含有酯键，不饱和双键及多元酚
3 个不稳定结构，在从植物的提取过程中，往往通过水解和分
子内酯基迁移而发生异构化，故提取时不能高温，强光及长时
间加热［5］。绿原酸的供试品溶液放置于棕色瓶，冰箱(2 ℃)保
存时最稳定［6］。
(3)绿原酸易于氧化和水解，中草药的提取工艺不同，有
可能会造成绿原酸的提取不完全，或引起不同程度的降解和损
失，从而影响绿原酸含量测定。
(下转第 161 页)
第 42 卷第 24 期 廖明佳，等:项目化教学在高职《精细化工生产技术》课程中的实践 161
实训的过程中巡回指导，同时按考核标准进行评分。在方案的
具体实施过程中，使学生真正地从理论走到实践，充分体现项
目化教学的优势。
3. 7 工作评价
生产小组的每一同学应在本组制订的方案实施后写出详细
的实训报告，包括方案设计、参考文献、实验安全、卫生等基
本素养要求、设备操作记录、原始数据记录、数据分析与处理
过程记录、产品评价报告、团队协作能力、临场问题、经验总
结等，这些都要进行认真的归纳总结。对实训过程及结果采用
组内自评、各组间互评及教师评价三种评价手段相结合，组内
自评自由开展，组间评价和教师评价集中进行。每位同学通过
工作评价发现在任务实施过程中出现的各种问题，对问题进行
分析、讨论，最后形成解决方案，为实训报告完成总结部分，
这是基本工作经验积累的关键。教师根据学生在整个项目开展
中的表现进行全面的考核。
4 项目化课程教学考核
良好的课程考核体系具有激励学生、促进教学的功能，是
高职院校不断提高教学质量的保证。而项目化教学课程的特色
就在于教学作三位一体，所以考核指标不能像传统教育一样，
以理论考试的优劣来作为最终的考核指标。在课程教学效果考
核上，以职业能力和职业素养的形成和提升为主要衡量指标，
以知识的积累为辅［6］。采用技能考核与素质评价相结合、日常
考核与期终考核相结合、理论考试与实训考核相结合的“三结
合考核方式”，在考核方式真正实现“工学结合”。在具体实施
过程中，每个项目的工作评价是整个课程考核的主要依据，而
最能体现学生职业素养水平的实训项目评价是考评的核心，其
包括了学生的日常表现、实作技能水平、职业素养水平等。学
生的课程总成绩是由每一个项目的评价结果汇总加权而成，而
传统的期末理论考试成绩占总成绩的 40%。具体考核计算公式
如下所示:
学生课程总成绩 =
∑n1 项目评价成绩
n × 60% +课程期末考试成绩 × 40%
式中:n———课程的项目数
具体的考核实施手段包括采用教师评价、学生自我评价、
学生互评、现场答辩、现场操作评价、提交实训报告、闭卷或
开卷考试等。
5 结 语
《精细化工生产技术》项目化教学改革是对传统课程理念、
课程体系、教学内容以及教学方法等的深刻变革［7］，其体现了
国家职业教育面向社会，着力培养学生的职业道德、职业技能
和就业创业能力，以服务为宗旨，以就业为导向，实行工学结
合的人才培养模式的发展要求。在《精细化工生产技术》项目
化教学在实施过程中，增强了学生的自我学习能力，加强了学
生与教师间的沟通，引入生产模拟实训，实现了课程教学作三
位一体的教学培养模式［8］。优化的教学考核体系更能使学生的
职业素养提升，以满足经济社会对高素质劳动者和技能型人才
的需要。
项目化教学的过程中还有诸多问题亟待解决，比如教师普
遍实际生产经验欠缺、项目化加重了教师的备课负担、部分学
生对教学方式的改变不适应、学校生产实训硬件难以满足项目
的模拟要求等，这些问题有待于在项目化教学实践中不断探索
和完善，从而更好地促进《精细化工生产技术》项目化教学改
革走向成功。
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