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4.3 加强部门协调配合，共同推动工作
各地人力资源社会保障部门要在党委政府领导下，与当地
设有见习基地的单位密切配合，形成合力，共同推动工作，要发
挥好对高校毕业生就业见习工作的牵头作用，做好见习的指导
和协调工作，做好离校未就业高校毕业生登记、见习信息发布、
见习单位的日常管理工作以及见习过程的跟踪管理和服务；协
助相关部门做好就业见习政策宣传工作，推荐各领域且具备一
定条件的单位作为见习基地，分工协作，齐抓共管，形成人力资
源社会保障部门牵头、有关部门协助配合的见习工作机制。
4.4 加强宣传，营造促进见习的良好氛围
社会各界都在高度关注就业见习工作，但截至目前，还有
很多的毕业生和家长仍不了解见习是怎么回事，有的单位也不
知道如何成为就业见习基地。因此，要加强宣传，让所有的高校
毕业生和即将毕业的大学生及其家长都切实了解见习的真正
意义，让毕业生和见习单位及时了解和参与到见习工作中来。
在各级政府、见习医院及有关部门的共同努力下，医学毕
业生见习工作目前正在稳步推进，见习规模在逐年扩大，参加
见习的人员数量在大幅度增加。虽然很多管理机制和服务模式
仍在不断创新和探索中，但此项活动已成为政府促进离校未就
业医学毕业生就业的一项重要措施，成为医院储备人才的重要
途径，成为离校医学毕业生提高就业能力的重要阶梯。此项活
动的开展已取得明显成效，为稳定社会和促进高校毕业生就业
发挥了积极作用。
参考文献：
[1]安波.大学生失业问题解决制度[J].山西科技，2011（3）：8.
[2]陈振辉，袁翠婵.“预就业”——就业教育的新模式[J].邵阳学院学报：
社会科学版，2008，7（4）：160.蒉
实验与实习 卫生职业教育
黄连上清片由黄连、黄芩、栀子、大黄、连翘、薄荷、旋覆花、
荆芥穗、防风、石膏、桔梗、黄柏、蔓荆子（炒）、白芷、甘草、川芎
和菊花17味药材组成[1-2]，主要用于治疗头晕目眩、牙齿疼痛、
口腔溃疡、咽喉疼痛、耳痛耳鸣、大便干燥、小便赤短等。单独测
定栀子苷、黄芩苷、大黄素、盐酸小檗碱含量方法的文献报道较
多[3-8]，但同时测定栀子苷、黄芩苷、大黄素、盐酸小檗碱含量的
未见文献报道。本实验采用双波长RP-HPLC 同时测定栀子苷、
黄芩苷、大黄素、盐酸小檗碱的含量，方法简便，分离度好，结果
准确，能够为黄连上清片的产品质量分析提供理论依据。
1 仪器与试剂
Agilent 1200 型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Hibor
C18键合硅胶色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；DL-720D 数控
超声波清洗器（上海文信仪器有限公司）；DFT-200高速中药粉
碎机（温岭市林大机械有限公司）；AL204-2C型电子分析天平（瑞
士梅特勒公司）。
乙腈（色谱纯，天津市光复精细化工研究所），甲醇（分析纯,
天津市光复精细化工研究所），磷酸（分析纯，烟台市双双化工
有限公司），水为重蒸馏水。栀子苷对照品（批号：110749-200410，
供含量测定），黄芩苷对照品（批号：110715-201016，供含量测
定），盐酸小檗碱对照品（批号：110731-200609，供含量测定），
双波长RP-HPLC法同时测定黄连上清片中
栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量
彭 程，师永清
（西北民族大学，甘肃 兰州 730030）
摘 要：目的 形成同时测定黄连上清片中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱、大黄素含量的方法。 方法 在以下条件下采用双
波长 RP-HPLC法测定黄连上清片中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量：色谱柱为 HiborC18（4.6 mm×150 mm，
5 μm），流动相为乙腈-0.2%的磷酸水溶液，梯度洗脱,流速0.9 mL·min-1；检测波长分别为 238 nm（栀子苷）和 275 nm（大黄
素、盐酸小檗碱、黄芩苷）；柱温为 25 ℃。结果 栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素线性范围分别为 0.031 1～0.622 2 μg（r=
0.999 65），0.080 0～1.600 0 μg（r=0.999 5），0.115 6～1.155 6 μg（r=0.999 45），0.020 0～0.400 0 μg（r=0.998 1）；平均加样回收率
分别为 101.5%、101.0%、104.5%、101.3%；RSD 分别为 2.1%、3.1%、1.6%、2.6%。结论 该方法操作方便，结果准确，精密度高，
重现性好，适用于同时测定黄连上清片中栀子苷、黄芩苷、大黄素和盐酸小檗碱的含量。
关键词：RP-HPLC；黄连上清片；含量测定
中图分类号：G424.31 文献标识码：B 文章编号：1671-1246（2015）18-0109-03
Vol．33 2015 No．18
109- -
大黄素对照品（批号：110756-200110，供含量测定），以上均购
自中国药品生物制品检定所。黄连上清片为市售品，批号分别
为121007、20120717、1207150。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Hibor C18（4.6mm×150 mm，5μm）；流动相为乙
腈（B）-0.2%磷酸水溶液（A）；梯度洗脱程序为0.00~10.00分钟，
18%A→30%A；10.00~12.00 分钟，30%A→20%A；12.00~14.00
分 钟 ，20% A→16% A；14.00~20.00 分 钟 ，16% A→28% A；
20.00~30.00 分钟，28%A→65%A；30.00~40.00 分钟，65%A→
80%A。检测波长分别为238 nm（栀子苷），275 nm（盐酸小檗碱、
黄芩苷、大黄素）；进样量：20μL；柱温：25℃。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取减压干燥至恒重的栀子苷、黄芩
苷、大黄素、盐酸小檗碱对照品3.5 mg、9.0 mg、4.5 mg、2.0 mg，
分别置于体积为 25 mL 的容量瓶中，用甲醇超声溶解（功率
240 W，频率 45 Hz），放冷至室温，定容至 25 mL，得栀子苷
0.14 mg·L-1、黄芩苷0.36 mg·L-1、大黄素0.18 mg·L-1、盐酸小檗
碱0.104mg·L-1对照品储备液。分别精密吸取上述各对照品储备
液，按体积比2∶2∶1∶1摇晃均匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，随后
可得对照品含量分别为栀子苷0.0467mg·L-1、黄芩苷0.1200mg·L-1、
大黄素0.060 0 mg·L-1、盐酸小檗碱0.034 67 mg·L-1的对照品
混合溶液。
2.2.2 样品溶液 取黄连上清片20片，除去糖衣，置研钵中研
碎，取样品粉末1.0 g，精确称量后放于100 mL 容量瓶中，用
70%甲醇水溶液45 mL超声（功率240 W，频率45 Hz）提取两
次，将其冷却至室温，用70%甲醇水溶液定容、摇匀、静置，取上
清液，用0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照样品溶液 依照黄连上清片处方组成比例与制
备方法，按制备样品溶液的方法分别配制缺栀子、缺黄芩、缺大
黄、缺黄连和黄柏的阴性对照品溶液。
2.3 专属性实验
取混合对照品溶液、样品溶液及各缺相应成分的阴性对照
样品溶液，按2.1项下的色谱条件对进样进行分析，在所得到的
色谱图中，有与混合对照品溶液栀子苷、大黄素、黄芩苷及盐酸
小檗碱保留时间相同的特征峰，保留时间分别为6.6分钟、16.5
分钟、24.9分钟和36.4分钟，而阴性对照样品溶液中无此特征
峰，表明阴性样品对所测组分无干扰；理论板数分别为26 600、
16 200、1 9 500和1 083 300；分离度分别为2.95和3.01，5.70
和3.00，2.09和6.01，2.33和2.28；拖尾因子分别为0.97、1.05、
0.96和1.02，结果见图1~2。
2.4 标准曲线
精密量取对照品混合溶液1μL、3μL、5μL、7μL、10μL、
12μL、15μL、20μL，在2.1项下的色谱条件进行进样分析，以
进样量X（μg）为横坐标、峰面积Y 为纵坐标，进行线性回归分
析，结果栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素回归方程分别为
Y=1223.3X+12.429（r=0.99965），Y=3005.3X-39.638（r=0.9995），
Y=1880.2X+21.985（r=0.99945）和Y=3055.2X+515.84（r=0.998 1）；
线性范围分别为 0.031 1~0.622 2μg，0.080 0~1.600 0μg，
0.115 6~1.155 6μg，0.020 0~0.400 0μg。
2.5 精密度实验
取对照品混合溶液，按2.1项下色谱条件，自动重复进样5
次，进样量5μL，结果栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素峰
面积RSD分别为1.60%、1.09%、1.89%、1.58%，表明仪器精密
度良好。
2.6 重复性实验
精密称取同一批号黄连上清片（批号：121007）样品6 份，
按2.2.2项下方法，分别制备样品溶液，按2.1项下色谱条件，分
别进样分析，进样量20μL，记录色谱图，计算栀子苷、黄芩苷、
盐酸小檗碱和大黄素的平均含量，结果栀子苷、黄芩苷、盐酸小
檗碱和大黄素平均含量分别为 1.28 mg·g-1、0.34mg·g-1、
0.62mg·g-1、0.25mg·g-1；RSD分别为 1.89%、1.05%、1.94%、
1.98%，表明重复性良好。
2.7 稳定性实验
取配制好的同一批号黄连上清片（批号：121007）样品溶液，
室温下放置，按2.1项下色谱条件，分别于配制后0、2、4、8、12
小时各进样1次，进样量20μL，结果栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗
碱和大黄素峰面积 RSD 分别为 1.93%、1.45%、1.89%、1.92%，
表明样品溶液在12小时内基本稳定。
图 2 高效液相色谱图 2
黄芩苷
大黄素
黄芩苷
大黄素
时间（min） 缺黄连和黄柏的阴性样品在
275nm处的色谱图
时间（min）缺黄芩的阴性样品在275nm处的色谱图
盐酸小檗碱
黄芩苷
缺大黄的阴性样品在275nm处的色谱图
时间（min）
时间（min）混合对照品在275nm处的色谱图 样品在275nm处的色谱图时间（min）
盐酸小檗碱 大黄素
黄芩苷
大黄素
盐酸小檗碱
盐酸小檗碱
图 1 高效液相色谱图 1
栀子苷
时间（min）混合对照品在238nm处的色谱图 时间（min）样品在238nm处的色谱图
缺栀子的阴性样品在238 nm处的色谱图
时间（min）
110- -
2.8 加样回收实验
取研细的同一批号黄连上清片（批号：121007）6 份，每份约
0.25 g，精密称定，研细，定量转移至50 mL量瓶中，分别精密
加入栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素对照品储备溶液各
2.50 mL、0.25 mL、1.50 mL和0.35 mL，按2.2.2项下方法制备样
品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进样分析，进样量20μL，栀
子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素平均回收率分别为101.5%、
101.0%、104.5%、101.3%；RSD 分别为2.1%、3.1%、1.6%和2.6%，
结果见表1。
2.9 含量测定
分别取3批不同批号黄连上清片样品，每批样品各3份，
按2.2.2项下方法制备样品溶液，按2.1项下色谱条件，分别进
样分析，进样量20μL，记录峰面积，分别计算样品中栀子苷、黄
芩苷、盐酸小檗碱和大黄素的含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择
实验中分别比较了乙腈、水等不同的流动相系统，并加入
磷酸为改性剂。结果发现，以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相，
采用梯度洗脱进行分离，各成分峰形较好，分离度高。
3.2 检测波长的选择
实验中根据二极管阵列检测器（PAD）上得到的紫外吸收光
谱图，选择各被测成分的最大吸收波长，并同时辅助进行成分
定性。238 nm处栀子苷有最大吸收，275 nm处大黄素、盐酸小
檗碱、黄芩苷有最大吸收。本实验采用双波长法，分别选择4种
成分各自最大吸收波长作为检测波长。
3.3 提取方法的选择
实验中比较了60%、70%、80%、90%和100%的甲醇溶液作
为溶剂进行超声提取，结果用70%的甲醇水溶液为溶剂，提取
效果较好；以70%甲醇为提取溶剂，比较了回流提取法和超声
提取法，超声提取法效率较高且提取时间短，超声提取法一般
30 分钟即可完成。本实验选择以70%甲醇为溶剂，超声提取
30 分钟的方法。
4 结语
以栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗碱和大黄素为定量监控指标，
可有效地控制黄连上清片产品的质量。本实验采用双波长
RP-HPLC法同时测定黄连上清片中栀子苷、黄芩苷、盐酸小檗
碱和大黄素含量，操作方便，结果准确，精密度高，重现性好，为
更好地控制黄连上清片产品质量提供了科学依据。
参考文献：
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杂志，2005，12（1）：90-92.
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学，2002，14（3）:7-8.
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[4]李学哲，朴惠顺. 小檗碱的提取工艺及药理作用研究进展[J].延边大
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[6]Xu X M，Zhang X P，Yao D D，et al.Determination of scutellarin brevis－
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2009，26（7）：596-598.
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Shangqing pills [J]. Chin J Mod ApplPharm，2009，26（4）：322-326.
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[J]. Chin J Mod Appl Pharm，2009，26（3）：237-240.蒉
名称
表 1 加样回收实验（n=6）
栀子苷
黄芩苷
盐酸小檗碱
大黄素
加入量
（mg）
0.350
0.350
0.350
0.350
0.350
0.350
0.090
0.090
0.090
0.090
0.090
0.090
0.156
0.156
0.156
0.156
0.156
0.156
0.063
0.063
0.063
0.063
0.063
0.063
称样量
（g）
.251 2
.258 9
.252 2
.250 3
.249 6
.250 8
.251 2
.258 9
.252 2
.250 3
.249 6
.250 8
0.251 2
0.258 9
0.252 2
0.250 3
0.249 6
0.250 8
0.251 2
0.258 9
0.252 2
0.250 3
0.249 6
0.250 8
样品中含量
（mg）
0.322
0.331
0.323
0.320
0.319
0.321
0.085
0.088
0.086
0.085
0.085
0.085
0.156
0.161
0.156
0.155
0.155
0.155
0.063
0.065
0.063
0.063
0.062
0.063
0.678
0.672
0.682
0.676
0.679
0.682
0.172
0.181
0.178
0.178
0.173
0.178
0.321
0.327
0.318
0.319
0.316
0.315
0.128
0.126
0.128
0.125
0.126
0.128
加样后测
得量（mg）
101.8
97.3
102.6
101.6
102.7
103.1
96.2
103.3
102.5
103.2
97.9
103.0
105.9
106.7
103.6
105.0
103.4
102.2
103.5
97.3
103.1
99.1
101.0
103.7
回收率（%）
平均回收
率（%）
101.5
101.0
104.5
101.3
RSD（%）
2.1
3.1
1.6
2.6
表 2 样品含量测定结果（n=3）
样品批号
1207150
20120717
121007
栀子苷
含量（mg·g-1） RSD（%）
1.44
1.45
1.28
0.35
0.36
0.33
黄芩苷
含量（mg·g-1）RSD（%）
0.92
1.52
0.34
0.74
0.72
0.71
盐酸小檗碱
含量（mg·g-1）RSD（%）
1.53
1.58
0.62
1.63
0.62
1.61
大黄素
含量（mg·g-1）RSD（%）
0.33
0.42
0.25
1.84
1.83
0.98
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