全 文 ：ＨＰＬＣ法测定不同产地及不同采收时间
大花紫薇叶中鞣花酸含量
王 燕
（福建卫生职业技术学院，福建 福州３５０１０１）
摘 要：目的：采用高效液相色谱法测定不同产地及不同采收期大花紫薇叶中鞣花酸的含量。方法：采
用Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ－Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色谱柱，柱温２５℃，以甲醇－０．１％磷酸水溶液为流动相，梯度
洗脱，流速０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２５４ｎｍ。结果：鞣花酸浓度在２．６６～６６．４５μｇ／ｍＬ范围内与峰面积
呈良好线性关系，ｒ＝０．９９９８。平均回收率为１０３．７％（ＲＳＤ＝０．９％，ｎ＝６）。不同产地的大花紫薇叶中，
鞣花酸以广东深圳采收的含量最高，不同采收时间的福建卫生职业技术学院大花紫薇叶中鞣花酸含量
在始果期８月下旬达到最高。结论：本方法操作简单、快速、重复性好，可用于测定大花紫薇叶中鞣花酸
的含量。
关键词：大花紫薇；鞣花酸；ＨＰＬＣ
中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）１１－００２５－０２
收稿日期：２０１４－０３－０１
基金项目：福建省教育厅资助科技项目（ＪＢ１２３０３）；福建卫生职业技术学院院级科研课题（２０１２－２－０３）
作者简介：王燕（１９８６－），女，福建卫生职业技术学院助教，研究方向为中药资源及品质评价。
大花紫薇Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ ｓｐｅｃｉｏｓａ （Ｌｉｎｎ．）Ｐｅｒｓ为千屈
菜科紫薇属植物，又名大叶紫薇、大果紫薇，落叶高大乔木，
广泛分布于我国福建、广东、广西等地区［１］。在东南亚国
家，大花紫薇作为传统民间药物用以治疗糖尿病和肾病［２］，
现代研究表明其降血糖的主要活性成分为鞣质类［３］和鞣花
酸类化合物［４］。鞣花酸是没食子酸的二聚衍生物，具有抗
癌、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用［５］。大花紫薇在我国资源
丰富，近几年国内学者对其进行了化学成分方面的研究［６］，
但关于其质量控制尚未见相关文献报道。因此，本文采用
ＨＰＬＣ法，测定了不同产地及不同采收期大花紫薇叶中鞣
花酸的含量，以期为控制大花紫薇叶的内在质量及进一步
开发利用提供科学依据。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器
ＬＣ－２０ＡＢ型高效液相色谱仪（日本岛津）；Ｅｌｍａｓｏｎｉｃ
Ｓ１５０型超声波清洗仪（德国Ｅｌｍａ）；ＰＬ ２０３型电子天平（瑞
士 ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯＬＥＤＯ）；Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ－Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ
×４．６ｍｍ，５μｍ）。
１．２ 药品与试剂
甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。对
照品鞣花酸购于美国Ｓｉｇｍａ公司，其纯度大于９８％。大花
紫薇叶采自不同产地，不同采收期的大花紫薇叶采收自福
建卫生职业技术学院，经福建农林大学园艺学院陈清西教
授鉴定为千屈菜科紫薇属大花紫薇（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ ｓｐｅｃｉｏｓａ
Ｌ．）的叶，４０℃烘干，粉碎后过三号筛，干燥保存，备用。
２ 方法
２．１ 色谱条件
色谱柱采用Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＸＢ－Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，
５μｍ）。流动相以甲醇－０．１％磷酸梯度洗脱：０～１０ｍｉｎ，２０％
甲醇；１０～１５ｍｉｎ，甲醇从４０％～６０％；１５～３０ｍｉｎ，６０％甲
醇。流速０．８ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２５４ｎｍ，柱温２５℃，进样
量１０μＬ。对照品和大花紫薇叶样品（批号２０１３０８２００２）色
谱见图１。
２．２ 对照品溶液制备
精密称取鞣花酸对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成
浓度约为０．１ｍｇ·ｍＬ－１的对照品储备液。精密量取５ｍＬ，
置于５０ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
２．３ 供试品溶液制备
精密称取大花紫薇叶粉末（过三号筛）０．１ｇ，精密加入
甲醇１００ｍＬ，称定重量，超声提取３０ｍｉｎ（１００Ｗ，４０ｋＨｚ），温
度４０℃。放冷，以甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液过０．４５μｍ微孔滤膜，即得大花紫薇供试品溶液。
２．４ 线性关系考察
分别精密量取对照品储备液０．２、０．２５、１．０、１．５、２．０、４．
０、５．０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进
样１０μＬ，按“２．１”项下色谱条件测定。以对照品浓度Ｘ（μｇ／
ｍＬ）为横坐标，测得的峰面积Ｙ为纵坐标绘制标准曲线，得
回归方程：Ｙ＝６６７６７Ｘ＋１５４９２，ｒ＝０．９９９８。结果表明，鞣花
—５２—
酸在２．６６～６６．４５μｇ／ｍＬ范围内具有良好线性关系。
图 １ 鞣花酸对照品色谱（Ａ）、大花紫薇叶样品色谱（Ｂ）
２．５ 精密度试验
取对照品溶液，按“２．１”项下色谱条件连续进样６次，
测定鞣花酸的峰面积。结果峰面积ＲＳＤ为０．７％，表明该
实验精密度良好。
２．６ 重复性试验
取同一批大花紫薇叶的粉末（批号２０１３０８２００２）６份，
按“２．３”项下方法分别制备，按“２．１”项色谱条件，测定鞣花
酸的峰面积，计算鞣花酸含量，结果样品中鞣花酸的平均含
量为２．０１％（ＲＳＤ＝１．３％，ｎ＝６），表明该实验重复性良好。
２．７ 稳定性试验
取供试品溶液分别于制备后０、２、４、６、８、１０、１２、２４ｈ进
样，记录鞣花酸的峰面积，结果其峰面积ＲＳＤ为０．３％，表
明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．８ 回收率试验
精密称取已测定含量的样品（批号２０１３０８２００２）共６
份，分别精确加入一定量的鞣花酸对照品，混匀后，按“２．３”
项下方法制备样品溶液，按“２．１”项下的色谱条件进行测
定，计算平均回收率，结果见表１。
表１ 鞣花酸的回收率试验 （ｎ＝６）
编号
样品量
（ｍｇ）
样品中鞣
花酸含量
（ｍｇ）
加入量
（ｍｇ）
测得量
（ｍｇ）
回收率
（％）
平均
回收率
（％）
ＲＳＤ
（％）
１ ５０．８７ １．０２ ０．９３０ ３ １．９８９ ３ １０３．９３
２ ５０．１０ １．０１ ０．９３０ ３ １．９７９ ２ １０４．５０
３ ５０．４６ １．０１ ０．９３０ ３ １．９８１ ４ １０３．９６
１０３．７３ ０．９
４ ５０．５８ １．０２ ０．９３０ ３ １．９７６ ９ １０３．２２
５ ５０．６３ １．０２ ０．９３０ ３ １．９９１ ０ １０４．６３
６ ５０．８９ １．０２ ０．９３０ ３ １．９７３ ２ １０２．１５
２．９ 样品的含量测定
分别取不同产地和不同采收期大花紫薇叶各３份，按
“２．３”项下方法制备供试品溶液。按“２．１”项下的色谱条件
测定，按外标法计算大花紫薇叶中鞣花酸的含量，结果见表
２、表３。
表２ 不同产地大花紫薇叶中鞣花酸含量测定结果
（ｎ＝３，ＲＳＤ＜２％）
Ｎｏ． 批号 样品来源 鞣花酸含量（％）
１ ２０１３０８２００１ 河南洛阳 ０．２７
２ ２０１３０８２００２
福建福州闽侯
（福建卫生职业技术学院）
２．０８
３ ２０１３０８２００３ 福建福州白马路 ２．４１
４ ２０１３０８２００４ 福建厦门火车站 １．６７
５ ２０１３０８２００５ 福建厦门金尚路 １．２５
６ ２０１３０８２００６ 广东广州 ２．５６
７ ２０１３０８２００７ 广东深圳 ２．６７
８ ２０１３０８２００８ 广东揭阳 ２．２８
表３ 不同采收期福建卫生职业技术学院
大花紫薇叶中鞣花酸的含量测定结果
（ｎ＝３，ＲＳＤ＜２％）
Ｎｏ． 生长周期 采收时间 鞣花酸含量（％）
１ 开花期 ２０１３－０６－２２ １．８７
２ 始果期 ２０１３－０８－２０ ２．０８
３ 成长期 ２０１３－１０－２１ １．５３
４ 成熟期 ２０１３－１２－１１ １．０２
３ 讨论
不同产地的大花紫薇叶中鞣花酸，以广东深圳采收的
含量最高。总体来说，广东和福建地区大花紫薇叶中鞣花
酸的含量差别不大，但在相同的采收期下，广东深圳所产的
大花紫薇叶中鞣花酸含量较河南洛阳所产含量高出近１０
倍，这可能与广东地区光照充足，温度与湿度均较高等生长
环境有关。
本试验还对采自福建卫生职业技术学院的大花紫薇叶
在花期和果期内鞣花酸的含量进行了分析。由结果可以看
出，鞣花酸含量在开花期含量逐渐上升，在始果期即８月下
旬时达到含量最大值，而在成长期含量开始逐渐降低，到果
实成熟期含量达到最低值。因此，据此含量变化规律，可确
定大花紫薇叶在花期８月中下旬为最佳采收期，此时有效
成分鞣花酸的含量较高。
鞣花酸作为大花紫薇叶中主要活性成分之一，其含量
高低对于大花紫薇的内在质量具有重要的意义。本实验结
果表明，不同的产地和采收时间对鞣花酸的含量均有影响。
而产地对其含量的影响较大，说明产地是决定大花紫薇次
生代谢产物形成的主要因素。本实验结果可为进一步开发
利用大花紫薇提供一定的研究依据。
参考文献：
［１］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［Ｍ］．北
京：科学出版社，１９８３：９７．
［２］ ＬＩＵ Ｆ，ＫＩＭ ＪＫ，ＬｉＩＹ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ ｓｐｅ－
ｃｉｏｓａ Ｌ．ｈａｓ ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ａｎｄ ａｄｉ－
ｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ３Ｔ３－Ｌ１ｃｅｌｓ［Ｊ］．
Ｊ Ｎｕｔｒ，２００１，１３１（９）：２２４２．
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不同炮制方法对大黄遗传毒性减毒效果的研究
花胜利，肖热风，赖怀恩
（广东省制药工业公司，广东 广州５１０１１０）
摘 要：目的：探讨不同炮制方法对大黄遗传毒性的减毒效果。方法：将生大黄中药材４００ｇ平均分为四
组，分别用清炒法、醋炒法、清蒸法和醋蒸法四种方法进行炮制，炮制后进行 ＡＭＥＳ实验并通过统计学
方法比较差异性。结果：清蒸［ＴＡ１０２的Ｓ９ 阳性值为（２５０．１±８．０），阴性值为（２４４．５±９．１）］和醋蒸
［ＴＡ９７的Ｓ９ 阳性值为（２４５．７±８．０），阴性值为（１６５．９±９．１）］的大黄样品除醋蒸样品在代谢非活化条
件下呈阳性以外，对于菌株ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡｌ００、ＴＡｌ０２的致突变性都呈现阴性结果，而清炒和醋炒大
黄的结果仍呈阳性。结论：清蒸炮制法与醋蒸炮制法对大黄的减毒作用比较明显，而清炒炮制法与醋炒
炮制法对大黄的减毒效果不明显。
关键词：炮制；大黄；遗传毒性；减毒效果
中图分类号：Ｒ２８３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）１１－００２７－０２
收稿日期：２０１４－０３－１４
作者简介：花胜利（１９６０－），男，广东省制药工业公司主管中药师，研究方向为药物管理。
大黄又名将军、黄良等，能攻积滞、清湿热，具有良好的
泻火、凉血、祛瘀、解毒作用，现代药物研究［１－２］表明，大黄中
主要成分是游离状态或结合状态的蒽醌类衍生物（如大黄
酸、大黄素、芦荟素和大黄素甲醚等），有文献［３］指出：大剂
量生大黄能使受孕的雌性大鼠出现虚证表现，大大增大死
胎率，暗示生大黄具有较强的生殖毒性，因此，临床应用大
黄之前必须进行炮制减毒。为此，笔者对生大黄分别用清
炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法对大黄进行炮制解毒，现将
结果报道如下。
１ 材料与方法
１．１ 实验材料
取同一批次的生大黄中药材（产地为甘肃）４００ｇ平均分
为四组，处理因素分别为清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法四
种。实验设计主要试剂包括二甲基亚砜和敌克松等均购自
Ｓｉｇｍａ制药，甲基磺酸甲酯、溴化乙锭和曲拉通等药品购自河
北石药集团。实验菌株为组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌
ＴＡ９７、ＴＡ１００、ＴＡ９８和ＴＡ１０２等（购自山东省疾病预防控制
中心），经过专家鉴定结果符合实验要求。对菌株进行培养
的培养基制作方法与高建波、刘云文献［４］一致，在此不再赘
述。实验用小鼠购自中国医科大学实验动物研究中心（为昆
明种雄性小鼠），体重范围为２４～２６ｇ，平均体重范围为
（２５．０１±０．８１）ｇ，所有小鼠在常规喂养１周后进行实验。
１．２ 大黄炮制方法
四份大黄（各１００ｇ）分别用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋
蒸法方法进行炮制，清炒法是通过中火力度将大黄的表面
炒至焦黄色，取出放凉备用；清蒸法是将大黄加热蒸透（一
般蒸４０ｍｉｎ左右），取出后在室温条件下放凉备用；醋炒法
是先将大黄加醋搅拌均匀（加醋比例为每１００ｇ大黄拌入
１８ｇ醋），闷透后放在锅中翻炒，翻炒至大黄表面为焦黄色时
取出放凉备用；醋蒸方法为先将大黄加醋搅拌均匀（加醋比
例为每１００ｇ大黄拌入１８ｇ醋），放入锅中加热蒸３０ｍｉｎ左右
时取出放凉，干燥备用
。
［３］ ＬＩＵ Ｘ，ＫＩＭ Ｊ，ＬＩ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｎｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ
ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ３Ｔ３－Ｌ１
ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ｎｕｔｒ，２００５，１３５（２）：１６５．
［４］ ＢＡＩ Ｎ，ＨＥ Ｋ，ＲＯＬＬＥＲ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｆｒｏｍ Ｌａ－
ｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ ｓｐｅｃｉｏｓａ，ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ－ｓｔｉｍｕｌａｔｏ－
ｒｙ／ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｎｄ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｉｎ ３Ｔ３－Ｌ１ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２００８，５６（２４）：１１６６８．
［５］ 李素琴，袁其朋，徐健梅．鞣花酸的生理功能及工艺开发研究
现状［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００１，１３（５）：７１－７９．
［６］ 詹勤，王燕，李霞，等．大花紫薇叶醋酸乙酯部位的化学成分
研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（８）：１８４１－１８４４．
（责任编辑：魏 晓）
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