全 文 ：高效液相色谱法测定蛋黄果中的糖类
陈佳瑛　刘胜辉　王松标　谢江辉*
(中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 , 广东湛江　524091)
摘　要　用高效液相色谱法测定蛋黄果中的果糖 、 葡萄糖和蔗糖的含量 。色谱柱为 Luna 5u NH 2
100A , 250mm ×4.6mm , 柱温 35℃, 流动相为 70%乙腈水溶液 , 用示差折光检测器检测蛋黄果
中的糖类 , 相关系数在 0.9991以上 , 加标回收率为 96.94% ～ 97.97%。三种糖都得到了较好的
分离 , 测定方法快速 、简单 , 结果令人满意。
关健词　高效液相色谱法;蛋黄果;果糖;葡萄糖;蔗糖
　　收稿日期:2005 - 09 - 05
　*　通讯作者
　　基金项目:中国热带农业科学院基金资助
　　蛋黄果是山榄科蛋黄果属的多年生常绿果树 ,
果肉含水量较少 、松干 、 粉质状 、 味甜似鸡蛋黄 ,
故名蛋黄果 。蛋黄果含丰富的糖 、淀粉 、 蛋白质等
营养物质[ 1] 。目前 , 市售蛋黄果大多为国外进口 ,
国内的多为实生树 , 果实品质不一。按果形大致可
分为圆形 、 苹果形 、 肾形 、长椭圆形几种 。国内已
有研究所进行蛋黄果的种质资源收集工作 , 对果实
品质也有初步的测定 , 但对含糖量的测定尚未见报
道 。我国相关标准规定 , 以氧化—还原滴定法测定
还原糖及蔗糖 , 如需测定其中葡萄糖和果糖的含
量 , 则进一步用碘量法测定醛糖含量 , 然后以总还
原糖减去葡萄糖含量计算出果糖含量 。因此 , 要检
测一个样品的果糖 、 葡萄糖和蔗糖的含量必须进行
三个不同的实验 , 步骤复杂 , 费时费力 [ 2] 。而高
效液相色谱法一次即可检测葡萄糖 、 果糖 、 蔗糖 ,
方法简单 、 快速 、 准确 [ 3] 。为此 , 开展了用高效
液相色谱法测定蛋黄果中糖类的研究 。
1　材料与方法
1.1　材料
样品采自中国热带农业科学院南亚热带作物研
究所蛋黄果种质圃。
1.2　标准溶液的配制
准确称取果糖 、 葡萄糖 、 蔗糖各 0.3000 ～
0.5000g, 分别用双蒸水溶解定容至 100m l。
1.3　仪器和试剂
PE高效液相色谱仪 (美国 PE公司制造 ),
PE200示差折光检测器 , 葡萄糖 、 果糖 、 蔗糖 , 乙
醇 (国产分析纯), 乙腈 (国产色谱纯 )。
1.4　色谱分析条件
Se ries200胺基柱 250 ×4.6nm , 5μ;流动相为
70%乙腈水溶液;流速 1m l /m in, 柱温 35℃, 进样
量 10.0μl。
1.5　样品处理
称取 1g果肉 (去皮 、 核 ), 在微波炉中杀酶
30s, 在冰浴中加入 5m l 90%乙醇研磨成匀浆;在
冷冻离心机上以 10000 r /m in离心 10m in, 取上清液
倒入刻度试管中 , 残渣再用 5m l乙醇提取 , 离心后
合并上清液;将刻度试管放在 90℃水浴锅中加热 2
～ 3h, 直到蒸干乙醇 , 取出后定容至 10m l;用一
次性注射器抽取样液 , 用 0.45μm滤膜过滤 、 NH 2
柱分析。每个样品重复 3次。
1.6　标准曲线的制作
取标准溶液 1m l, 依次用水稀释 2、 4、 6、 8、
10倍 , 从中分别取 10μl进样分析 , 以峰面积 Y
(mv)为纵坐标 , 标样浓度 X (mg /m l)为横坐
标 , 绘制标准曲线 , 计算线性回归方程的回归系数
和截距[ 4] 。
1.7　精密度试验
精确称取果糖 、葡萄糖 、 蔗糖各 2.0mg, 用水
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福建果树 总第 135期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Fujian F ruits 2005.4 试验研究
定容至 100m l, 配制成 2.0mg /m l标准溶液 , 准确
进样 10.0μl , 重复进样 n=5次 , 测定峰面积 ,
并计算相对标准偏差 (RSD)。
1.8　回收率试验
采用加样回收法 , 准确称取 3份果肉各 1g,
加入准确称量的 1g标准样品葡萄糖 、 果糖 、蔗糖 ,
溶解 , 过滤后取 10μl进样测定。
1.9　蛋黄果样品分析
对圆形 、苹果形 、肾形和长椭圆形等 4种不同
果形的果肉中的蔗糖 、葡萄糖和果糖进行外标法测
定 , 实验结果用 Exce l进行分析 。
2　结果与分析
2. 1　标准曲线的线性回归方程和回归系数
表 1表明 , 在果糖 、葡萄糖 、蔗糖的标准曲线
中 , 三者的浓度均与峰高呈良好的线性关系 , 相关
系数分别为 0.9999、 0.9998、 0.9991。
表 1　回归方程和线性范围
成分 回归方程 相关系数 线性范围(m g /m l)
果糖 Y=89907 x+23622 0. 9999 0. 5～ 10
葡萄糖 Y=87641 x+23018 0. 9998 0. 5～ 10
蔗糖 Y=98500 x+25689 0. 9991 0. 5～ 10
2.2　精密度
试验结果表明 , 果糖 、 葡萄糖 、 蔗糖的 RSD
依次为 0.76%、 0.85%、 1.13%, 说明试验方法
的精密度良好。
2.3　回收率 表 2　样品的回收率
成分 样品含量(m g /m l)
标样加入量
(m g /m l)
测出量
(mg /m l)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
果糖 1. 904 2. 0 3. 7895 97. 07 97.97
3. 8425 98. 42
3. 8418 98. 41
葡萄糖 1. 302 2. 0 3. 1923 96. 68 97.51
3. 2013 96. 95
3. 2657 98. 90
蔗糖 3. 3895 96. 84 96.94
1.5 2. 0 3. 3913 96. 89
3. 3976 97. 07
　　从表 2可知 , 果糖 、葡萄糖 、蔗糖的回收率分
别为 97.97%、 97.51%和 96.94%, 说明用液相色
谱法测量这三种糖的准确度是可靠的。
2. 4　4种果形果肉的含糖量　从图 1及表 3可见 ,
4种果形的蛋黄果含糖量以样品 2的最高 , 三种糖
含量之和为 83.23mg /g。果糖和葡萄糖含量也是样
品 2最高 , 说明长椭圆形的蛋黄果含糖量最高。这
与口感也比较一致 。
图 1　样 1色谱图 (1 -溶剂;2 -果糖;3 -葡萄糖; 4 -蔗糖)
表 3　样品测定结果
(m g /g)
样品号 果糖 葡萄糖 蔗糖
样 1(圆形) 7. 67 4. 87 22. 96
样 2(长椭圆形) 31. 48 27.38 24. 37
样 3(肾形) 17. 25 13.79 16. 60
样 4(苹果形) 16. 75 12.87 28. 66
3　讨论
3.1　使用 Series200胺基柱分析糖类时 , 由于示差
折光检测器和温控系统需要稳定的时间较长 , 因此
每次实验前先打开检测器和温控系统 , 先用流动相
冲洗示差折光检测器的参比池和样品池 , 使两个池
子的流动相一致。然后对色谱泵和色谱柱用所选流
动相冲洗平衡至柱压和检测器稳定 。实验结束时要
用纯甲醇或乙腈冲洗柱子。
3.2　示差折光检测器对温度的变化十分敏感 , 在
测定时尽量控制温度变化在 1℃以内 , 并使其流动
相充分进入参比池 , 以减少测定误差。
参考文献
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(1): 21～ 23
[ 2] 张存洁 .高效液相色谱法检测蜂蜜中的多种糖 .中国养蜂 ,
1993, 118 (5):5～ 8
[ 3] 高娃 , 等 .高压液相色谱分析常见单糖 、 多糖 .生物技术 ,
1998, 8 (2):44～ 46
[ 4] 唐根源 , 等 .高效液相色谱法测定 果中的山梨醇和糖类 .
色谱 , 2000, 18 (5):459～ 461
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