全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(2)∶134 ～ 137
基金项目:广西教育厅自然科学基金项目(200911MS28)
作者简介:林兴(1975—) ，男，硕士，副教授，从事乙肝、肝纤维化靶向诊断和治疗研究工作。Email:gxLx60@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:hqf00@ 126． com
山芝麻抗鸭体内乙肝病毒及保肝作用的实验研究
林 兴1，黄权芳2* ，张士军1，黄仁彬1，陈兆霓1
(1．广西医科大学，广西 南宁 530021;2．广西中医学院第一附属医院，广西 南宁 530023)
摘要:目的 研究山芝麻水提取物对鸭乙肝病毒(DHBV)的抗病毒与保护肝细胞的作用。方法 将 DHBV － DNA 阳性的麻
鸭随机分为高、中、低剂量山芝麻组、拉米夫定组和模型组，分别给予相应药物进行干预，并于用药前、用药第 7、14 天及停药后
第 7 天取静脉血，检测血清中 DHBV － DNA滴度和 DHBsAg水平，以及测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶
(AST)和总胆红素(TBiL)的含量。实验结束时，取肝脏组织作病理学检查。结果 与模型组比较，山芝麻高剂量组、拉米夫
定组用药后血清中 DHBV － DNA、DHBsAg、ALT /AST的水平均明显降低(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) ，停药后 7 d，山芝麻高剂量组
的 DHBV － DNA、DHBsAg、ALT /AST仍能维持在较低水平(P ＜ 0． 05) ，而拉米夫定组则出现明显反跳现象;山芝麻中剂量组显
示有一定的效果，小剂量组无明显抑制作用。山芝麻各剂量组血清中 TBiL 水平没有明显变化(P ＞ 0． 05)。镜下观察山芝麻
高剂量组与阳性药组鸭肝脏的病理改变有一定的改善。结论 山芝麻连续用药后有一定的抗炎及护肝作用。
关键词:山芝麻;鸭乙肝病毒;拉米夫定
中图分类号:R96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)02 － 0134 － 04
Experimental study of the effect of water extracts from Helicteres angustifolia on anti －
hepatitis B virus and protecting hepatocyte activity in vitro
LIN Xing1，HUANG Quan － fang2* ，ZHANG Shi － jun1，HUANG Ren － bin1，CHEN Zhao － ni1
(1． Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，530021 P． R． China;2． The First Affiliated Hospital of Guangxi Traditional Chinese
Medicine University，Nanning，Guangxi，530023 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To study the effects of the water extracts from Helicteres angustifolia L． (HA)on anti － duck hepatitis B
virus(DHBV)and protecting hepatocyte activity．METHODS Ducks with congenital infection of DHBV were randomly divided into
five groups:high，medium，low － dose HA treated group，lamivudine － treated group and untreated group． The ducks in the Lamivudine －
treated group were fed Lamivudine with a dose of 50 mg·kg －1 once． Ducks in the three － dose HA treated groups were treated with
different doses of HA for 14 days respectively． The serum content of DHBV － DNA，DHBsAg，ALT /AST and TBiL were determined
before and at the 7 th，14 th day during treatment，and at the 7th day after finishing the treatment． The histopathological changes of liver
were evaluated after the treatment． RESULTS Lamivudine showed a rapid inhibiting effect on DHBV － DNA，DHBsAg and ALT /
AST，but this effect didn’t last long，and their serum level increased again after treatment． The level of DHBV － DNA，DHBsAg and
ALT /AST dropped markedly in the high － dose HA treated group at the 7th and 14th day． Medium － dose HA also showed certain inhib-
iting effect on them． There was no significant difference in TBiL level among HA groups and control group． The hepatic pathological
change in the high － dose HA treated group and positive control group was slighter than that in the model control group． CONCLU-
SION HA has anti － inflammatory and protecting liver effects．
Key words:Helicteres angustifolia L．;Duck hepatitis B virus;Lamivudine
CLC number:R96 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2012)02 － 0134 － 04
乙型肝炎是感染乙肝病毒(HBV)引起的一种
常见传染病和多发病，易转化为慢性，甚至发展为肝
硬化、肝癌［1］。目前研究表明:乙型肝炎的发病主
要与免疫力低下、病毒持续感染以及进行性肝细胞
损伤有关，而某些中药提取物可三方面并重，从而提
高疗效。中国中草药资源丰富，在防治乙型肝炎方
面积累了大量的经验;其不良反应小，价格便宜，因
此从传统药物和天然资源中寻找抗乙型肝炎病毒的
药物仍是医药科研工作者的迫切任务。山芝麻系梧
桐科植物山芝麻 Helicteres angustifolia L． 的根，能清
热解毒，主要用于治疗感冒发热、肺热咳嗽、咽喉肿
痛、麻疹等。目前对山芝麻公开报道的研究主要集
中在化学成分的分离、鉴定方面，其药效学研究很
少。课题组前期研究发现:山芝麻对 CCl4 引起的肝
损伤有较好的保肝作用［2］。文中采用体内抗鸭乙
肝病毒的实验方法，首次观察了山芝麻在体内抗鸭
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.02.007
乙型肝炎病毒 DHBV － DNA及其保肝作用。
1 实验部分
1． 1 试药与动物
山芝麻经黄权芳主管中药师鉴定为梧桐科植物
山芝麻 Helicteres angustifolia L． 的根，其水提物由广
西医学科学实验中心提取;拉米夫定(中国苏州葛
兰素史克制药有限公司，批号:07090016，每片 100
mg) ;ALT、AST 试剂盒(南京建成生物工程研究
所)。1 日龄广西麻鸭(广西畜牧良种养殖场) ，♀♂
兼用，体重 40 ～ 50 g。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 山芝麻水提物的制备及给药方法 取 1 kg
山芝麻饮片，加 10 倍量水提取(1． 5 h × 2) ，合并提
取液，浓缩至 500 mL(相当于 2 g·mL －1生药)作为
备用液，于 4 ℃保存。每次使用时分别取 5、2． 5、
1. 25 mL备用液，加蒸馏水稀释至 10 mL，得 1、0． 5、
0． 25 g·mL －1的山芝麻水提物液，各组 ig 给药容积
为 10 mL·kg －1，即给药剂量分别为 10、5、2． 5 g·kg －1
(高、中、低剂量)。
1． 2． 2 广西麻鸭乙肝动物模型的建立［3］ 用健康
成年广西麻鸭所产蛋孵化的 1 日龄雏鸭，于腹腔注
射 DHBV － DNA强阳性病毒血清 0． 2 mL。接种 7 d
后，分别从胫静脉采血 0． 2 ～ 0． 3 mL，装入一次性
EP管中，整个过程不应交叉污染。于 4 × 103 r·
min －1离心 5 min，取血清于 － 20 ℃保存备用。用
DHBsAg ELISA法筛选出感染的阳性鸭。
1． 2． 3 实验分组及用药 经 ELISA 法检测筛选出
感染的阳性鸭，饲养至 13 日龄作为实验动物进行药
物治疗试验。将 50 只鸭随机均分为模型组、拉米夫
定组和高、中、低剂量山芝麻组。分别 ig 给予等量
生理盐水、0． 05 g·kg －1·d －1拉米夫定、10、5、2． 5 g·
kg －1·d －1山芝麻水提物。各组每天早上 8 ～ 9 点 ig
给药 1 次，连续 14 d，实验期间麻鸭自由取食和饮
水。于用药第 0、7、14 天及停药第 7 天时，分别从胫
静脉采血约 2 mL，于 2 × 103 r·min －1离心 30 min，分
离血清，于 － 20℃保存备用。
1． 2． 4 血清中 DHBV － DNA 滴度的测定 采用斑
点杂交法，用地高辛标记 DHBV － DNA 探针，将用
药前后的血清统一对比检测，以与探针同源的质粒
DNA倍比稀释后点样于硝酸纤维薄膜上杂交显示
的斑点颜色深浅为标准，用扫描仪进行膜片扫描，对
斑点进行定量分析，统计斑点值为 volume(volume =
intensity × mm2)。表 1 显示:模型组用药前后血清
中DHBV － DNA滴度无明显降低。拉米夫定组于用
药 14 d后血清中 DHBV － DNA 滴度明显降低(P ＜
0. 01) ，停药后有反跳现象。山芝麻大、中剂量组分
别于第 7 天(T7)、第 14 天(T14)开始出现 DHBV －
DNA滴度降低(P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 05) ;停药后 7 天
(P7) ，大剂量组的 DHBV － DNA滴度仍维持在较低
水平(P ＜ 0． 05) ，无反跳现象。山芝麻小剂量组在
治疗期间，DHBV － DNA滴度有降低趋势，但用药前
后比较无统计学意义。
1． 2． 5 血清中 DHBsAg值的检测 采用 ELISA快
表 1 山芝麻水提液对血清 DHBV DNA滴度的影响(珔x ± s，n =10)
Table 1 The change of DHBV DNA in the ducks after intragastric administration at 0th，7th，14th day and withdrawal 7th day with the
water extracts of Helicteres angustifolia(HA)(珔x ± s，n =10)
Groups Dose /g·kg －1
DHBV － DNA滴度 / × 103
T0 T7 T14 P7
Model － 1． 529 ± 0． 329 1． 663 ± 0． 330 1． 712 ± 0． 527 1． 627 ± 0． 399
Lamivudine 0． 05 1． 556 ± 0． 358 1． 358 ± 0． 312* 1． 036 ± 0． 285＊＊△△ 1． 425 ± 0． 462
HA L 2． 5 1． 504 ± 0． 313 1． 453 ± 0． 373 1． 335 ± 0． 399 1． 403 ± 0． 357
HA M 5 1． 558 ± 0． 318 1． 411 ± 0． 325 1． 248 ± 0． 322* 1． 386 ± 0． 319
HA H 10 1． 542 ± 0． 321 1． 330 ± 0． 335* 1． 141 ± 0． 314＊＊△ 1． 207 ± 0． 299＊△
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compared with T0:△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
速法，用 Model450 酶标仪(美国 Bio － Rad)测定各
组在 490 nm处的 OD值(表 2)。结果表明:模型组
血清中 DHBsAg的 OD基本稳定。拉米夫定组用药
7 ～ 14 d 时血清中 DHBsAg 的 OD 持续降低(P ＜
0. 01) ，至停药 7 d后出现回升现象。山芝麻高剂量
组从用药 7 d开始，血清中 DHBsAg的 OD有显著降
低(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) ，中剂量组显示有一定的
效果;停药后，山芝麻高、中剂量组 DHBsAg 的 OD
与给药前比较，仍有显著性差异(P ＜ 0． 05 或 P ＜
0. 01)。小剂量在治疗过程中无明显抑制作用。
1． 2． 6 肝功能的测定 用全自动生化分析仪测各
组鸭血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸
氨基转移酶(AST)和血清总胆红素(TBil)的含量。
实验发现:与模型组比较，高剂量山芝麻组、拉米夫
定组用药后 7 ～ 14 d，血清 ALT、AST 的含量均明显
降低(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) ;停药后 7 d，山芝麻高
剂量组 ALT、AST仍能维持在较低水平(P ＜ 0． 05) ，
而拉米夫定组 ALT、AST 则出现明显反跳现象。山
531第 2 期 林 兴，等。山芝麻抗鸭体内乙肝病毒及保肝作用的实验研究
芝麻中剂量组血清 ALT、AST 含量在治疗过程中有
一定的下降，而低剂量组 ALT、AST 水平变化不明
显。山芝麻各剂量组血清 TBil 水平无明显变化
(P ＞ 0． 05)。结果见表 3 ～ 5。
表 2 山芝麻水提液治疗前后鸭血清中 DHBsAg OD值的变化情况(珔x ± s，n =10)
Table 2 The change of DHBsAg level in the ducks after intragastric administration at 0 th，7 th，14 th day and withdrawal 7th day with
the water extracts of HA(珔x ± s，n =10)
Groups Dose /g·kg －1
OD of DHBsAg
T0 T7 T14 P7
Model － 0． 85 ± 0． 21 0． 82 ± 0． 19 0． 87 ± 0． 13 0． 86 ± 0． 17
Lamivudine 0． 05 0． 87 ± 0． 24 0． 62 ± 0． 11＊△ 0． 42 ± 0． 15＊＊△△ 0． 78 ± 0． 12
HA L 2． 5 0． 83 ± 0． 22 0． 75 ± 0． 16 0． 68 ± 0． 16 0． 72 ± 0． 16
HA M 5 0． 88 ± 0． 26 0． 71 ± 0． 14 0． 67 ± 0． 12＊△ 0． 70 ± 0． 13*
HA H 10 0． 86 ± 0． 19 0． 61 ± 0． 18＊△△ 0． 43 ± 0． 12＊＊△△ 0． 51 ± 0． 10＊＊△△
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compared with T0:△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 3 山芝麻水提液治疗前后鸭血清中 ALT水平的变化情况(珔x ± s，n =10)
Table 3 The change of ALT level in the ducks after intragastric administration at 0 th，7 th，14 th day and withdrawal 7th day with the water
extracts of HA(珔x ± s，n =10)
Groups Dose /g·kg －1
ALT /IU·L －1
T0 T7 T14 P7
Model － 54． 67 ± 12． 93 56． 53 ± 13． 96 60． 75 ± 15． 08 62． 77 ± 12． 34
Lamivudine 0． 05 52． 45 ± 11． 62 40． 15 ± 10． 39＊＊△ 35． 18 ± 10． 06＊＊△△ 52． 43 ± 11． 16
HA L 2． 5 54． 98 ± 13． 60 52． 14 ± 12． 26 50． 85 ± 15． 83 52． 97 ± 13． 81
HA M 5 55． 76 ± 15． 63 50． 88 ± 11． 19 47． 55 ± 12． 73* 50． 38 ± 15． 96
HA H 10 57． 06 ± 16． 82 45． 06 ± 9． 16* 40． 78 ± 11． 09＊＊△ 46． 74 ± 12． 82*
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compared with T0:△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 4 山芝麻水提液治疗前后鸭血清中 AST水平的变化情况(珔x ± s，n =10)
Table 4 The change of AST level in the ducks after intragastric administration at 0 th，7 th，14 th day and withdrawal 7th day with the water
extracts of HA(珔x ± s，n =10)
Groups Dose /g·kg －1
AST /IU·L －1
T0 T7 T14 P7
Model － 46． 11 ± 13． 42 48． 82 ± 10． 03 47． 35 ± 1141 48． 66 ± 10． 53
Lamivudine 0． 05 48． 93 ± 16． 75 37． 15 ± 9． 69* 30． 73 ± 10． 54＊＊△△ 42． 63 ± 9． 88
HA L 2． 5 44． 96 ± 12． 83 42． 57 ± 10． 32 40． 98 ± 11． 26 41． 85 ± 12． 25
HA M 5 46． 83 ± 13． 58 40． 16 ± 12． 52 35． 48 ± 12． 06* 39． 81 ± 10． 32
HA H 10 45． 25 ± 12． 23 39． 04 ± 10． 18* 34． 19 ± 10． 28＊△ 37． 51 ± 11． 07*
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compared with T0:△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
表 5 山芝麻水提液治疗前后鸭血清中 TBil水平的变化情况(珔x ± s，n =10)
Table 5 The change of TBil level in the ducks after intragastric administration at 0 th，7 th，14 th day and withdrawal 7th day with the water
extracts of HA(珔x ± s，n =10)
Groups Dose /g·kg －1
TBil /μmol·L －1
T0 T7 T14 P7
Model － 4． 05 ± 1． 36 4． 89 ± 1． 12 5． 86 ± 1． 13 6． 15 ± 1． 28
Lamivudine 0． 05 4． 17 ± 1． 11 4． 43 ± 1． 53 5． 04 ± 1． 77 5． 30 ± 1． 75
HA L 2． 5 4． 35 ± 1． 02 4． 66 ± 1． 01 5． 71 ± 1． 36 5． 47 ± 1． 16
HA M 5 4． 25 ± 1． 01 4． 51 ± 1． 17 5． 28 ± 1． 33 5． 42 ± 1． 27
HA H 10 4． 46 ± 1． 22 4． 69 ± 1． 05 4． 99 ± 1． 18 5． 25 ± 1． 31
Compared with model group:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;compared with T0:△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01
1． 2． 7 各组肝脏病理(HE染色)的检测 停药 7 d
后，分别剖杀各组麻鸭，肉眼观察各组鸭的肝脏，色
泽鲜嫩暗红，表面光滑，质地柔软，未扪及结节。各
取小块肝组织固定于 10%甲醛溶液中，石蜡切片，
HE染色。镜下观察可见:模型组的肝细胞出现炎
性细胞浸润，周边部分肝脏细胞肿胀，弥漫性重度脂
变。治疗后，拉米夫定组和山芝麻高剂量组的炎症
有不同程度减轻，部分组织汇管区小叶间隔可见炎
症细胞浸润，结构基本完整，变性肝细胞减少。山芝
麻中、低剂量组的炎症改善不明显，可见炎症细胞浸
润及桥接坏死(图 1)。
1． 2． 8 统计学处理 数据以珋x ± s表示，采用SPSS
631 华 西 药 学 杂 志 第 27 卷
A B C D E
图 1 模型组(A)、山芝麻高、中、低剂量组(B ～ D)和拉米夫定组(E)广西麻鸭肝脏的病理学检查结果(HE ×400)
Fig 1 Histologic results of liver tissues stained of model group(A)，HA high group(B)，middle group(C)，low group(D)and Lamivudine
group(E)(HE ×400)
10． 0 软件处理，治疗组与模型组比较，采用成组 t检
验;组内治疗前、后数据比较，采用配对 t检验;以上
统计分析 P ＜ 0． 05 即认为存在显著性差异。
2 讨论
课题组多年来一直致力于发掘广西特色中草药
用于抗乙型肝炎的研究，首次成功建立了广西麻鸭
乙肝动物模型。实验证实该品种麻鸭易感染，其病
程较规律，病毒血症持续时间较长且较稳定，无明显
的自然转阴现象，具有良好的稳定性和可靠性;先后
利用该模型开展了大量的抗乙肝中药的筛查研究工
作［3］。山芝麻是目前重点研究的民族药之一，前期
实验发现:山芝麻能保护 CCl4 所致小鼠化学性肝损
伤［2］，能显著改善肝纤维化大鼠的肝脏组织结构，
减轻肝纤维化［4］。文中是前期系列研究的延续，采
用广西麻鸭乙肝动物模型，观察了山芝麻在体内的
抗 DHBV － DNA作用。
实验结果表明:山芝麻具有一定的体内抑制
DHBV的作用，其起效较慢，且疗效与用药剂量及用
药时间相关。山芝麻高剂量组在治疗第 7 天显效，
而中剂量组在治疗第 14 天显效，低剂量组在治疗期
间未见明确的抑制病毒作用。山芝麻高剂量组在停
药后仍有明显的抑制病毒的作用。拉米夫定抑制
DHBV起效较早，在治疗第 7 天其病毒含量已降至
较低水平，但停药后病毒含量又立即回升。实验过
程中各组鸭血清中 DHBV 均未转阴。山芝麻组与
拉米夫定组比较，山芝麻起效慢，但其抑制病毒复制
的作用平稳而持久，提示山芝麻抑制体内 DHBV 复
制的机制不同于拉米夫定。血清病毒检测结果与肝
脏病理组织学表现基本一致，随着病毒复制水平的
降低，山芝麻治疗组肝脏炎症也有所减轻。说明山
芝麻不仅能抑制病毒的复制，而且具有保护肝脏细
胞、抗氧化及抑制炎症反应的作用，这与我们前期对
山芝麻抗肝纤维化研究所得的结论一致［5］。
文中实验结果证实:山芝麻能够抑制 DHBV 在
体内的复制，其作用较拉米夫定弱但疗效稳定。关
于山芝麻抗病毒的作用机制及其抗病毒的有效成
分，尚待进一步研究。
参考文献:
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实验研究［J］．中国中医基础医学杂志，2008，14(12) :915 －
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脂质过氧化反应的影响［J］． 中国实验方剂学杂志，2010，16
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织中 α － SMA、TIMP － 1 蛋白表达的影响［J］． 山东医药，
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［5］ 林兴，黄权芳，张士军，等． 山芝麻对肝纤维化大鼠血清学指
标的影响［J］．时珍国医国药，2010，21(12) :3085 － 3086．
收稿日期:2011 － 05 － 04
731第 2 期 林 兴，等。山芝麻抗鸭体内乙肝病毒及保肝作用的实验研究