全 文 ：中国药房 2010年第21卷第43期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 43
山芝麻系梧桐科植物山芝麻Helicteres angustifolia L.的
根，能清热解毒，主要用于治疗感冒发热、肺热咳嗽、咽喉肿
痛、麻疹等。至今，对山芝麻公开报道的研究主要集中在其化
学成分的分离、鉴定方面，其药效学研究很少。本研究通过观
察山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）
mRNA和ColⅠ蛋白表达的影响，首次探讨了山芝麻对CCl4诱
发的大鼠肝纤维化的保护作用机制。
1 仪器与材料
1.1 仪器
MK3型酶标仪（美国Thermo Lobsystems公司）；CX-41型
倒置显微镜（日本Olympus公司）。
1.2 试药
山芝麻采自广西，经广西中医学院第一附属医院药学部
黄权芳中药师鉴定为真品。秋水仙碱（昆明制药有限公司，批
号：20050901）；Trizol试剂（美国 Invitrogen公司）；cDNA逆转
录试剂盒、TaqDNA聚合酶、dNTP Mix（美国MBI公司）；Real
Master Mix（SYBR Green，天根生化科技（北京）有限公司）；
DNA ladder（广州东盛生物科技有限公司）；一抗：Rabanti Rat
CollagenⅠ、Biogenesis Morphosys，二抗：Super PictureTM-HRP
Polymer均由天津津脉基因测绘技术有限公司提供；DAB显色
剂（北京中杉金桥生物技术有限公司）。
1.3 动物
SD大鼠 100只，♂，体质量（200±10）g，由广西医科大学
实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXKG（桂）2003-
0003）。
2 方法
2.1 山芝麻提取物的制备
山芝麻饮片 1 000 g，加 10倍量水提取 2次，每次 1.5 h，合
并提取液，浓缩至 500 mL（即相当于 2 g（生药）·mL-1）作为原
液，4℃贮藏，备用。
2.2 CCl4诱发SD大鼠肝纤维化动物模型的复制
ig 50％CCl4花生油溶液 2 mL·kg-1，每周 2次，复制模型。
分别于复制模型后第5、6、7周抽取2只肝纤维化大鼠及1只正
常对照大鼠，进行病理学检查，监测肝纤维化形成情况。
2.3 分组及给药
实验分为6组，即空白对照（等体积生理盐水）、模型（等体
积生理盐水）、秋水仙碱（1 mg·kg-1）和山芝麻提取物高、中、低
Δ广西地方性高发疾病防治研究重点实验室基金专项项目（桂科
能0842009-Z11）
＊讲师，硕士。研究方向：生化药理学、心血管药理学。电话：
0771-5358342。E-mail：gxLx60@163.com
#通讯作者：教授，博士研究生导师。研究方向：心血管药理学、生
化药理学。电话：0771-5358272。E-mail：huangrenbin518@163.com
山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织Col I mRNA和Col I蛋白表达的影响Δ
林 兴 1＊，黄权芳 2，张士军 1，廖 明 1，黄仁彬 1#（1.广西医科大学，南宁市 530021；2.广西中医学院第一附属医
院，南宁市 530023）
中图分类号 R285；R97 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2010）43-4041-03
摘 要 目的：研究山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA和ColⅠ蛋白表达的影响。方法：采用CCl4灌
胃复制大鼠肝纤维化模型，6周末用荧光定量PCR法测定山芝麻提取物对大鼠肝组织ColⅠmRNA的相对表达值，用免疫组化法
检测ColⅠ蛋白的表达量。结果：山芝麻提取物可显著降低肝纤维化大鼠肝组织ColⅠmRNA和ColⅠ蛋白的表达（P＜0.01或
P＜0.05），且随着药物浓度的增加，其作用逐渐增强，呈现量效反应关系。结论：山芝麻提取物能显著改善肝纤维化大鼠的肝脏组
织结构，减轻肝纤维化。其抗肝纤维化的机制可能与抑制ColⅠ有关。
关键词 山芝麻；Ⅰ型胶原mRNA；Ⅰ型胶原蛋白；肝纤维化
Effects of the Extract of Helicteres angustifolia on Col Ⅰ mRNA and Col Ⅰ Protein Expressions in Hepatic
Tissue of Rats with Hepatic Fibrosis
LIN Xing，ZHANG Shi-jun，LIAO Ming，HUANG Ren-bin（Guangxi Medical University，Nanning 530021，
China）
HUANG Quan-fang（The First Affiliated Hospital of Guangxi University of TCM，Nanning 530023，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effects of the extract from Helicteres angustifolia on Col Ⅰ mRNA and Col Ⅰ protein
expressions in hepatic tissue of rats with hepatic fibrosis. METHODS：The rat model of hepatic fibrosis was established by intragas-
tric administration with carbon tetrachloride（CCl4）. At the end of the 6 th week，the expression of Col Ⅰ mRNA in hepatic tissue
was determined by Fluorescence quantitative PCR（FQ-PCR），and the expression of Col Ⅰprotein was detected using immunohis-
tochemical stain method. RESULTS：Extract of H. angustifolia could markedly decrease the expressions of Col Ⅰ mRNA and Col
Ⅰprotein（P＜0.05 or P＜0.01）. As the drug concentration increased，the effects also gradually increased in dose-effect manner.
CONCLUSION：Extract of H. angustifolia significantly ameliorates CCl4-induced liver fibrosis which is related to the inhibition of
the expression of Col Ⅰ.
KEY WORDS Helicteres angustifolia；ColⅠmRNA；ColⅠprotein；Liver fibrosis
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China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 43 中国药房 2010年第21卷第43期
剂量（31、15、7.5 g·kg-1）组。ig给药，给药容积为 1 mL·100
g-1，每天 1次，连续 6周。在给药期间，除空白对照组外，其余
各组断续给予CCl4，每周2次，直至实验结束。ig 6周后，在最
后一次给药 24 h后，经乙醚麻醉、内眦采血检测各项指标，取
肝左叶做生化及组织学检测。
2.4 检测ColⅠ mRNA的表达
2.4.1 大鼠肝组织总RNA的抽提 末次给药 24 h后，戊巴比
妥钠麻醉，打开腹腔，迅速称取约 50～100 mg肝组织。采用
Trizol法提取大鼠肝组织总RNA，实验步骤按试剂盒说明书操
作。
2.4.2 逆转录合成 cDNA 采用 50 μL逆转录反应体系，内含
5倍缓冲液 10 µL、dNTP 2 µL（1 mmol·L-1）、Oligodt（15 Prime-
rs）5 g·mL-1、MMV400单位、RNA酶抑制剂80单位、RNA 4 g，
42℃反应1 h，95℃5 min灭活MMV。
2.4.3 引物设计与合成 （1）Col Ⅰ：上游 5-CAACCT-
CAAGAAGTCCCTGC-3，下游 5-AGGTGAATCGACTGTT-
GCCT -3。（2）GAPDH：上 游 5-ATGATTCTACCCACG-
GCAAG-3，下游5-CTGGAAGATGGTGATGGGTT-3。由上
海生工生物工程技术服务有限公司合成。
2.4.4 目的基因 Col Ⅰ mRNA的表达（FQ-PCR） （1）FQ-
PCR反应体系的建立：①FQ-PCR混合物制备：ddH2O（10 µL），
SYBR Premix Ex TaqTM 2.5×（8 µL），ColⅠ上游引物10 μmol·L-1
（0.5 µL），Col Ⅰ下游引物 10 μmol·L-1（0.5 µL）。②FQ-PCR
混合物制备：ddH2O（9.2 μL），SYBR Premix Ex TaqTM 2.5×（9
µL），GAPDH上游引物 10 μmol·L-1（0.4 µL），GAPDH下游引
物10 μmol·L-1（0.4 µL）。③根据反应管数取适量上述溶液，混
匀，取 19.00 µL至每一反应管中。每管加入 cDNA 1.0 µL，此
时每管共 20 µL。即保证所有反应体系的组成（如酶浓度、引
物浓度等）一致。（2）PCR反应条件：95℃预变性，5 min；94℃
变性，10 s；55 ℃退火，20 s；72 ℃延伸，20 s。共反应 40个循
环。72 ℃延伸，5 min。结束反应，最后以 8 ℃保存。（3）
FQ-PCR的结果判读：扩增过程及荧光信号检查、数据的储存
和分析均由仪器及自带的软件自动完成。
2.5 检测ColⅠ蛋白的表达
2.5.1 实验步骤 末次给药24 h后，戊巴比妥钠麻醉，打开腹
腔，于肝左叶同一部位取肝组织约 1 cm3大小，固定于 10％中
性福尔马林溶液中。免疫组化法检测肝组织ColⅠ蛋白表达，
严格按试剂盒说明书依次操作，用PBS代替一抗作为阴性对
照。
2.5.2 结果判定 选取阳性部位明显的区域采图，观察蛋白
的表达。ColⅠ蛋白表达的定量结果分析使用图像分析系统，
在低倍镜下（×100）计算阳性面积百分比（％）。
2.6 统计学方法
应用SPSS11.0软件进行统计分析。数据均以x±s表示，
采用 t检验进行统计处理。
3 结果
3.1 山芝麻提取物对ColⅠ mRNA的影响
与模型组比较，山芝麻提取物高、中剂量组ColⅠ mRNA
的表达显著下调（P＜0.01），且表现一定的剂量依赖性。山芝
麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织ColⅠ mRNA相对表达量的
影响见表1。
3.2 山芝麻提取物对ColⅠ蛋白表达的影响
ColⅠ蛋白在正常大鼠肝脏呈低水平表达，表达部位局限
于汇管区和肝窦的结缔组织、血管壁及胆管壁，在肝实质内沿
肝窦壁形成的丝状着色，肝细胞浆内没有表达。模型组ColⅠ
蛋白表达广泛，呈弥散性，主要表达在中央静脉周围及纤维组
织增生的汇管区纤维间隔、肝窦壁、血管内皮细胞和胆管上皮
细胞，形成宽而粗大的纤维条索，肝细胞浆可见有表达，免疫
组化染色呈强阳性。山芝麻提取物高、中剂量组ColⅠ蛋白表
达特点同模型组，但表达面积和强度显著减少和减弱（P＜
0.05，P＜0.01），主要表达在中央静脉周围及汇管区，着色减少
且浅，呈细丝状，肝细胞浆内表达呈明显的剂量依赖性降低。
山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织ColⅠ阳性细胞比例的
影响见表2、图1。
表 2 山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织ColⅠ阳性细胞
比例的影响（x±s，n＝10）
Tab 2 Effect extract of H. angustifolia on the proportion of
Col Ⅰ positive cells in hepatic tissue of rats with hepatic
fibrosis（x±s，n＝10）
组别
空白对照组
模型组
秋水仙碱组
山芝麻提取物低剂量组
山芝麻提取物中剂量组
山芝麻提取物高剂量组
剂量/g·kg-1
-
-
1 mg·kg-1
7.5
15
30
ColⅠ阳性细胞比例
3.31±0.74
20.13±5.66＊
9.43±2.64##
18.12±8.73
12.26±4.33#
10.16±3.42##
与空白对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05，##P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜
0.01
4 讨论
肝纤维化是一种可逆性的以细胞外基质沉积为特征的损
伤修复反应[1，2]。在急性肝损伤的修复过程中，实质细胞再生
并取代坏死或凋亡的细胞，这一过程表现为炎症反应和局部
的细胞外基质沉积。如果肝损伤持续存在，则肝细胞再生功
能丧失，被大量的阔筋膜细胞外基质（ECM）取代，并诱导胶原
纤维生成。ECM的过度沉积，进一步可导致肝内血流阻力的
增加及假小叶的形成，进而发展为门脉高压、肝硬化，并可能
发展成肝癌，因此抑制ECM的过度沉积是抗肝纤维化的重要
途径[3，4]。ECM主要由胶原蛋白构成，肝脏胶原蛋白有Ⅰ、Ⅲ、
Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型，其中Ⅰ、Ⅲ型胶原占肝内胶原含量的 80％左右，
主要分布在汇管区。肝纤维化时，ECM量的改变表现为肝内
过量胶原形成及沉积，增加 5～7倍，ECM亚群比例失调，Ⅰ、
表 1 山芝麻提取物对肝纤维化大鼠肝组织ColⅠ mRNA相
对表达量的影响（x±s，n＝10）
Tab 1 Effect extract of H. angustifolia on Col Ⅰ mRNA
expression in hepatic tissue of rats with hepatic fibrosis（x±s，
n＝10）
组别
空白对照组
模型组
秋水仙碱组
山芝麻提取物低剂量组
山芝麻提取物中剂量组
山芝麻提取物高剂量组
剂量/g·kg-1
-
-
1 mg·kg-1
7.5
15
30
ColⅠ mRNA相对表达量
0.53±0.11
2.89±0.83＊
0.81±0.26#
2.37±0.96
1.63±0.88#
0.99±0.73#
与空白对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.01
vs.blank control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01
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中国药房 2010年第21卷第43期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 43
Ⅲ型胶原增多，尤以Ⅰ型胶原（ColⅠ）增多为主，占肝硬化组
织中增加的总胶原含量的 70％～80％，取代Ⅲ型胶原成为肝
内主要胶原，这是肝纤维化晚期及肝硬化的重要标志[5]。
本研究结果表明，高、中剂量山芝麻提取物均可显著下调
肝组织ColⅠ mRNA和蛋白的表达（P＜0.05，P＜0.01），肝组
织中Ⅰ型胶原含量明显减少，且表现一定的剂量依赖性。提
示山芝麻可以显著增强肝脏胶原降解，调节ECM生成与降解
之间的动态平衡，减少ECM的沉积，使肝纤维化发生逆转。
参考文献
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Hepatol，2003，38：538.
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lls-a key issue in liver fibrosis[J]. Front Biosci，2002，7：
808.
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epts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta
as major players and therapeutic targets[J]. J Cell Mol
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关性探讨[J].中国药房，2005，16（24）：1 904.
[ 5 ] 刘学松，李定国，陆汉明.肝细胞的胶原合成与肝纤维化
[J].中华消化杂志，1994，33（14）：53.
（收稿日期：2009-12-16 修回日期：2010-04-19）
A B C
D E F
图1 免疫组化图（×200）
A.空白对照组；B.模型组；C.秋水仙碱组；D.山芝麻提取物高剂量组；
E.山芝麻提取物中剂量组；F.山芝麻提取物低剂量组
Fig 1 Immunohistochemical photograms（×200）
A. blank control group；B. model group；C. colchicin group；D. extract
of H. angustifolia high-dose group；E. extract of H. angustifolia medi-
um-dose group；F. extract of H. angustifolia low-dose group
大黄素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞的影响Δ
余海滨＊，崔 琳，周淑娟，李 强，刘卫红，王小晓（河南中医学院第一附属医院中心实验室，郑州市 450000）
中图分类号 R285；R965 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2010）43-4043-03
摘 要 目的：研究大黄素对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的增殖和凋亡的影响。方法：体外培养HUVEC，利用
MTT法评价不同浓度的大黄素（10、20、40、80 μmol·L-1）对HUVEC增殖的影响；观察其对HUVEC细胞形态的影响；利用DNA梯
状条带观察不同浓度大黄素对HUVEC凋亡的影响。结果：不同浓度的大黄素作用于HUVEC 24、48、72 h后，可明显抑制细胞的
增殖，并能够导致细胞发生皱缩和变圆；不同浓度大黄素作用HUVEC细胞72 h以后，细胞出现明显的DNA梯状条带。结论：大黄
素对体外培养的HUVEC的增殖具有抑制作用，而这种作用可能是通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而产生的。
关键词 大黄素；人脐静脉血管内皮细胞；MTT法；DNA梯状条带
Effect of Emodin on Endothelial Cells of Human Umbilical Vein
YU Hai-bin，CUI Lin，ZHOU Shu-juan，LI Qiang，LIU Wei-hong，WANG Xiao-xiao（Central Laboratory，The
First Affiliated Hospital of Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effect of emodin on the proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial
cells（HUVEC）. METHODS：The HUVEC were cultured with different concentration of emodin（10，20，40，80 μmol·L-1）in vi-
tro. The effect of emodin on the proliferation of HUVEC was evaluated by MTT assay. The effect of emodin on the morphology of
HUVEC was observed. The DNA ladder was used to observe the effect of emodin at different concentrations on the apoptosis of
HUVEC. RESULTS：The different concentration of emodin inhibited the proliferation of HUVEC significantly and induced the mor-
phological change of cells at 24 h，48 h and 72 h after treatment. Obvious DNA ladder was observed at 72 h after treatment. CON-
CLUSION：Emodin can inhibit the proliferation of HUVEC，which promotes the apoptosis of HUVEC.
KEY WORDS Emodin；Human umbilical vein endothelial cells（HUVEC）；MTT method；DNA ladder
Δ河南省科技发展计划项目（092300410057）
＊副主任医师，博士。研究方向：心血管疾病。电话：0371-
66281545
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临床上许多中草药在治疗心血管疾病中具有较好的疗效，
因此中药成分对心血管疾病的作用已成为关注的热点[1]。大黄
素（1，3，8-三羟基-6-甲基蒽醌）是一种广泛存在的天然蒽醌
类化合物，有文献[2]报道其能够抑制鼠白血病L1210细胞的生
长，随后发现其对多种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。更深
入的研究发现，大黄素抑制细胞增殖的能力受到细胞自身增
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