全 文 ：5 讨 论
注射用丹参多酚酸溶液的颜色为黄色或淡黄色，6
批注射用丹参多酚酸如仅用目视法观察，无法分辨出
颜色的区别，均为黄色或淡黄色。色差计测定溶液的
颜色，能将溶液的颜色定量的表述。色差值△E* 则准
确测出 6 批溶液颜色的差别，6 批注射用丹参多酚酸
溶液的颜色色差值均小于标准黄色比色液 3 号，但是
色差计法将溶液颜色定量化，具有较好分辨作用。在
方法学稳定性考察中，随着时间的延长，溶液颜色的色
差值有加深的趋势，可能是酚酸类物质在放置时间延
长的过程中发生了降解。所以，我们测定丹参多酚酸
溶液的其他指标时，最好在刚配置好溶液的 3 h 内进
行测定，保证结果的准确性。
传统采用目测检查药品溶液颜色的方法是通过直
接观察并判定，受个人主观因素影响大，实验结果可信
度差。色差计测定药品溶液颜色通过依托 CIE Lab 色
收稿日期:2012 － 07 － 16
作者简介:徐敏(1978 －) ，女，辽宁阜新人，讲师，硕士，研究方向:药物
分析。
通讯作者:张振秋(1964 －) ，男，教授，博士研究生导师，博士，研究方
向:中药质量研究。
空间，用 CIE Lab三维坐标中一个特定的点来表示某
一特定的颜色，这一方法操作简便、直观、准确，能够对
溶液颜色进行定量判断、结果精准可靠。并且 2000 版
《中华人民共和国药典》开始增加了色差法控制药品
溶液颜色的内容，采用色差法对药品颜色进行测定，能
够定量地对药品颜色进行定量表述，克服了传统目视
法定性判定，主观性大的不足，所以此方法值得推广。
本实验建立了色差计测定注射用丹参多酚酸溶液颜色
的方法，并对测定 6 批样品进行了验证，结果满意。今
后通过色差法对中药注射剂质量进行控制将成为一种
趋势，对提高中药注射剂安全性也具有重要意义。
参考文献
［1］ 庞青云，柳飞，张洁萍，等． 注射用头孢曲松钠溶液颜色与相关杂
质的研究［J］．中国药品标准，2009，10(2) :102 － 104．
［2］ 周丹丹，王蕴华，李凡，等．注射用益气复脉(冻干)的 HPLC 指纹
图谱研究［J］．药物分析，2009，29(11) :1900 － 1904．
［3］ 余立，庞青云，王承芬，等． 色差计测定溶液的颜色及其在药物分
析中的应用［J］．中国药品标准，2000，1(3) :7 － 9．
［4］ 汤顺清．色度学［M］．北京:北京理工大学出版社，1990:82 － 165．
［5］ 王承芬，庞青云，李慧芬，等．仪器法测定溶液的颜色［J］． 药物分
析杂志，1995，15(4) :61 － 64．
［6］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］． 北京:化学工
业出版社，2005:63 － 65．
HPLC法同时测定青叶胆中獐牙菜苦苷、
龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量
徐敏1，张振秋2
(1. 本溪市化学工业学校，辽宁 本溪 117000;2. 辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)
摘 要:目的:建立青叶胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量测定方法，为控制其质量提供科学依据。方法:
采用高效液相色谱法。色谱条件: 色谱柱为 Phenomsil C18色谱柱( 250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 － 0. 02%磷酸
溶液( 23∶ 77) ;检测波长为 243 nm;流速为 1 mL /min;柱温为 30 ℃。结果: 3 种成分均达到基线分离，獐牙菜苦苷、龙胆苦
苷、獐牙菜苷的线性范围分别为 0． 33 ～ 1． 98 μg( r = 0． 9997) ，0． 16 ～ 0． 96 μg( r = 0． 9999) ，0． 20 ～ 1． 20 μg( r = 0． 9997) ，回
收率分别为 100． 2%，99． 5%，98． 2%。结论:该法快速、准确、稳定，可用于青叶胆药材质量评价。
关键词:高效液相色谱法;青叶胆;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷;獐牙菜苷
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1000 － 1719(2013)01 － 0145 － 03
HPLC Simultaneous Determination of Swertiamarin
Gentiopicroside and Sweroside in Swertia mileensis
XU Min1，ZHANG Zhenqiu2
(1. Benxi Chemical Industry School，Benxi 117000，Liaoning，China;
2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To determinate the contents of the iridoids，swertiamarin，gentiopicroside and sweroside in Swertia
mileensis． Methods:HPLC was used． The samples were separated on a phenomsil C18 column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)with which
eluted with methanol and water(0． 02% phosphoric acid)． The ratio of methanol and water was 23:77． The gradient elution with
flow rate was set at 1． 0 mL /min，with UV detection at 243 nm and column temperature at 30 ℃ ． Results:Thee coilpounds were i-
solated on base line． The linear ranges of swertiamarin，gentiopicroside and sweroside were 0． 33 ～ 1． 98 μg(r = 0． 9997) ，0. 16 ～
0. 96 μg(r = 0． 9997) ，0. 20 ～ 1. 20 μg(r = 0． 9997) ，respectively． The average recoveries were 100. 2%，99． 5% and 98． 2%，re-
·541·辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 1 期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2013.01.151.xum.051
spectively． Conclusion:The method has good reproducibility，and can be used in setting up the method to determinate the contents
and quality control of Swertia mileensis from various habitats．
Key words:HPLC;Swertia mileensis;swertiamarin;gentiopicroside;sweroside
青叶胆为龙胆科獐牙菜属植物 Swertia mileensis
T． N． Ho et W． L． Shih的干燥全草．味苦，微寒，归肝胆
经，具有清肝利胆、清热利湿的功效，用于黄疸尿赤，热
淋涩痛［1］。在云南哈尼族、彝族及周边地区常用于治
疗急性病毒性肝炎及黄疸性肝炎。青叶胆中含有环烯
醚萜苷、黄酮、内酯、齐墩果酸等类成分，具有保肝，解
毒，降酶，抗菌消炎等多种药理作用［2］。本实验采用高
效液相色谱法，对云南地区青叶胆中獐牙菜苦苷、龙胆
苦苷、獐牙菜苷 3 种环烯醚萜苷类成分同时测定。并
比较了青叶胆药材根、茎、叶、花等不同部位中 3 种苷
类成分含量。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
岛津 LC －10A高效液相色谱仪、SPD － 10A 紫外
检测器、LC －10Atvp输液泵、UV － 4802 型紫外可见分
光光度计、AR2140 电子分析天平、AS3120A 超声波清
洗器。
1. 2 药品与试药
獐牙菜苦苷(批号 110785 － 200203)、龙胆苦苷
(批号 110770 － 200510)购于中国药品生物制品检定
所。獐牙菜苷购于广东中山康之源医药科技有限公
司。本实验所用药材均为云南地区野生青叶胆药材，
经辽宁中医药大学药学院鉴定为正品。甲醇为色谱
纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱 Phenomsil C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;
流动相:甲醇 － 0. 02%磷酸溶液(23∶ 77) ;流速:1 mL /
min;柱温:30 ℃;检测波长:243 nm;进样量:10 μL。
2. 2 对照品溶液的制备
分别精密称取獐牙菜苦苷对照品 3. 30 mg、龙胆
苦苷对照品 1. 62 mg、獐牙菜苷对照品 2. 02 mg，置同
一 25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。制成每毫
升分别含獐牙菜苦苷 0. 132 mg，龙胆苦苷 0. 0640 mg，
獐牙菜苷 0. 0810 mg的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
取青叶胆全草及不同部位的粉末 0. 5 g，精密称
定，加甲醇 10 mL，超声提取 2 次，每次 20 min，滤过，合
并滤液置 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过 0. 45
μm微孔滤膜，备用。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察 精密吸取混合对照品 2. 5、
5. 0、7. 5、10. 0、12. 5、15. 0 μL，进样。按上述色谱条件
测定峰面积，以对照品进样量(mg)X 为横坐标、峰面
积值 Y为纵坐标，绘制标准曲线，獐牙菜苦苷的回归
方程为 Y =855012. 98X － 33. 71，r = 0. 9997，龙胆苦苷
的回归方程为 Y = 1321785. 71X － 37. 10，r = 0. 9997，
獐牙菜苷的回归方程为 Y = 2065600. 00X － 62. 55，r =
0. 9997 结果表明獐牙菜苦苷在 0. 33 ～ 1. 98 μg，龙胆
苦苷在 0. 16 ～ 0. 96 μg，獐牙菜苷在 0. 20 ～ 1. 20 μg 范
围内，具有良好的线性关系。
2. 4. 2 精密度试验 精密吸取云南罗平青叶胆供试
品溶液 10 μL，重复进样 5 次，测得峰面积，獐牙菜苦
苷，龙胆苦苷，獐牙菜苷峰面积积分值的 RSD 分别为
0. 9%、1. 9%、2. 1%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 3 稳定性试验 精密吸取云南罗平青叶胆供试
品溶液，在 0、2、4、8、12 h 各进样 10 μL，测其峰面积，
獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷峰面积积分值的
RSD分别为 1. 1%、1. 3%、1. 5%，说明供试品溶液在
12 h内稳定。
2. 4. 4 重复性试验 取云南禄丰青叶胆供试品 5 份，
每份约 0. 5 g，精密称定，照供试品溶液制备方法制备，
每次进样 10 μL，测出獐牙菜苦苷，龙胆苦苷，獐牙菜
苷的含量，结果獐牙菜苦苷，龙胆苦苷，獐牙菜苷含量
的 RSD分别为 1. 5%、2. 1%、1. 9%，表明方法重复性
较好。
2. 4. 5 加样回收率测定 取已知含量云南禄丰的样
品 5 份(含獐牙菜苦苷 6. 48 mg /g，龙胆苦苷 0. 93 mg /
g，獐牙菜苷 1. 68 mg /g)各约 0. 25 g，精密称定，每份分
别精密加入獐牙菜苦苷对照品溶液 5 mL(0. 2202 mg /
mL)、龙胆苦苷对照品溶液 1 mL(0. 3205 mg /mL)、獐
牙菜苷对照品溶液 1. 5 mL(0. 3985 mg /mL) ，照供试品
溶液制备方法制备，求得獐牙菜苦苷平均回收率为
100. 2%，RSD 为 1. 9%;龙胆苦苷平均回收率为
99. 5%，RSD 为 1. 7%;獐牙菜苷平均回收率为
98. 2%，RSD为 2. 0%，见表 1。
表 1 獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷加样回收率试验结果
试验号
称样量
(g)
含量(mg·g － 1)
獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷
测定总量(mg)
獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷
回收量(mg)
獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷
回收率(%)
獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷
1 0. 2418 1. 5668 0. 2248 0. 4062 2. 6645 0. 5527 1. 0150 1. 0977 0. 3279 0. 5848 99. 7 102. 3 101. 5
2 0. 2557 1. 6569 0. 2378 0. 4295 2. 7425 0. 5534 1. 0143 1. 0856 0. 3157 0. 5824 98. 6 98. 5 97. 5
3 0. 2332 1. 5111 0. 2168 0. 3917 2. 6363 0. 5306 0. 9741 1. 1252 0. 3138 0. 5890 102. 2 97. 9 97. 1
4 0. 2484 1. 6096 0. 2310 0. 4173 2. 6919 0. 5486 1. 0063 1. 0822 0. 3176 0. 5788 98. 3 99. 1 98. 2
5 0. 2565 1. 6622 0. 2385 0. 4309 2. 7895 0. 5574 1. 0097 1. 1274 0. 3189 0. 6088 102. 4 99. 5 96. 5
·641· 辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 1 期
2. 5 样品的含量测定
取各产地及不同部位的青叶胆药粉 0. 5 g，制备样
品溶液，测定，结果见表 2，色谱图见图 1。
表 2 样品测定结果
产地 药用部位
獐牙菜苦苷
(mg·g － 1)
龙胆苦苷
(mg·g － 1)
獐牙菜苷
(mg·g － 1)
云南东川 根 1. 64 33. 75 0. 18
茎 1. 27 14. 57 0. 21
叶 3. 08 36. 56 0. 29
全草 2. 29 22. 57 0. 35
云南华宁 根 101. 81 1. 01 0. 25
茎 165. 82 1. 21 0. 31
叶 245. 21 1. 87 0. 08
花 287. 83 1. 67 2. 34
全草 178. 75 1. 24 0. 70
云南元阳 根 55. 84 0. 56 1. 04
茎 128. 32 0. 88 0. 48
花 205. 10 1. 59 3. 41
全草 128. 07 1. 23 1. 31
云南曲靖 茎 149. 43 0. 82 0. 23
花 223. 92 2. 72 1. 35
全草 146. 91 1. 30 0. 54
云南宜良 根 0. 43 6. 21 0. 24
茎 2. 28 9. 81 0. 07
花 13. 22 26. 12 4. 55
全草 5. 68 6. 21 0. 23
云南罗平 根 2. 02 2. 45 0. 28
茎 5. 46 2. 61 9. 35
全草 3. 89 2. 52 2. 21
云南蒙自 根 10. 16 0. 44 0. 21
茎 161. 51 1. 02 0. 00
叶 246. 52 1. 98 0. 18
花 317. 47 1. 63 2. 24
全草 235. 68 1. 54 0. 52
云南禄劝 根 2. 07 3. 28 1. 13
茎 8. 54 3. 68 13. 15
全草 7. 89 3. 34 18. 14
云南禄丰 根 2. 52 0. 64 0. 45
茎 14. 74 1. 79 3. 03
全草 6. 48 0. 93 1. 68
3 结论与讨论
3. 1 检测波长的选择
分别取獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷对照品适
量，在 190 ～ 400 nm 波长范围内，进行紫外光谱扫描，
结果显示獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的最大吸收
分别为 236、254、243 nm，在 243 nm 波长处，3 种苷灵
敏均较高，杂质干扰少，故选择 243 nm为检测波长。
1 獐牙菜苦苷;2 龙胆苦苷;3 獐牙菜苷
图 1 HPLC色谱图
3. 2 色谱条件的选择
比较了甲醇 －水、甲醇 －甲酸 －水、乙腈 －水及甲
醇 －磷酸 －水系统的流动相，结果甲醇 －水系统峰拖
尾，甲醇 －甲酸 －水系统有倒峰，乙腈 －水系统杂质峰
较多，最后选定甲醇 － 0. 02%磷酸溶液(23 ∶ 77)为流
动相，该条件下 3 种苷类成分达到基线分离，且峰型对
称，保留时间适中。
3. 3 提取方法的考察
通过以甲醇为溶剂，比较回流提取和超声提取 2
种方法，结果表明，回流提取 4 h和超声 30 min含量相
当，确定用甲醇超声的提取方法。对超声提取的时间，
提取次数，提取溶剂用量进行了三因素三水平的正交
实验考察，确定最佳提取方法为:超声提取 2 次，每次
20 min，每次加 20 倍药材量的甲醇。
青叶胆的主产地为云南，本实验收集了云南地区
9 个产地的野生青叶胆药材，实验结果表明由于生长
环境等因素差异，有效成分的含量差别大。总体上獐
牙菜苦苷含量高，獐牙菜苷含量低。云南蒙自地区青
叶胆苷类成分含量最高。青叶胆不同部位含量测定结
果显示，3 种苷类成分的含量分布趋势基本一致:以花
叶中含量较高，根茎中含量较低，故而本类药材应以花
期采收为佳。
本文采用反高效液相色谱法，同时测定獐牙菜苦
苷，龙胆苦苷，獐牙菜苷的含量，多指标含量分析，为指
导该药物的合理开发利用及临床用药提供质量控制的
客观依据。
参考文献
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典 2005 版:一部［S］．北京:
化学工业出版社，2005．
［2］ 宋万杰．龙胆科的资源植物 －“青叶胆”和“藏茵陈”［J］．中药材，
1991，14(7) :15 － 17．
·741·辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 1 期