全 文 ：129
China Pharmaceuticals
2015年 11月 5日 第 24卷第 21期
Vol． 24，No． 21，November 5，2015
高效液相色谱双波长法同时测定猴耳环消炎片中
没食子酸和槲皮苷含量
陈 军 1，罗德珍 2，李镜友 1，张志坚 1，任锦文 1，沈 艺 1
(1． 广州市花城制药厂，广东 广州 510555; 2． 广东省从化市疾病预防控制中心，广东 广州 510900)
摘要:目的 建立同时测定猴耳环消炎片中没食子酸和槲皮苷含量的高效液相色谱 (HPLC)法。方法 采用 HPLC双波长法，以 Hypersil
BDS － C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)为色谱柱，以乙腈为流动相 A、0． 2%磷酸为流动相 B进行梯度洗脱，没食子酸检测波长为 270 nm，
槲皮苷检测波长为 350 nm。结果 没食子酸及槲皮苷进样量分别在 0． 60 ～ 6． 00 μg，0． 03 ～ 0． 30 μg ( r = 0． 999 4 )范围内与峰面积线
性关系良好;没食子酸平均回收率为100． 24%，RSD 为 1． 02%(n = 6);槲皮苷平均回收率为99． 88%，RSD 为 1． 17%(n = 6)。结论
HPLC双波长法简便可行、重复性好，适用于猴耳环消炎片 2 种有效成分的同时测定，可用于猴耳环消炎片的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;猴耳环消炎片;没食子酸;槲皮苷
中图分类号:R284． 1;R286． 0 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2015 )21 － 0129 － 02
Content Determination of Gallic Acid and Quercitroside in Houerhuan Xiaoyan Pills by
HPLC Dual Wavelength Method
Chen Jun1， Luo Dezhen2， Li Jingyou1， Zhang Zhijian1，Ren Jinwen1， Shen Yi1
(1． Guangzhou Huacheng Pharmaceutical Factory， Guangzhou，Guangdong，China 510555; 2． Conghua Center for Disease Control and Prevention，
Guangzhou，Guangdong，China 510900)
Abstract: Objective To establish an HPLC method for simultaneous detection of Gallic acid and Quercitroside in Houerhuan Xiaoyan
Pills．Methods The HPLC dual wavelength spectrophotometry was used with Hypersil BDS － C18 (250 mm × 4． 6 mm，5 μm) column; with
acetonitrile as mobile phase A，0． 2% phosphoric acid as mobile phase B，for gradient elution; the detection wavelength of gallic acid was
270 nm; the detection wavelength of quercitroside was 350 nm． Results The linear relations were good of gallic acid in the range of
0． 60 － 6． 00 μg( r = 0． 999 4) and quercitroside in the range of 0． 03 － 0． 30 μg( r = 0． 999 4 ) ; the average recovery of gallic acid was
100． 24% ，RSD 1． 02%(n = 6); the average recovery of quercitroside was 99． 88%，RSD 1． 17%(n = 6)． Conclusion HPLC dual wavelength
determination is simple and feasible，with good reproducibility，is suitable for the simultaneous determination of the active ingredients in
Houerhuan Xiaoyan Pills，and can be used for quality control of Houerhuan Xiaoyan Pills．
Key words:HPLC; Houerhuan Xiaoyan Pills; gallic acid; quercitroside
[2 ] YBZ00612005，国家食品药品监督管理局标准(试行)[ S ] ．
[ 3 ] 吴玫涵，聂凌云 ． 气相色谱 －质谱法分析不同产地小茴香药材挥发
油成分 [ J ] ． 药物分析杂志，2001，21 (6 ) : 415 － 418．
[ 4 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典(一部)[M ] ． 北京:中国医药
科技出版社，2010:51．
[ 5 ] 楼之岑，秦 波 ． 常用中药材品种整理和质量研究(第 6 册)[M ] ． 北
京:北京大学医学出版社，2003:549 － 569．
[ 6 ] 帕提古丽·马合木提，高 莉 ． 时间对小茴香挥发油成分的影响 [ J] ．
食品科学，2005，26(11):190 － 191．
(收稿日期:2015 － 05 － 27 )
表 1 梯度洗脱条件表
时间(min)
0 ～ 15
15 ～ 25
25 ～ 27
27 ～ 40
流动相 A(%)
0→25
25
25→30
30
流动相 B(%)
100→75
75
75→70
70
猴耳环消炎片 (糖衣片 )为猴耳环药材单味制剂，具有清热解
毒、凉血消肿等功效 [ 1 ]。本品主要含没食子酸、槲皮苷和联苯三
酚 [ 2 － 4 ]等成分。而没食子酸、槲皮苷是猴耳环消炎、止咳的主要有
效成分 [ 5 ]。另外，没食子酸还有抗菌、抗病毒 [6 ]和抗肿瘤 [7 ]作用。猴耳
环消炎片部颁标准和局颁标准中均只有没食子酸的薄层色谱鉴别，
无法有效控制产品质量。本研究中选择没食子酸、槲皮苷作为主要
检测指标，并首次建立高效液相色谱(HPLC)双波长法，用于同时测
定猴耳环消炎片中没食子酸和槲皮苷的含量，现报道如下。
1 仪器与试药
LC － 10AD型高效液相色谱仪，SPD － M20A型 PDA检测器，
LC － Solution 工作站(日本岛津公司)。对照品没食子酸(批号为
110831 － 200803)和槲皮苷(批号为 111538 － 200403)均购自中
国食品药品检定研究院;猴耳环消炎片(广州市花城制药厂，批号
为 20110317，20110422，20110435); 乙腈为色谱纯，水为重蒸馏
水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱:Hypersil BDS － C18 柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm); 流
动相 : A 为乙腈，B 为 0． 2%磷酸水溶液，梯度洗脱 (见表 1 ); 流
速: 1 mL /min;柱温:室温;检测波长: 270 nm(没食子酸)、350 nm
(槲皮苷 );进样量:10 μL。各待测组分分离度均大于 1． 5，理论板
数均不低于 3 000。
2．2 溶液制备
精密称取没食子酸和槲皮苷对照品适量，用甲醇配成含没食
子酸 0． 30 g / L、槲皮苷 15 μg /mL的混合溶液，即得对照品溶液。
取本品除去包衣，研细，取 0． 4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精
密加入乙腈 － 0． 2%磷酸(25 ∶ 75)50 mL，密塞，称定质量，超声处
理(功率 300 W，频率 25 kHz)20 min，放冷，再称定质量，用溶剂补
足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2．3 方法学考察
专属性试验: 根据处方及生产工艺制备缺猴耳环的阴性样
品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液，取对照品溶液、
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
·药物鉴定·
Drug Identification
130
China Pharmaceuticals
2015年 11月 5日 第 24卷第 21期
Vol． 24，No． 21，November 5，2015
A1，A2． 对照品溶液 B1，B2． 供试品溶液 C1，C2． 阴性对照品溶液
图 1 － 1 高效液相色谱图(270 mm) 图 1 － 2 高效液相色谱图(350 mm)
供试品溶液及阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果，
阴性样品对测定无干扰，见图 1。
线性关系考察: 精密吸取对照品溶液2，4，8，10，15，20 μL，
按拟订色谱条件进样测定，以进样量(X，μg)为横坐标、峰面
积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程，没食子酸为 Y =
5． 292 × 106 X － 3． 007 × 105 ( r = 0． 999 4 )，槲皮苷为 Y = 2． 593 ×
106 X － 7． 514 × 103 ( r = 0． 999 4 )。结果表明，没食子酸、槲皮苷进
样量分别在 0． 60 ～ 6． 00 μg 和 0． 03 ～ 0． 30 μg 范围内与峰面积
线性关系良好。
精密度试验:取同一对照品溶液，按拟订色谱条件，重复测定
6 次。结果，没食子酸和槲皮苷峰面积的 RSD 分别为 1． 40%和
0． 93%(n = 6)，表明仪器精密度良好。
重复性试验:取同一批样品(批号为 20110317)，按拟订方法
制备供试品溶液 6份，按拟订色谱条件分别进样测定含量。结果，
没食子酸和槲皮苷平均含量分别为 45． 66 mg / g 和 1． 06 mg / g，
RSD分别为 0． 53%和 0． 93%(n = 6)，表明该方法重复性良好。
稳定性试验:取同一供试品(批号为 20110317)溶液，按拟订
色谱条件分别于 0，4，8，12，24，36，48 h 时进样测定。结果，没食
子酸和槲皮苷峰面积的 RSD分别为 0． 78%和 0． 65%(n = 7)，表
明供试品溶液在 48 h内稳定。
加样回收试验:取已知含量的同一批样品(批号为 20110317，
分别含没食子酸和槲皮苷 45． 66 mg / g 和 1． 06 mg / g)约 0． 25 g，
精密称定，共 6 份，置具塞锥形瓶中，加入相应量的没食子酸对照
品溶液(6． 02 g / L)2 mL 和槲皮苷对照品溶液(0． 28 g / L)1 mL，
按供试品溶液制备方法制备待测溶液，按拟订色谱条件进样测
定含量，计算回收率。结果见表 2。
样品含量 ( g ) 取样量 (mg ) 加入量 (mg ) 测得量 (mg ) 回收率 (% ) X (% ) RSD(%)
表 2 没食子酸和槲皮苷加样回收试验结果(n = 6)
注:A为没食子酸，B为槲皮苷。
A
0． 258 1
0． 254 2
0． 250 6
0． 255 9
0． 257 2
0． 253 3
B
0． 258 1
0． 254 2
0． 250 6
0． 255 9
0． 257 2
0． 253 3
A
11． 77
11． 60
11． 43
11． 67
11． 73
11． 56
B
0． 27
0． 27
0． 27
0． 27
0． 27
0． 27
A
12． 04
12． 04
12． 04
12． 04
12． 04
12． 04
B
0． 28
0． 28
0． 28
0． 28
0． 28
0． 28
A
23． 71
23． 55
23． 61
23． 84
23． 74
23． 65
B
0． 554
0． 549
0． 546
0． 551
0． 552
0． 546
A
99． 17
99． 25
101． 16
101． 66
99． 75
100． 42
B
101． 43
99． 64
98． 57
100． 36
100． 71
98． 57
A
100． 24
B
99． 88
A
1． 02
B
1． 17
2．4 样品含量测定
分别取 3 批样品各 3 份，按拟订方法制备供试品溶液并进
样测定。结果批号为 20110317，20110422，20110435 的样品中没
食子酸的含量分别为 45． 60，45． 12，45． 12 mg / g，RSD 分别为
0． 24% ，0． 88% ，0． 64% (n = 3); 槲皮苷的含量分别为1． 04，
1． 05，1． 15 mg / g，RSD分别为 0． 82%，1． 21%，0． 91%(n = 3)。
3 讨论
取没食子酸与槲皮苷甲醇溶液，在 200 ～ 400 nm 波长间进
行紫外扫描，结果没食子酸在(215 ± 2)nm 和(270 ± 2)nm 波长
处有最大吸收，槲皮苷在(256 ± 2)nm和(350 ± 2)nm波长处有最
大吸收，与文献 [ 5，8 ]所收载的紫外吸收波长一致。为了排除相互
的干扰，选用 270 nm作为没食子酸检测波长，350 nm作为槲皮苷
检测波长。
用甲醇、乙腈 － 0． 2%磷酸(25 ∶ 75)、水 －甲醇 －乙腈(450 ∶
50 ∶ 1)、乙腈 －磷酸盐缓冲液等作溶剂，对溶剂的量、超声时间
进行试验，结果用乙腈 － 0． 2%磷酸(25 ∶ 75)作为溶剂，超声处
理 20 min最理想。
猴耳环药材中鞣质类成分在煎煮过程中水解为没食子酸，随
着煎煮时间的延长，没食子酸含量呈上升趋势 [ 9 ]。但实际生产工
艺中煎煮时间如何确定，还应进行更多的没食子酸热分解和动力
学研究 [10 ]。
参考文献:
[ 1 ] WS3 － B － 1248 － 92． 卫生部药品标准·中药成方制剂 (第六册 )·猴
耳环消炎片 [ S ] ．
[ 2 ] 王永刚，淡 墨，李咏华，等 ． 猴耳环化学成分的研究 [ J ] ． 中药材，
2005，28 (9 ):774 － 775．
[ 3 ] 苏妙贤，唐之岳，黄伟欢，等 ． 猴耳环化学成分研究 [ J ] ． 中药材，
2009，32 (5 ):705 － 707．
[ 4 ] 张志坚，李镜友，李国强 ． 猴耳环研究进展 [J]． 中国药业，2010，19(18):
82 － 84．
[ 5 ] 柯铭清 ． 中草药有效成分理化与药理特性 [M ] ． 第 2 版 ． 长沙:湖南
科学技术出版社，1982:105 － 106，233．
[ 6 ] 江纪武，肖庆祥 ． 植物药有效成分手册 [M ] ． 北京:人民卫生出版社，
1986:479．
[ 7 ] 季宇彬，张广美 ． 中草药抗肿瘤有效成分药理与应用 [M ] ． 哈尔滨:
黑龙江科学技术出版社，1998:239．
[ 8 ] 陈德昌 ． 中药化学对照品工作手册 [M ] ． 北京: 中国医药科技出版
社，2002:106．
[ 9 ] 朱诗塔，李新中，雷 鹏，等 ． 不同煎煮法对大黄没食子酸含量的影
响及与小肠推进作用的相关性 [ J ] ． 中南药学，2008，6(6):714 － 717．
[ 10 ] 郭满满，肖卓炳，彭密军，等 ． 没食子酸的热稳定性研究 [ J ] ． 林产化
学与工业，2012，32(4):58 － 62．
(收稿日期:2015 － 01 － 27;修回日期:2015 － 06 － 24 )
800
600
400
200
0
mAU
t / min
A1
0 10 20 30 40 50
t / min
A2
0 10 20 30 40 50
mAU
60
40
20
0
mAU
t / min
B1
t / min
B2
0 10 20 30 40 50
mAU
0 10 20 30 40 50
60
40
20
0
1 000
500
0
mAU
t / min
C1
t / min
C2
0 10 20 30 40 50
mAU
0 10 20 30 40 50
20
15
10
5
0
30
20
10
0
·药物鉴定·
Drug Identification