全 文 ：RP -HPLC法测定不同产地青叶胆中齐墩果酸的含量
徐 敏,张振秋
(辽宁中医药大学药学院,辽宁 大连 116600)
摘 要: 目的:建立反相高效液相色谱法测定青叶胆中齐墩果酸含量的方法。方法: 采用反相高效液相色谱法。色
谱条件: 色谱柱为 Phenom silC
18
色谱柱 ( 150mm @ 4. 6mm, 5Lm );流动相为乙腈 -水 -冰乙酸 ( 90B10B0. 1); 检测波长为
205nm; 流速为 1mL /m in; 柱温为 30e 。结果:齐墩果酸的线性范围为 0. 535~ 3. 210Lg( r = 0. 9997), 回收率为 101. 1% ,
RSD为 2. 2%。结论: 本法简便,准确、稳定,可用于青叶胆药材质量评价。
关键词: 高效液相色谱法;青叶胆;齐墩果酸
中图分类号: R284. 1 文献标识码: B 文章编号: 1000 - 1719( 2008) 01 -0110 - 02
RP -HPLC Determ ination ofO leanolie Ac id of in SwertiaM ileensis
XU M in, ZHANG Zhen-q iu
(Pharmacy Co llege, L iaon ing University o f TCM, D alian 116600, L iaoning, Ch ina )
Abstrac t: Ob jective: To estab lish a quan tita tive m e thod of de te rm ina tion o f oleano lie acid of sw ertia m ileensis by RP -
HPLC. M ethod : By RP -HPLC The samp les w ere sepa ra ted on an phenom sil C18 co lum n( 150mm @ 4. 6mm, 5Lm ) w ith which e-
lu ted w ith ace ton itrile - w a te r- ace tic acid( 90B10B0. 1) , g radient e lution w ith flow rate a t 1. 0 mL# ra in w ith UV de tection a t
205 nm and co lum n temperature at 30 e . Results: The linear ranges of o leano lie ac id we re 0. 535 ~ 3. 210Lg. Lg ( r =
0. 9997). The average recoveries w ere 101. 1% ( RSD= 2. 2% ). Conclusions: The me thod is simp le, accu ra te and has good re-
produc ib ility, and can be used in se tting up them e thod to de te rm ina te the contents and qua lity control o f swe rtia m ileensis from
va rious hab itats.
K eywords: RP -H PLC; sw ertia m ileensis; o leano lie acid
收稿日期: 2007 - 07 - 11
作者简介:徐敏 ( 1978 - ) ,女,辽宁阜新人,硕士研究生。
通讯作者:张振秋 ( 1964 - ) ,男,教授,博士生导师,博士,研究方向:中
药质量研究。Te:l 0411 - 87586058, E - m ai:l zhangzhenqiu@
s ina. com。
青叶胆为龙胆科獐牙菜属植物青叶胆 Swertia
m ileensis T. N. Ho e tW. L. Shih的干燥全草,味苦,微寒,
归肝胆经,具有清肝利胆,清热利湿的功效 [1]。用于黄
疸尿赤,热淋涩痛。在云南哈尼族、彝族及周边地区常
用于治疗急性病毒性肝炎,及黄疸性肝炎。青叶胆中含
有的齐墩果酸成分,具有消炎, 强心利尿, 抑制 S - 180
瘤株生长, 促进免疫, 抗肝损伤等广泛的临床药理作
用 [2]。本实验采用高效液相色谱法,对云南地区青叶胆
中齐墩果酸的含量进行测定。并比较了青叶胆药材根、
茎、叶、花等不同部位中齐墩果酸的含量, 方法快速、准
确、稳定,为控制与评价药材的质量提供科学的依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 LC) 10AT高效液相色谱仪; LC) 10AT
紫外检测器; AS3120A超声波清洗器; AR2140电子分
析天平。
1. 2 试药 齐墩果酸对照品 ( 110709 - 200304)纯度
为 98. 6% ,由中国药品生物制品检定所提供; 云南青
叶胆药材,经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为正品;乙
腈为色谱纯,水为重蒸水; 其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱: Phenomsil C18 ( 5Lm, 150mm
@ 4. 6mm )柱;流动相: 乙腈 -水 -冰乙酸 ( 90B10B0.
1) ;检测波长: 205nm; 柱温: 30e ; 流量: 1mL /m in;在此
色谱条件下,理论塔板数按齐墩果酸对照品峰计算均
不少于 3000。
2. 2 对照品溶液制备 精密称取齐墩果酸对照品
21. 44mg, 置 100m l量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻
度,摇匀,作为对照品溶液。
2. 3 供试品溶液制备 取青叶胆药材细粉 1g, 精密
称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 25m ,l称重, 超
声提取 30m in, 称重, 补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 作
为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液
2. 5, 5. 0, 7. 5, 10. 0, 12. 5, 15. 0LL进样,按上述色谱条
件测定峰面积, 以对照品进样量 X为横坐标、峰面积
值 Y为纵坐标, 绘制标准曲线, 回归方程为: Y =
274045X - 15492, r = 0. 9998, 结果表明齐墩果酸在
0. 535~ 3. 210L g范围内,具有良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取云南宜良青叶胆样品制备
的供试品溶液 10LL,重复进样 5次, 测定齐墩果酸峰面
积,求得相对标准偏差为 0. 3%,表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取云南宜良青叶胆样品制
备的供试品溶液 10LL, 每隔一段时间进样, 测定齐墩
果酸峰面积值,求得相对标准偏差为 0. 8%, 结果表明
供试品溶液在 12h内稳定。
2. 7 重复性试验 取云南宜良青叶胆样品 5份, 每
份约 1g,精密称定,照供试品制备方法制备, 按样品测
定方法操作, 进样 10LL, 计算 5份样品含量的相对标
准偏差为 1. 3% ,结果表明本法重复性较好。
2. 8 加样回收率试验 取已知含量云南宜良青叶胆
样品 (齐墩果酸含量为 5. 63mg /g) 5份,每份约 0. 5g,精
密称定, 精密加入齐墩果酸对照品溶液 13mL ( 0.
2144mg /mL),照供试品溶液制备方法制备,求得平均回
收率为 101. 1%;相对标准偏差为 2. 2%。结果见表 1。
表 1 齐墩果酸回收率试验
序号 样品重
( g)
供试品含量
( mg)
对照品加入量
( mg)
实测值
( mg)
测得加入量
(mg)
回收率
(% )
平均值
(% )
RSD
(% )
1 0. 5423 3. 05 2. 782 5. 80 2. 75 98. 8
2 0. 5332 3. 00 2. 782 5. 78 2. 78 99. 9
3 0. 5103 2. 87 2. 782 5. 75 2. 88 103. 3 101. 1 2. 2
4 0. 5008 2. 82 2. 782 5. 70 2. 88 103. 4
5 0. 5213 2. 93 2. 782 5. 72 2. 79 100. 3
2. 9 样品的测定 取不同产地及不同药用部位的青
叶胆药材细粉,照供试品溶液制备方法制备,精密吸取
供试品溶液 10LL进样,注入液相色谱仪, 按上述色谱
条件分别测定,结果见表 2。
#110# 辽宁中医杂志 2008年第 35卷第 1期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2008.01.114.xum.060
收稿日期: 2007 - 08 - 27
作者简介:巴根那 ( 1960 - ),男, (蒙古族 ) ,内蒙古赤峰人,教授,硕士研究生
导师,学士,主要从事蒙药制剂及蒙成药质量研究工作。
表 2 样品测定
编号 产地 药用部位 獐牙菜苷 (m g# g - 1 )
1 云南东川 根 0. 17
茎 0. 53
叶 0. 84
全草 0. 45
2 云南华宁 根 4. 44
茎 15. 60
叶 20. 31
花 20. 70
全草 14. 23
3 云南元阳 根 0. 31
茎 1. 38
花 5. 68
全草 2. 27
4 云南曲靖 茎 1. 02
花 7. 79
全草 2. 60
5 云南宜良 根 1. 62
茎 9. 99
花 9. 91
全草 5. 63
6 云南罗平 根 0. 96
茎 3. 88
全草 1. 82
7 云南蒙自 根 6. 01
茎 7. 24
叶 12. 1
花 16. 3
全草 12. 31
8 云南禄劝 根 0. 52
茎 5. 36
全草 7. 14
9 云南禄丰 根 2. 54
茎 8. 38
全草 6. 33
3 讨 论
3. 1 测定波长的选择 取齐墩果酸对照品溶液, 在
190~ 400nm范围内进行紫外扫描, 齐墩果酸最大吸收
波长为 202. 5nm,对不同波长的色谱图进行比较,最终
选择 205nm为检测波长, 因为此条件下, 检测器灵敏
度高,峰形好。
3. 2 流动相的选择 笔者先试用了单纯的甲醇水系
统,但峰形不好, 故加入冰乙酸, 调节 pH值, 结果对峰
形和峰位影响较大。当甲醇 -水 -冰乙酸比例为 90
B10B0. 1时峰形较好, 峰位适中, 但基线向上漂移严
重,影响分离度。最后将甲醇换为乙腈,与水和酸的比
例不变,即乙腈B水B冰乙酸 ( 90B10B0. 1 ), 此时基线
较稳,峰形良好, 且与多种非待测成分完全分离。
3. 3 提取方法的确定 本实验比较了氯仿索氏提取
和甲醇超声提取两种方法。结果无明显差异, 甲醇超
声提取效率较高,操作简便,故采用此法。对超声提取
的时间进行考察,比较了超声 20, 30, 40m in的含量, 结
果表明,超声提取 30m in可将齐墩果酸提取完全,故以
超声提取 30m in作为供试品溶液提取方法。
3. 4 青叶胆的主产地 本实验收集了云南地区 9个
产地的野生青叶胆药材,实验结果表明由于生长环境
等因素差异,含量差别大。且青叶胆不同部位含量测
定结果显示,齐墩果酸的含量分布趋势是花叶中含量
较高,根茎中含量较低,故而提示本类药材应以花期采
收为佳,在采收过程中,应尽量减少花、叶的损失。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S ].北京:化学工业出版
社, 2005.
[ 2 ] 田丽婷,马龙,堵年生. 齐墩果酸的药理作用研究概况 [ J ]. 中国
中药杂志, 2002, 27 ( 12) : 884 - 886.
HPLC法测定蒙药阿那日五味散中胡椒碱的含量
巴根那 1,吴香杰 1,包桂花 1,白鲜子 2
( 1. 内蒙古民族大学蒙医药学院, 内蒙古 通辽 028000; 2.内蒙古民族大学 2007届药物制剂专业毕业生,内蒙古 通辽 028000)
摘 要: 目的:建立蒙药阿那日五味散中胡椒碱的高效液相含量测定方法。方法:使用 C18色谱柱 ( 150mm @ 40mm ),甲醇 ) 水 ( 77 B23)为流动相, 流速为: 0. 6m L /m in,检测波长: 343nm。结果:胡椒碱的线性范围为 0. 0285 ~ 0. 1425Lg, ( r
= 0. 9999)。平均回收率为 98. 33% , RSD= 0. 98%。结论: 该实验方法简便易行, 结果准确可靠,可用于蒙药阿那日五味
散质量控制指标。
关键词: 高效液相色谱法;蒙药阿那日五味散;胡椒碱; 含量
中图分类号: R284. 2 文献标识码: B 文章编号: 1000 - 1719( 2008) 01 -0111 - 02
Determ ination of P iper ine inM ongolianM ed icineAnar iwuweisan the Content ofHPLC
BA Gen-na1, WU X iang-jie1, BAO G ui-hua1, BA IX ian-z i2
( 1. Inner Mongo lia University for Na tionalities o f Mongo lian Med icine Tong liao 028000, inner mongo lia, China;
2. G rade 2007 graduate pharmaceutical p repara tion o f Inner Mongo lia Universities for na tionnalities, Tonq liao 028000, InnerMongo lia, China)
Abstrac t: O b jective: F inding them ethods of de term ining the h igh e fficiency liquid phase con tent of pepper a lka li inM ongo-
lian m edicine Anariwuw eisan FSA Pow de r. Methods: Using , C18 co lo r spectrum co lumn, m ethano l -wa ter( 77B23) be ing mobile
phase; Ve loc ity of flow ing: 0. 6mL /m in; Exam ining w ave length: 343nm. R esu lt: Linear range o f pepper a lkali is 0. 0285~ 0.
1425Lg, and the average recovery rate is 98. 33% , RSD= 0. 98% . Conc lus ion: The ways o f the experiment is easy to operate,
and the resu lt is reliable. It can be used as the qua lity controlling indicator ofM ongo lian m ed icine Ana riwuwe isan FSA Powde r.
K eywords: HPLC; M ongo lian m edic ine Ana riwuwe isan FSA Pow de r; pepper alka l;i con tent
蒙药阿那日五味散为临床常用蒙药制剂, 由石榴、 豆蔻、干姜、荜茇、肉桂等五味药组成。具有温胃、消食
#111# 辽宁中医杂志 2008年第 35卷第 1期