全 文 ：2010 年 1 月第 17 卷第 1期 中国中医药信息杂志 ·47·
HPLC 法测定阔叶五层龙中儿茶素类成分的含量
濮 江,冯 锋,谢 宁
(中国药科大学天然药物化学教研室,江苏 南京 210009)
摘要：目的 采用 HPLC 法测定阔叶五层龙中(-)-表儿茶素-(4β→8)-(-)-4’-O-表没食子儿茶素(ECEGC)的含
量。方法 用 HYPERSIL C18柱,以甲醇-水(30∶70)为流动相,用紫外检测器于 283 nm 波长处检测。结果 ECEGC 线
性范围为 0.444 8～7.116 8 μg(r＝0.999 9),平均回收率为 100.30%。结论 本法具有操作简便,分析快速准确、干
扰小等优点。
关键词：阔叶五层龙；儿茶素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)01-0047-02
Determination of Catechin Compound in Salacia amplifolia by HPLC PU Jiang, FENG Feng, XIE Ning
(Department of Natural Medicinal Chemistry, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China)
Abstract：Objective To determine the content of ECEGC in Salacia amplifolia by HPLC. Method
HYPERSIL C18 column was used with a mixture of methanol and water (30∶70) as mobile phase, and
detected at 283 nm. Result The linear range was 0.444 8～7.116 8 μg (r＝0.999 9) for ECEGC. The average
recovery was 100.30%. Conclusion The method is simple, rapid, accurate and reliable.
Key words：Salacia amplifolia；catechin；HPLC；content determination
阔叶五层龙(Salacia amplifolia Merr.ex Chun & F.C.)
为翅子藤科(Hippocrate-aceae)五层龙属(Salacia L.)植物,

通讯作者：冯锋,Tel：025-83271038,E-mail：fengsunlight@
163.com
该属植物在世界分布于热带地区约有 100 多种,我国有 10 种,
集中分布于海南、广东、广西一带[1]。笔者分离得到并鉴定了
化合物(-)-表儿茶素-(4β→8)-(-)-4’-O-表没食子儿茶素
(ECEGC),该化合物经国外学者研究具有显著的降脂减肥作
用[2]。迄今,国内外文献均未见有关该植物中该化合物含量测

2.6 重复性试验
取同一批药材 5 份,按样品含量测定方法分别测定齐墩果
酸含量,其平均值为 1.46%,RSD＝1.15%。
2.7 加样回收率试验
采用加样回收法,精密称取已测定含量的同一批药材 5 份,
每份约 0.5 g,分别精密加入浓度为 0.731 2 mg/mL 齐墩果酸对
照品溶液 10 mL,挥干甲醇后,再按“2.2.1”项下方法处理,测
定含量,并计算回收率。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
取样量
(g)
含齐墩果酸
量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0.500 1 7.291 5 7.312 14.694 1 101.24
0.501 9 7.317 7 7.312 14.635 2 100.08
0.501 0 7.304 6 7.312 14.448 2 97.70 99.69 1.76
0.501 1 7.306 0 7.312 14.472 8 98.01
0.499 9 7.288 5 7.312 14.704 4 101.42
2.8 含量测定
经采用外标法测定 3 批龙芽楤木药材,齐墩果酸含量分别
为 1.46%、1.20%、1.81%。
3 分析与讨论
龙芽楤木主要含皂苷类成分,其苷元多为齐墩果酸,故测
定水解后的齐墩果酸含量。如直接采用高浓度盐酸或硫酸进行
水解,虽然水解时间较短,但溶液易炭化变黑,成分破坏较多,
如直接用盐酸-乙醚一定比例进行水解,由于乙醚沸点低,则水
解温度太低,水解时间长且难以水解完全。经试验,采用盐酸-
乙醇(2∶8)溶液进行水解,条件较适合,3 h 可水解完全。
水解后的齐墩果酸难溶于水,可用有机溶剂进行萃取,试
验中比较了几种溶剂,石油醚萃取转移率较低,正丁醇萃取分
层较困难,氯仿毒性较大,而采用乙醚萃取完全,分离速度快,
萃取液颜色浅,杂质少,有利于 HPLC 法分离测定,故选用乙醚
作为萃取溶剂。由于续滤液含有乙醇,能与乙醚互溶,影响萃取,
故萃取前需先将乙醇蒸去。由于齐墩果酸的测定波长接近于紫
外吸收末端,且响应值较低,故不宜采用甲醇作为流动相,而应
采用高纯度的乙腈,并且加入少量磷酸以改善峰形。
龙芽楤木中总皂苷的测定方法,已有文献报道采用薄层扫
描法[1]和比色法[2],但测定方法误差较大。本研究采用 HPLC 法
对龙芽楤木中齐墩果酸含量进行测定,方法简便,快速准确,齐
墩果酸峰分离较好,可为龙芽楤木药材的质量监控提供依据。
参考文献：
[1] 崔树玉,李向高,韩立坤,等.薄层扫描法测定龙牙楤木根皮中总皂甙的
含量[J].吉林农业大学学报,1994,16(S1)：72－74.
[2] 王丽君,姜 虹.龙芽楤木中皂甙含量的测定[J].北华大学学报(自然科
学版),2005,6(5)：419－420.
(收稿日期：2009-05-07,编辑：陈静)
·48· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2010 Vol.17 No.1
定方法研究的报道,因此,本研究采用 HPLC 法测定其在该植物
中的含量,为进一步的研究开发提供了试验依据。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪(LC-20AB,SPD-M20A,CTO-10VS,SIL-
20A),LC solution 色谱工作站,KQ-50B 型超声仪(昆山超声仪
器有限公司)。XT-4 显微熔点测定仪(温度计未校正)；Brucker
ACF-300 及 AV-500 型核磁共振仪(TMS 内标)；ESI-MS 使用
HP-1100 型质谱仪(LC/MSD System,ESI Mode)测定；柱层析和
薄层层析硅胶(青岛海洋化工厂)。
植物采自海南岛甘什岭保护区,经海南大学热带生物工程
研究中心高级工程师黄世满鉴定为翅子藤科植物阔叶五层龙
(Salacia amplifolia Merr.ex Chun & F.C.)。ECEGC 对照品
为自制。甲醇为色谱纯,纯净水为自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：HYPERSIL C18；流动相：甲醇-水(30∶70)；检测
波长：283 nm；流速：1 mL/min；柱温：40 ℃；理论塔板数
按 ECEGC 来计算应不低于 3 000,分离度应大于 1.5。在此条件
下,取供试品溶液、对照品溶液进行专属性考察,结果见图 1。




A B
注：A.供试品；B.对照品
图 1 阔叶五层龙 HPLC 图谱
2.2 检测波长的选择
根据紫外扫描结果在283 nm处有最大吸收,故选用283 nm
作为检测波长。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取ECEGC对照品11.12 mg,用甲醇溶解并定容至10 mL,
得 1.11 mg/mL的对照品储备液。精密量取该储备液0.8 mL置于
10 mL量瓶中,用甲醇定容,制成0.089 mg/mL的对照品溶液。
2.4 对照品纯度测定
对照品储备液作为供试液Ⅰ。精密吸取上述溶液 0.2 mL 置
10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得供试液Ⅱ。吸取供试液Ⅰ、
Ⅱ,定量环(10 μL)进样,测定,经计算得对照品纯度为 99.25%。
2.5 供试品溶液的制备
取药材适量,粉碎成细粉,取约 1 g,精密称定,加入乙酸乙
酯 25 mL,回流提取 2 次,合并提取液,蒸干,以甲醇超声溶解
(功率 50 W,频率 40 kHz),用 0.45 μm 微孔滤膜滤过,甲醇定容
至 1 mL,作为供试品溶液。
2.6 标准曲线的绘制
精密吸取 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL 的上述对照品储
备液,用甲醇定容至 5 mL,摇匀,分别精密吸取 20 μL 注入色谱
仪。以峰面积为纵坐标,对照品浓度为横坐标,进行线性回归。
回归方程为：Y＝29 390.65X -91 836.83,r＝0.999 9。结果表
明,在浓度 0.444 8～7.116 8 μg 范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
取“2.3”项下对照品溶液连续进样 6 次,其 RSD＝0.84%。
表明精密度良好。
2.8 稳定性试验
取“2.5”项下供试品溶液,室温放置,在 0、4、8、12 h 各
进样测定1次,结果其RSD＝0.78%,表明样品溶液在12 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
取已知含量的药材 0.5 g(9 份),按 80%、100%、120%比例
分别加入对照品溶液,按“2.5”项下方法制备溶液。按上述色
谱条件分别进样 20 μL,记录色谱图,结果表明,本法具有良好
的回收率,平均回收率为100.30%,RSD＝0.85%。结果见表1。
表 1 加样回收率测定结果
称样量
(g)
ECEGC 含量
(mg)
加样量
(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0.506 0 0.046 1 0.036 4 0.082 7 100.24
0.500 5 0.045 6 0.036 4 0.082 1 100.12
0.503 7 0.045 9 0.036 4 0.082 2 100.00
0.504 9 0.045 9 0.045 5 0.091 5 100.01
0.499 5 0.045 5 0.045 5 0.090 7 99.67 100.30 0.85
0.500 5 0.045 6 0.045 5 0.090 2 99.01
0.507 1 0.046 2 0.055 2 0.101 7 100.29
0.500 5 0.045 6 0.055 2 0.102 6 101.78
0.507 1 0.046 2 0.055 2 0.102 9 101.47
2.10 样品含量测定
分别取 3 批海南产阔叶五层龙药材,按“2.5”项下方法依
法制备供试液,按上述色谱条件测定,测得海南产阔叶五层龙
中 ECEGC(C31H28O13)平均含量为 93 μg/g。结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
批号 ECEGC 含量(μg/g) 平均含量(μg/g)
1 96
2 90 93
3 93
3 讨论
文献[3]中以甲醇-水(25∶75)为流动相进行化合物分离,
本试验参考其流动相系统并进行微调,选择甲醇-水(30∶70)
作为流动相,对照品峰获得了良好的分离效果,且在主峰附近
无干扰峰出现,因此确定使用该色谱条件。
因本试验进行时间有限,没有对其他产地的阔叶五层龙植
物以及五层龙属的其他植物中同样成分进行含量测定,但本研
究为其他同种同属植物的进一步研究提供了可靠的依据。方法
操作简便,结果准确可靠。
参考文献：
[1] 广东省植物研究所.海南植物志[M].北京：科学出版社,1965.443.
[2] Yoshikawa M, Shimoda H, Nishida N, et al. Salacia reticulata
and its polyphenolic constituents with lipase inhibitory and
lipolytic activities have mild antiobesity effects in rats[J].
Journal of Nutrition,2002,132(7)：1819.
(收稿日期：2009-05-11,编辑：陈静)
t/min