全 文 ：不同产地余甘子酚酸类成分ＨＰＬＣ指纹图谱研究
王　飞１，包永睿１，２，孟宪生１，２＊，王　帅１，２，朱英环１
（１．辽宁中医药大学，辽宁 沈阳１１００３２；２．辽宁省组分中药工程技术研究中心，辽宁 大连１１６６００）
摘　要：目的：以不同产地的余甘子酚酸类成分为研究对象，建立酚酸类成分的 ＨＰＬＣ指纹图谱，为科
学评价和有效控制余甘子有效成分质量提供科学依据。方法：采用Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８色谱柱，流动相为０．２％
磷酸水（Ａ）－甲醇（Ｂ）梯度洗脱，在２７６ｎｍ波长下对７种不同产地的余甘子药材酚酸类成分进行测定，建
立余甘子酚酸类成分的高效液相色谱指纹图谱，通过相似度评价软件对其质量和品质进行评价。结果：
对７种余甘子酚酸类成分进行测定，建立了余甘子酚酸类成分指纹图谱，并且确定７种不同产地余甘子
酚酸类成分有７个共有峰，且７种酚酸类成分的指纹图谱相似度在０．９０以上。结论：建立的指纹图谱
有较强的针对性，可为余甘子药材有效成分的研究及其质控标准的制定提供科学依据。
关键词：余甘子；酚酸类成分；高效液相色谱；指纹图谱
中图分类号：Ｒ２８４．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）０４－００３１－０３
收稿日期：２０１３－０９－０９
作者简介：王飞，博士，辽宁中医药大学讲师，研究方向为药物分析。
通讯作者：孟宪生，博士，辽宁中医药大学教授，研究方向为中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析。Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｘｓｖｖｖ＠
１２６．ｃｏｍ。
　　余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ　ｅｍ－
ｂｌｉｃａ　Ｌ．的干燥果实。甘、酸、涩、凉，归肺、胃经，清热解毒，
利咽生津，润肺化痰。主要含有酚类、黄酮类成分，具有抗
ＨＢＶ、抗病毒、抗癌、降脂、抗氧化、保肝等多种功效［１－３］。临
床主要用于治疗乙肝、高血压、肥胖及抗炎，而酚酸类化合
物是其主要药效物质基础之一。
我国的余甘子资源十分丰富，主产区分布在南方诸省
（区），如云南、四川、贵州、广西、广东、福建等地，其中以福建、
云南两省的产量最多［４］。本实验主要针对不同产地余甘子药
材酚酸类成分进行研究，建立酚酸类成分指纹图谱，以期为
其有效成分的研究及质控标准的制定提供科学依据。
１　仪器与材料
１．１　仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００ＬＣ高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司，
包括１１００泵，自动进样器、柱温箱、ＤＡＤ检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ化
学工作站）；ＡＣＣＵＬＡＢ　ＡＬＣ－１１Ｃ．４型电子天平（德国Ｓａｒ－
ｔｏｒｉｕｓ，十万分之一）；ＰＣＷＪ－１０型超纯水处理装置（成都品
成科技有限公司

）。
能丧失。治疗本病的关键是减轻关节肿痛，控制炎症发展，
防止和减少关节的破坏，维持受累关节的功能，促进已破坏
关节骨的修复。非甾体类抗炎药洛索洛芬钠分散片主要通
过抑制炎症介质的释放和炎症反应过程而发挥作用，以发
挥消炎止痛的效果，但不能阻止类风湿关节炎病变的自然
过程。甲氨蝶呤片有免疫调节、免疫抑制、抗炎等作用，能
减缓关节软骨的破坏。来氟米特片有免疫抑制的作用，可
减轻病人的症状和体征，抑制骨质破坏，改善病人的生理功
能和生活质量。珍宝丸可清热、安神、舒筋活络、除黄水，用
于风湿、类风湿、肌筋萎缩、神经麻痹、久治不愈等症的治
疗。风湿二十五味丸有燥黄水、散瘀的作用，用于游痛症、
关节炎、类风湿的治疗。补肾健胃二十一味丸祛寒、健胃、
补肾壮阳，用于食积胃胀、胸满头晕、肾寒浮肿、水肿、腰腿
痛、尿频等症的治疗。
类风湿关节炎是由黄水增多与巴达干和血相搏凝聚于
关节部而阻碍气血运行所致，主要有关节肿痛，屈伸不利、
晨僵等表现。本研究以舒筋活络、除黄水而改善气血运行，
治疗关节肿痛、屈伸不利、晨僵等症状。本研究中对照组有
效率为７３．３％ ，治疗组有效为率８０．０％，两组有效率比较
差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），表明西药联合蒙药治疗类风
湿性关节炎效果明确，安全性较高，值得临床推广应用。
参考文献：
［１］　蒋明，ＤＡＶＩＤ　ＹＵ，林孝义，等．中华风湿病学［Ｍ］．北京：华
夏出版社，２００４：７０９．
［２］　蒙医学编辑委员会．中国医学百科全书［Ｍ］．上海：上海科学
技术出版社，１９９２：６１．
（责任编辑：尹晨茹）
—１３—
１．２　药材与试剂
没食子酸对照品（批号１１０８３１－２００８０３，中国药品生物
制品检定所）；余甘子药材（产地与编号如下：四川（１号）、云
南（２号）、贵州（３号）、广西（４号）、福建（５号）、四川盐源县
（６号）、云南楚雄州（７号），７个不同产地药材样品经辽宁中
医药大学翟延君教授鉴定，为大戟科叶下珠属植物余甘子
Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ　ｅｍｂｌｉｃａ　Ｌ．）；聚酰胺树脂（沧州宝恩化工有限
公司）；甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；水
为超纯水，其它试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：
０．２％磷酸水（Ａ）－甲醇（Ｂ），梯度洗脱（０～３０ｍｉｎ：３％Ｂ→
１７％Ｂ）；柱温：３５℃；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２７６ｎｍ；进
样量：１０μＬ。
２．２　供试品溶液制备
取７个不同产地的余甘子药材，粉碎，过１６目筛，精密
称取粉末３ｇ，加３３ｍＬ　７０％乙醇回流提取３次，每次１．５ｈ，
过滤。合并滤液回收乙醇，将滤液挥至无醇味并加水定容
至２０ｍＬ，得到浓度为０．１５ｇ／ｍＬ的药材提取液。取浸泡好
的聚酰胺树脂１５ｍＬ加入到树脂柱中，此时得到的树脂柱径
高比为１∶５，先用醇冲洗树脂柱，后用水冲洗树脂柱，加入
制备好的药材提取液１７ｍＬ，静置０．５ｈ，以０．５ｍＬ／ｍｉｎ的速
度将提取液过树脂，取９０ｍＬ水以１．５ｍＬ／ｍｉｎ的速度洗脱
柱子，收集洗脱液，将洗脱液水浴蒸干，得到总酚酸提取物，
分别称取总酚酸提取物０．２ｇ，定容于２５ｍＬ量瓶中，即得。
２．３　对照品溶液制备
精密称取没食子酸对照品５．０１ｍｇ，置２５ｍＬ量瓶中，加甲
醇溶解，并定容至刻度，得浓度为２００μｇ／ｍＬ的对照品溶液。
２．４　方法学考察
２．４．１　精密度试验　取３号余甘子药材粉末１ｇ，精密称
定，按“２．２”项下方法操作，得供试品溶液，按“２．１”项下色
谱条件连续进样６次，记录色谱图，考察仪器的精密度。结
果表明，各色谱峰相对保留时间的 ＲＳＤ 为 ０．０８％ ～
１．８３％，相对峰面积的 ＲＳＤ为１．４０％～３．０６％，均小于
５．０％，符合指纹图谱要求。
２．４．２　重复性试验　取３号余甘子药材６份，每份约１ｇ，
精密称定，分别按 “２．２”项下方法操作，得供试品溶液，按
“２．１”项下色谱条件测定，记录色谱图，考察方法的重复性。
结果表明，各色谱峰相对保留时间的 ＲＳＤ 为１．２３％～
２．６４％，相对峰面积的 ＲＳＤ为２．２８％～３．７３％，均小于
５．０％，符合指纹图谱要求。
２．４．３　稳定性试验　取３号余甘子药材粉末１ｇ，精密称
定，按“２．２”项下方法操作，得供试品溶液，按“２．１”项下色
谱条件，分别在０、２、８、１２、２４、４８ｈ进样分析，记录色谱图，
考察供试品溶液的稳定性。结果表明，各色谱峰相对保留
时间的 ＲＳＤ为１．７３％～２．９４％，相对峰面积的 ＲＳＤ为
２．６２％～４．２６％，均小于５．０％，供试品溶液在４８ｈ内稳定。
２．５　ＨＰＬＣ指纹图谱分析
２．５．１　余甘子酚酸类成分 ＨＰＬＣ指纹图谱测定　取７
种不同产地的余甘子药材，分别按“２．２”项下方法操作，得供
试品溶液，按“２．１”项下色谱条件测定，记录７产地余甘子药
材ＨＰＬＣ色谱，将其导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统研究版（２００４Ａ）”，建立余甘子药材指纹图谱，见图１。
图１　７产地余甘子酚酸类成分色谱
２．５．２　共有指纹峰标定　上述７批供试液的指纹图谱
中，以没食子酸峰为参比峰，将其保留时间定为１．０，标示了
余甘子酚酸类成分指纹图谱中７个共有峰（见图２），其中６
号峰为没食子酸，以各峰对内参比峰的相对保留时间定性，
共有峰的峰序（相对保留时间）：１（５．４８），２（７．７７），３（９．３４），
４（１０．２６），５（１１．５１），６（１３．２），７（１６．７１）。经计算７批余甘
子酚酸类成分共有指纹峰相对保留时间的ＲＳＤ在０．４１％
～１．６１％之间。按公式（１）计算各色谱峰面积相对其称样
量的比值，数据见表１。
Ｘｉｊ ＝Ａｉｊ／Ｗｉ （１）
　　Ｘｉｊ：第ｉ个样品的第ｊ个峰面积与称样量的比值，Ａｉｊ：
第ｉ个样品第ｊ个峰的峰面积，Ｗｉ：第ｉ个样品的称样量。
表１　７产地样品共有峰的相对峰面积
峰号
样品号
Ｘ１ Ｘ２ Ｘ３ Ｘ４ Ｘ５ Ｘ６ Ｘ７
ＲＳＤ（％）
１　 ６．６２５×１０２　 ３．７０６×１０２　 ５．１５８×１０２　 ５．０５０×１０２　 １．２０８×１０３　 ８．７０３×１０２　 １．０２７×１０３　 ４１．６８
２　 ４．２１２×１０３　 ３．２０１×１０３　 ６．７６５×１０３　 ２．８７２×１０３　 １．４６４×１０３　 １．３８１×１０３　 ３．０４６×１０３　 ５５．９１
３　 １．６２２×１０２　 ２．８８５×１０２　 １．２８３×１０２　 ２．２４９×１０２　 ２．９０８×１０２　 ０．８４８×１０２　 ０．６８４×１０２　 ５１．４９
４　 ２．０２１×１０２　 ９．６８１×１０２　 ０．７９０×１０２　 ２．２４８×１０２　 １．２３２×１０２　 ３．２４７×１０２　 ３．３６５×１０２　 ９２．９９
５　 １．９０８×１０４　 １．４７８×１０４　 １．０１３×１０４　 １．７９８×１０４　 ２．５５７×１０４　 １．６６４×１０４　 １．３４９×１０４　 ２９．０５
６　 １．７５５×１０３　 １．１６３×１０３　 ２．９１５×１０２　 ７．４３７×１０２　 ４．５５２×１０２　 ９．１０７×１０２　 ９．２７２×１０２　 ５４．００
７　 １．０８７×１０３　 ０．５４５×１０２　 ２．５０９×１０２　 １．０２３×１０３　 ４．７９１×１０２　 １．６３３×１０２　 ０．８２３×１０２　 ９７．５３
２．５．３　不同产地余甘子酚酸类成分相似度评价　将７
产地余甘子酚酸类成分样品色谱图导入“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统研究版（２００４Ａ）”［５－１０］，考察色谱峰相似
度的一致性，进行相似度评价，具体数据见表２。结果显示，
７产地余甘子酚酸类成分与对照图谱比较相似度均在０．９００
以上，表明余甘子酚酸类成分的性质稳定，不同产地的余甘
子内在质量差别不大。
３　讨论
３．１　色谱柱确定
实验分别考察了 Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８（大连中汇达公司，
—２３—
２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８（美国安捷伦公司，
２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ２Ｃ１８（大连依利特公
司，２００ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）等不同厂家和型号的色谱柱对
余甘子酚酸类成分的分离效果，结果发现 Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８柱洗
脱出的色谱峰基线平稳，分离度好，保留时间适中，最终选
用Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８柱进行分离。
３．２　检测波长确定
本实验采用ＤＡＤ检测器，对余甘子酚酸类成分的吸收
情况进行了观察，绘出三维立体图谱，从图谱可以看出在
２７６ｎｍ条件下色谱峰信息完整，分离度较好，基线平稳，干
扰最少，故选择２７６ｎｍ为检测波长。 图２　余甘子酚酸类成分共有指纹峰（６－没食子酸）
表２　不同产地余甘子酚酸类成分相似度评价结果
样品编号 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６　 ７ Ｒ
产地　 四川 云南 贵州 广西 福建 四川盐源县 云南楚雄州 —
相似度 ０．９０１　 ０．９１７　 ０．９０３　 ０．９０８　 ０．９４６　 ０．９５１　 ０．９１４　 １．０００
３．３　流动相选择
试验分别选用甲醇－０．１％磷酸水溶液、甲醇－水溶液、乙
腈－水溶液和甲醇－０．２％磷酸水溶液４种不同溶剂系统进行
考察，结果采用梯度洗脱时以甲醇－０．２％的冰醋酸水溶液溶
剂系统所得图谱的峰形锐、分离度好，故最终选用甲醇－
０．２％的冰醋酸水系统为本试验的流动相系统。
３．４　质量评价
本文所富集酚酸类成分经前期实验发现，对于肝肿瘤
细胞具有较好的抑制作用，抑制率最高可达８３．５１％。首次
针对余甘子药材中酚酸类成分进行指纹图谱研究，为中药
有效成分的质量控制提供了良好的借鉴。
３．５　产地分析
我国的余甘子资源十分丰富，广泛分布于广西、四川、
云南、福建、贵州等地。本实验建立了不同产地药材酚酸类
成分指纹图谱，对于主要产地药材质量进行了比较分析，发
现各产地酚酸类成分相似度均在０．９０以上，差异不大，为
其临床合理用药提供了依据。
参考文献：
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代中药，２０１１，１３（１１）：５２－５６．
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剂学杂志，２０１２，１８（３）：１３２－１３５．
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化与建立［Ｊ］．时珍国医国药，２０１３，２４（１）：９７－９９．
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［９］　韩乐，宋建平，刘训红，等．地耳草 ＨＰＣＥ指纹图谱的研究
［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１７（１０）：１０４－１０７．
［１０］　张明昶，彭小冰，苗旭辉，等．中药虎杖特征指纹图谱研究
［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１１，１７（１）：５３－５５．
（责任编辑：余　婷）
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