全 文 ：高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量
黄彩虹1 , 雷鹏1 , 甘莲莲1 , 黄义1 , 2 , 李新中1＊ (1.中南大学湘雅医院药剂科 , 长沙　410008;2.中南大学药学院 ,
长沙　410013)
摘要:目的　建立高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量。方法　Diamonsil C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm ,
5μm);流动相:甲醇- 0.01%磷酸 (10∶90);检测波长:273 nm;柱温:30 ℃;流速:1 mL · min-1 , 进样量:
5μL 。结果　没食子酸在 0.018 2 ～ 0.182 4μg 线性关系良好 , 回归方程为Y = 2 969.4 X - 4.252 , r= 0.999 9。
平均加样回收率为 98.36%, RSD 为 2.83%。结论　本方法简便 、 快速 、 重复性好 , 可用于测定地锦草中没食子酸
的含量。
关键词:地锦草;高效液相色谱法;没食子酸
中图分类号:R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2009)06-0408-03
Determination of gallic acid in Herba Euphorbia humifusae by HPLC
HUANG Cai-hong1 , LEI Peng1 , GAN Lian-lia n1 , HUANG Yi , LI Xin-zhong 1 (1.Department o f Pharmacy ,
X iangya Hospital , Central South University , Changsha 410008;2.School of Pharmaceutical Sciences , Central
South University , Changsha 410013)
Abstract:Objective　 To establish an HPLC method fo r the determina tion of ga llic acid in Herba Eupho rbia humifu-
sae.Methods　The chromatog raphic system consisted o f a Diamonsil C18 column(4.6 mm × 250 mm , 5 μm)and a
mobile phase of M eOH-0.01%H3PO 4 (10∶90).The detection wave length w as 273 nm.The co lumn tempe rature w as
30 ℃ and the f low rate was 1 mL·min-1.Results　A good linearity of gallic acid was in the range of 0.018 2～ 0.182 4μg ,
the regression equation was Y= 2 969.4 X-4.252 , and r was 0.999 9.The average recove ry w as 98.36% and RSD w as
2.83%.Conclusion　The HPLC method is simple , rapid and accurate , which can be used for the determina tion o f g al-
lic acid in Herba Eupho rbia humifusae.
Key words:Herba Eupho rbia humifusae;H PLC;gallic acid
　　地锦草为大戟科植物地锦 E uphorbia humi f usa w illd .
或斑地锦 Euphorbia maculata L.的干燥全草[ 1] 。具有清热
解毒 、 利湿退黄 、 凉血止血的功效 , 常用于治疗痢疾 、 肠
炎 、 咳血 、 便血 、 崩漏 、 疮疥等 , 因资源丰富 、 疗效独特而
广泛应用于临床[ 1 , 2] 。地锦草主要含黄酮类 、 有机酸及鞣质
类物质 , 其中已知的有效成分为槲皮素和没食子酸等[ 3] 。研
究表明 , 没食子酸具有抗炎 、 抗突变 、 抗氧化等生物活
性[ 4 ,5] 。文献关于地锦草中槲皮素含量的测定已有报道[ 6-8] ,
但尚未见地锦草中没食子酸含量测定报道 , 本试验建立了
HPLC 法测定地锦草中没食子酸含量的方法 , 为地锦草及其
制剂的开发和利用提供了质量控制依据。
1　仪器与试药
Ag ilent1100 高效液相色谱仪 , 包括 G1311A 四元梯度
泵 、 G1313A 自动进样器 、 G1315A 二极管阵列检测器 (安
捷伦科技有限公司);AG285 分析天平 (德国梅特勒公司);
KS-600D超声清洗机 (宁波科生仪器厂)。
　　没食子酸 (中国药品生物制品检定所 , 批号:110831-
200302 , 供含量测定用)。地锦草 (市售及自采), 经中南大
学湘雅医院徐平声副主任药师鉴定 , 为大戟科植物地锦 Eu-
phorbia humi f usa wi lld.的干燥全草。甲醇为色谱纯 , 其他
试剂分析纯 , 流动相用水为重蒸馏水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm , 5μm);流
动相:甲醇-0.01%磷酸 (10∶90);流速:1 mL ·min-1;
检测波长:273 nm;柱温:30 ℃;进样量:5 μL 。理论塔
板数按没食子酸计算应≥4 000 , 保留时间约为 10.5 min ,
分离度>1.5 , 色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品 9.12 mg , 置 100 m L容量瓶 ,
加 70%甲醇溶解 , 并稀释至刻度 , 摇匀 , 得到浓度为 91.2
μg ·mL-1的没食子酸储备液。精密吸取储备液 10 mL , 置
　　基金项目::湖南省卫生厅中医药科技基金项目 (编号:6304-78), 长沙市科技局重点项目 (编号:K0802115-31)。
作者简介:黄彩虹 , 女 , 本科 , 药师 , 主要从事中药质量控制研究工作 , E-mai l:hch2007hhxx @163.com 　　＊通讯作者:李新中 ,
男 , 博士生导师 , 主任药师 , 主要从事中药新制剂研究 , Tel:(0731) 4327454 , E-mail:xylixin@medm ail.com.cn
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C ent ral S outh Ph arm acy.June 2009 , Vol.7 No.6　中南药学 2009年 6月第 7卷第 6期
图 1　没食子酸 HPLC 色谱图
Fig 1　HPLC ch romatogram of gal lic acid
A.对照品 (reference);B.供试品 (sample);1.没食子酸 (galli c acid)
50 mL 量瓶中 , 加 70%甲醇至刻度 , 摇匀 , 得到浓度为
18.24 μg·m L-1的没食子酸对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
取地锦草细粉约 0.2 g , 精密称定 , 加 70%甲醇
15 m L 超声 30 min , 冷却至室温 , 滤过 , 残渣加少量甲
醇洗涤 , 洗液并入滤液中 , 转移至 25 mL 量瓶中 , 加
70%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 用 0.45 μm 微孔滤膜滤过 ,
取续滤液 , 即得。
2.4　线性关系的考察
精密吸取浓度为 18.24 μg ·mL -1没食子酸对照品溶液
1 、 2、 4 、 6、 8 及 10 μL , 按上述色谱条件进样分析 , 以峰
面积Y 对进样量 X (ng)进行回归分析 , 得没食子酸回归
方程:Y= 2 969.4X - 4.252 , r=0.999 9 , 没食子酸进样
量在 0.018 2 ～ 0.182 4 μg 线性关系良好。
2.5　精密度试验
精密吸取浓度为 18.24 μg ·mL -1没食子酸对照品溶液
5 μL , 按 “ 2.1” 色谱条件连续进样 6 次 , 测定峰面积 , 结
果没食子酸峰面积的 RSD为 0.83%。
2.6　稳定性考察
取同一供试品溶液 , 分别在 0 、 2 、 4 、 8 、 12 h 进样 ,
测定峰面积 , 结果没食子酸峰面积的 RSD 为 0.53 %。表明
供试品溶液在 0 ～ 12 h 内稳定性良好。
2.7　重复性试验
取同一批药材 6 份 , 精密称定 , 按 “ 2.3” 项下方法制
备供试品溶液 , 平行制备 6 份 , 按上述色谱条件测定峰面
积 , 没食子酸平均含量为 2.907 mg · g-1 , RSD 为 2.06%。
2.8　加样回收率试验
取已知含量地锦草粉末 6 份 , 每份约 0.1 g , 精密称定 ,
添加浓度为 91.2 μg · mL -1的没食子酸对照品溶液 4 mL ,
按 “2.3” 项下方法制备供试品溶液并测定 , 没食子酸的平
均回收率分别为 98.36%, 其 RSD 为 2.83%, 表明方法回
收率较好 , 结果见表 1。
2.9　样品含量测定
取 6 批样品 , 按 “ 2.3” 项下方法制备供试品溶液。分
别精密吸取对照品溶液 (18 、 24 μg ·mL -1)与供试品溶液
各 5 μL , 按上述色谱条件测定 , 并计算各样品中没食子酸
含量 , 结果见表 2。
表 1　回收率试验结果
Tab 1　Recovery of gallic acid
编号
(No.)
样品含量
(sam ple
conten t)
/mg
加入量
(added
amount)
/m g
测得量
(detected
amount)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均回收率
(average
recovery)
/ %
RSD
/ %
1 0.290 4 0.364 8 0.646 6 97.59
2 0.292 2 0.364 8 0.647 2 97.27
3 0.291 0 0.364 8 0.641 9 96.14 98.36 2.83
4 0.291 6 0.364 8 0.655 7 99.76
5 0.291 6 0.364 8 0.642 1 96.03
6 0.291 0 0.364 8 0.668 1 103.33
表 2　地锦草中没食子酸含量 (n=2)
Tab 2　Content determination of gallic acid in the sample (n=2)
编号
(No.)
没食子酸含量
(content of gal li c acid)/%
1 2
均值
(mean)
/ %
RSD/ %
1 0.289 0.293 0.291 0.97
2 0.191 0.195 0.193 1.47
3 0.047 0.045 0.046 3.07
4 0.260 0.254 0.257 1.65
5 0.223 0.218 0.221 1.60
6 0.117 0.118 0.118 0.60
3　讨论
没食子酸对照品溶液在 200 ～ 400 nm 进行 UV 扫描 , 结
果显示没食子酸在 273 nm 处有最大吸收 , 故选择该波长为
检测波长。色谱条件摸索时 , 发现流动相的 pH 值对色谱峰
的峰形及分离度影响很大 , 比较甲醇-不同浓度的磷酸溶液 、
乙腈-不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统[ 9 , 10] , 确定流动
相为甲醇-0.01%磷酸 (10∶90), 得到的色谱峰峰形尖锐 ,
分离度高 , 且基线稳定。
试验中曾考察了超声法 、 加热回流法及索氏提取法等提
取方法 , 加热回流法提取出的杂质较多 , 对测定有一定干
扰 , 索氏提取法费时 , 且操作繁琐 , 而超声法操作简单 、 快
速 、 杂质干扰少 , 故选择超声法。经过考察了不同提取溶
剂:甲醇 、 70%甲醇 、 50%甲醇 、 30%甲醇及纯净水等 , 发
现用 70%甲醇 、 50%甲醇提取的样品中没食子酸的含量测
定值最高 , 因用 70%甲醇作为提取溶剂操作方便 , 最终确
定正文中所述样品提取方法。
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中南药学 2009年 6月第 7卷第 6期　Cen t ral South Pharmacy.June 2009 , Vol.7 No.6
本文建立了检测地锦草中没食子酸含量的方法 , 弥补了
以前只对地锦草药材中槲皮素含量进行测定的不足。 6 批地
锦草中均含没食子酸 , 其含量为 0.046%～ 0.219%, 其中
有 5 批含量在 0.1%以上 , 存在一定差异。该差异与地锦的
产地 、 采购及储存等因素有关。通过对没食子酸含量的测
定 , 能全面反映出地锦草药材中有效成分的含量情况 , 故对
地锦草药材及其制剂的质量控制具有一定的指导意义。
参考文献
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(收稿日期:2009-01-06;修回日期:2009-02-24)
淫羊藿总黄酮对 LPC诱导内皮细胞损伤的保护作用
裴志芳 , 夏珂 , 高琪乐 , 杨天伦＊ (中南大学湘雅医院心内科 , 长沙　410008)
摘要:目的　观察淫羊藿总黄酮对溶血性磷脂酰胆碱 (LPC)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法　将血管内
皮细胞分为正常对照组 , LPC 损伤对照组 , LPC 损伤加淫羊藿总黄酮低 、 中 、 高浓度 (50、 100 、 200 mg · L-1)
组 , 检测细胞上清液中一氧化氮 (NO)、 丙二醛 (M DA)、 乳酸脱氢酶 (LDH)的含量和细胞内活性氧 (ROS)水
平。结果　淫羊藿总黄酮剂量依赖性地降低 LPC 诱导的内皮细胞上清液中 MDA 、 LDH 含量增加并抑制细胞内
ROS 活性 , 且剂量依赖性地增加细胞上清液中 NO 含量。结论　淫羊藿总黄酮对 LPC 诱导的血管内皮细胞损伤具
有保护作用 , 其机制与抑制细胞内 ROS 活性有关。
关键词:淫羊藿总黄酮;内皮细胞;溶血性磷脂酰胆碱
中图分类号:R961.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2009)06-0410-03
Protective effect of total flavonoids of epimedium
on endothelial cell injury induced by LPC
PEI Zhi-fang1 , XIA Ke , GAO Qi-le , YANG Tian-lun ＊ (Department o f Card iology , X iangya Hospital , Central
South University , Changsha 410008)
Abstract:Objective　 To inve stiga te the pro tective effect of to tal flav onoids o f epimedium(TFE)endo thelial cell injury
induced by lysophospha tidy lcholine.Methods　Vascula r endo the lial cells cultured in vitro we re divided into a normal
contro l g roup , a ly sopho sphatidylcho line contro l g roup , and a to tal f lavono ids of epimedium g roup.The human um-
bilical v ein endothelial cells (HUVEC-12)w ere tr eated with ly sopho sphatidy lcho line(10 μg ·m L-1)for 24 h to es-
tablish the model of endo thelial cell damage.HUVECs we re first exposed to TFE (50 , 100 , or 200 mg · L-1)fo r
1 h , and then expo sed to LPC fo r 24 h.At the end of the expe riment , the cultured medium w as collected to measure
　　作者简介:裴志芳 , 女 , 主管技师 , 主要从事心电及心脏电生理研究 , Tel:(0731) 4327420 , E-mail:pzhifang@mai l.csu.edu.cn　　
＊通讯作者:杨天伦 , 男 , 教授 , 博士生导师 , 主要从事心血管疾病及其发病机制研究 , Tel:(0731) 4327420 , E-mail:t ianlun@
163.com
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