全 文 ：Central South Pharmacy. February 2013, Vol. 11 No. 2　中南药学 2013 年 2 月 第 11 卷 第 2 期
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度要求的实施指南》以及 CNAS-CL07：2011《测量不确定度
的要求》均指出，对那些比最大分量的三分之一还小的分量
不必仔细评估（除非这种分量数目较多）。重点应放在识别
并仔细评估那些重要的分量特别是占支配地位的分量上，对
难于写出上述数学模型的检测量，对各个分量作预估算更为
重要。因此，若将上述评定过程进一步简化，无需每次都评
定各个不确定度分量，主要计算由测量重复性引起的不确定
度，则此相对密度测定不确定度的评定方法更为简便、易行。

参考文献
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（收稿日期： 2012-11-12； 修回日期： 2012-11-27）
高效液相色谱法测定地锦草中鞣花酸的含量
黄彩虹 1，2，刘海涛 1，2，雷鹏 1，2，尹桃 1，2*，蓝珊娜 3（1.中南大学湘雅医院，长沙 410008；2.中南大学药学院，
长沙 410013；3.桂林医学院，广西 桂林 541004）
摘要：目的　建立地锦草中鞣花酸含量的测定方法。方法　采用高效液相色谱法，色谱柱：Odyssil C18 （4.6 mm×250 mm，
5 μm）；流动相：甲醇 -0.1%磷酸（40 ：60）；流速：1.0 mL • min－ 1；检测波长：254 nm；柱温：30 ℃。结果　
鞣花酸进样量在 0.032～ 0.476 μg与峰面积呈良好的线性关系，r ＝ 0.999 9，平均加样回收率为 97.3%，RSD为 1.4%。
结论　该方法简便准确，重现性好，可作为地锦草中鞣花酸的含量测定方法。
关键词：地锦草；鞣花酸；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R917, R927.2　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2013)02-0136-03
doi:10.7539/j.issn. 1672-2981.2013.02.017
Determination of ellagic acid in Herba Euphorbiae by HPLC
HUANG Cai-hong1,2, LIU Hai-tao1,2, LEI Peng1,2, YIN Tao1,2*, LAN Shan-na3 (1. Xiangya Hospital, Central South Uni-
versity, Changsha 410008; 2. College of Pharmacy, Central South University, Changsha 410013; 3. Department of
Pharmacy, Guilin Medical University, Guilin Guangxi 541004)
Abstract: Objective To establish an HPLC method to determine ellagic acid in Herba Euphorbiae. Methods The
HPLC system consisted of Odysssil C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) and methanol-0.1%H3PO4 (40 : 60) as the mobile phase
at 1.0 mL • min－ 1. The detection wavelength was 254 nm and the column temperature was 30 ℃ . Results The calibration
curve showed a good linear relationship at 0.032－ 0.476 μg, r ＝ 0.999 9, the average recovery was 97.3% and RSD was
1.4%. Conclusion The method is simple, accurate and repeatable, which can be used for the determination of ellagic aci-
din in Herba Euphorbiae.
Key words: Herba Euphorbiae; ellagic acid; HPLC; content determination

基金项目：湖南省中医药科技基金重点课题（编号：20090008）；长沙市科技局重点项目（编号：K0802115-31）。
作者简介：黄彩虹，女，硕士研究生，主要从事中药制剂及中药质量标准的研究，E-mail：729030394@qq.com * 通讯作者：尹桃，女，
硕士研究生导师，主要从事药剂学研究，E-mail：simon863@vip.sina.com
地锦草为大戟科植物地锦（Euphorbia humifusa Willd.）
或斑地锦（Euphorbia maculata L.）的干燥全草 [1]，别名血
见愁、奶汁草、铺地锦，主要分布在山东、江苏、浙江、江
西、福建、广东等地。性味辛平，具有清热解毒、凉血止血、
利湿退黄的功效 [2]。临床上主要用于治疗细菌性痢疾、泄泻、
咯血、尿血、便血、崩漏、湿热黄疸、痈肿疔疮等。现代药
理学研究表明，地锦草有抗氧化、抗肿瘤细胞等药理作用 [3-
5]。地锦草中主要有效化学成分包括有机酸类、黄酮类等，
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代表性成分有没食子酸、槲皮素、山柰素等 [6-7]。对其中有
效成分的含量测定方法已有相关报道 [8-10]，但地锦草中另一
个含量较高，且具有明显药理活性的成分——鞣花酸尚未
见报道。鞣花酸是一种植物多酚类化合物，其对化学物质
诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，能与人体内
有害自由基结合，具有强力祛癌变功效，素有“克癌之星”、
“致癌物清除剂”之美称 [11-12]。此外，对多种细菌、病毒
有很好的抑制作用 [13-15]。地锦草的功效与鞣花酸的药理学
作用相吻合，显示对地锦草中鞣花酸的研究有重要的意义。
本试验首次建立 HPLC法测定地锦草中鞣花酸含量，为地
锦草及其制剂的质量控制和开发应用提供科学有效的依据。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪（包括 G1311A四元梯度
泵、G1313A自动进样器、G1315A二极管阵列检测器、
Chem Station化学工作站，美国安捷伦科技有限公司）；
AG285型 0.01 mg/0.1 mg双量程电子天平（瑞士Mettler公
司）；YQ6200超声波清洗机（上海易净超声波仪器公司）；
FW177型中草药粉碎机（天津特斯特仪器有限公司）。
鞣花酸（批号：081208-1，纯度≥ 98%，天津市尖峰天
然产物研究开发有限公司，结构式见图 1）。地锦草为市售
药材，经中南大学湘雅医院药剂科雷鹏副教授鉴定为大戟科
植物地锦（Euphorbia humifusa Willd.）或斑地锦（Euphorbia
maculata L.）的干燥全草。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分
析纯，流动相用水为蒸馏水。
至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，以 0.45 μm微孔滤膜滤过，
即得供试品溶液。
2.4 线性关系　
精密吸取上述浓度为 15.856 μg • mL－ 1的鞣花酸对照品
溶液，自动进样 2、8、10、18、20、24、30 μL，按“2.1”
项下色谱条件测定，记录色谱图。以对照品进样量为横坐
标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为鞣花
酸：Y＝ 7 750X－ 23.29， r ＝ 0.999 9，鞣花酸的进样量在
0.032～ 0.476 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验　
精密吸取浓度为 15.856 μg • mL－ 1的鞣花酸对照品溶液
10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样 6次，记录色谱图，
测定鞣花酸峰面积，计算其 RSD值为 0.29%，结果表明仪器
精密度良好。
2.6 重复性试验　
取同一批药材粉末（批号：2012025423）6份，精密称定，
按“2.3”项下方法平行制备，按“2.1”项下色谱条件测定，
鞣花酸平均含量为 2.052 mg • g－ 1，RSD为 2.4%，结果表明
重复性良好。
2.7 稳定性试验　
取同一供试品溶液，在室温下，分别在 0、2、4、8、
12 h进样，记录色谱图，结果鞣花酸峰面积的 RSD为 2.2%，
表明供试品溶液在 0～ 12 h内稳定性良好。
2.8 加样回收试验　
取已知含量的地锦草粉末（批号：2012025423）6份，每
份约 0.1 g，精密称定，分别精密移取浓度为 198.2 μg • mL－ 1
的鞣花酸对照品溶液 1.0 mL，按“2.3”项下方法进行制备，
并按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算得鞣花酸的平均
回收率为 97.3%，RSD为 1.4%，结果表明该方法回收率较
好（见表 1）。
2.9 样品测定　
精密吸取对照品溶液与地锦草供试品溶液各 10 μL，
按“2.1”项下色谱条件测定，并计算鞣花酸的含量，结果
见表 2 。
3 讨论
本试验考察了回流提取和超声提取 2种提取方法对地锦
草中鞣花酸提取率的影响，结果表明回流提取法不能达到一
个稳定的水平，而超声提取法操作简便、能够快速达到最大
图 1 鞣花酸结构式
Fig 1 Structure of ellagic acid
0 5 10 15 20 25 30
t/min
A
0 5 10 15 20 25 30
t/min
B
图 2 地锦草 HPLC色谱图
Fig 2 HPLC chromatogram of Herba Euphorbiae
A.对照品溶液（reference）；B. 地锦草供试品溶液（sample）；1.
鞣花酸（ellagic acid）
1
1
2 方法与结果
2.1 色谱条件　
色谱柱：Odyssil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：
30 ℃；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL • min－ 1；流动相：
甲醇 -0.1%磷酸（40 ：60）；进样量：10 μL。理论塔板数
按鞣花酸计算应≥ 4 000，在上述色谱条件下，对照品和样
品的色谱见图 2。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取真空干燥至恒重的鞣花酸对照品 9.91 mg，置
于 25 mL容量瓶内，加甲醇溶解稀释至刻度，配制成浓度为
396.4 μg • mL－ 1的对照品甲醇储备液。精密移取鞣花酸对照
品储备液 1.0 mL置于 25 mL容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，
配制成浓度为 15.856 μg • mL－ 1的对照品溶液（线性关系考
察用）；精密移取鞣花酸对照品储备液 5.0 mL置于 10 mL容
量瓶内，加甲醇稀释至刻度，配制成浓度为 198.2 μg • mL－ 1
对照品溶液（加样回收试验用）。
2.3 供试品溶液的制备　
取地锦草粉末（3 号筛）约 0.2 g，精密称定，置于
25 mL容量瓶中，加入约 20 mL 60%甲醇，超声提取（300 W，
40 kHz）45 min，取出，迅速冷却至室温，加 60%甲醇定容
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表 1 回收试验结果 (n＝ 6)
Tab 1 Recovery of ellagic acid (n＝ 6)
取样量
（sample weight）
/g
样品含量
（sample content）
/mg
加入量
（added amount）
/mg
测得量
（detected amount）
/mg
回收率
（recovery）
/%
平均回收率
（average recovery）
/%
RSD
/%
0.100 3 0.205 8 0.198 2 0.400 9 98.4
97.3 1.4
0.100 3 0.205 8 0.198 2 0.402 1 99.0
0.100 8 0.206 8 0.198 2 0.398 6 96.8
0.100 9 0.207 0 0.198 2 0.397 1 95.9
0.101 5 0.208 3 0.198 2 0.398 0 95.7
0.101 0 0.207 3 0.198 2 0.401 2 97.9
提取率，因此本实验选择超声提取法。实验中比较了不同浓
度的甲醇作为提取溶剂时的提取效率，结果发现 60%甲醇
作为提取溶剂时，所测得的鞣花酸含量即达最高水平。进一
步比较了以 60%甲醇作为提取溶剂分别超声 15、30、45、
60 min的提取效率，结果表明超声提取 45 min所测得的鞣
花酸提取率最高。
试验中比较了乙腈 -磷酸、甲醇 -磷酸系统作为流动相
时，鞣花酸色谱峰的分离情况，结果发现以甲醇 -0.1%磷酸
系统作为流动相时，峰形较好；进一步比较了甲醇 -0.1%磷
酸为 30 ：70、45 ：55、50 ：50、40 ：60时色谱峰的分离情况，
结果发现，甲醇 -0.1%磷酸＝ 40 ：60时，鞣花酸色谱峰的
保留时间适宜且没有其他峰的干扰，由此，确定为本方法的
流动相。
本文首次建立了地锦草中鞣花酸的含量测定方法，并
且测定了 13批市售地锦草药材中鞣花酸的含量。从含量
测定结果的数据可知，13批地锦草药材中鞣花酸的含量在
1.452～ 4.071 mg • g－ 1，各批次药材之间存在一定差异，可
能是由于采收季节、加工过程等因素造成。本文通过对鞣花
酸的含量测定方法的建立，弥补了目前仅从地锦草中槲皮素
的含量进行药材质量评价的不足，为地锦草药材及其制剂
的质量控制提供了参考依据。
表 2 样品中鞣花酸含量测定结果 (n＝ 2)
Tab 2 Determination of ellagic acid in the sample (n＝ 2)
批号
（lot No.）
鞣花酸含量
（content of ellagic
acid）/mg • g－ 1
批号
（lot No.）
鞣花酸含量
（content of ellagic
acid）/mg • g－ 1
110701 1.452 2012025423 2.052
20100205 3.098 20081121（2） 2.812
20081121（1） 4.071 080910 3.057
100501 2.074 080331 3.848
081121 2.956 071205 2.149
0957 2.906 20081013 2.358
20101008 2.113

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（收稿日期： 2012-12-06； 修回日期： 2012-12-30）