全 文 ：楼种质资源多样性研究的参考指标。
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收稿日期:2008-05-20;　修订日期:2008-09-25
基金项目:国家自然科学基金(No.30760308)
作者简介:李治建(1982-),男(汉族),河南夏邑人 ,现为新疆石河子大学
在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事药理学研究工作.
＊通讯作者简介:斯拉甫 ·艾白(1960-),男(维吾尔族), 新疆伊犁人 ,现
任新疆维吾尔自治区维吾尔医医院 、新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究
所主任药师 ,硕士生导师 ,硕士学位 ,主要从事抗炎免疫药理学研究工作.
地锦草提取物体外抗真菌作用研究
李治建 1 ,古力娜·达吾提2 ,斯拉甫·艾白 2, 3＊
(1.新疆石河子大学药学院 ,新疆 石河子　832000;
2.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院 ,新疆 乌鲁木齐　830049;
3.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所 ,新疆 乌鲁木齐　830049)
摘要:目的 对地锦草提取物进行体外抗真菌实验 , 测定其最小抑菌浓度(MIC)值。方法 采用美国临床实验室标准化委
员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A), 测定地锦草提取物对 60株
临床常见皮肤癣菌的 MIC。参考 MIC结果 ,选取地锦草提取物敏感的 6株皮肤癣菌按文献方法进行杀菌试验。结果 地
锦草提取物对红色毛癣菌的 MIC范围为 128 ～ 1 024μg· ml-1 ,平均 MIC为 446 μg· ml-1;对石膏样毛癣菌的 MIC范围
为 128 ～ 1 024 μg· ml-1 ,平均 MIC为 539μg· ml-1。杀菌结果显示 , 6株皮肤癣菌均生长 , 表明地锦草具有抑菌作用 , 其
抗真菌作用是通过抑制真菌生长而发挥作用的 ,而不具有杀菌作用。结论 地锦草提取物体外实验对真菌的生长具有抑
制作用。
关键词:地锦草提取物;　M38-A方案;　体外抗真菌;　最低抑菌浓度
中图分类号:R962;R291.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-2958-02
StudyonAntifungalSusceptibilityofDijincaoExtractagainstDermatophytes
LIZhi-jian1 , Gulnar·Dawuti2 , Silafu·Aibai2, 3＊
(1.ShiheziUniversity, Shihezi832000 , China;2.XinjiangUighurMedicalHospital, Urumqi830049, China;
3.InstituteofXinjiangUighurMedicine, Urumqi830049, China)
Abstract:ObjectiveToexaminetheantifungaleffectofDijincaoextractinvitroandtomeasuretheminimuminhibitoryconcen-
tration(MIC).MethodsAccordingtothestandardapprovedbytheNationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards(NC-
CLS):ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofFilamentousFungi(M38-A), theMICsofDi-
jincaoextractagainst60strainsofcommonclinicaldermatophytesweredetermined.AccordingtothoseMICs, 6strainsofdermato-
phytesbeingsensitivetoDijincaoextractwereselected, andgermicidaltestwasconductedaccordingtothemethodindocuments.
ResultsTheMICrangeofDijincaoextractagainstTrichophytonrubrumwas128 ～ 1 024μg· ml-1 , meanMICwas446μg·
ml-1;theMICrangeofDijincaoextractagainstTrichophytonmentagrophyteswas128 ～ 1 024μg· ml-1 , meanMICwas539μg·
ml-1.Theresultofgermicidaltestshowedthatallthe6 strainsofdermatophytesgrew.ConclusionDijincaoextracthasantifun-
galactivityagainstthedermatophytesinvitro.
Keywords:Dijincaoextract;　M38-A;　Antifungalinvitro;　MIC
　　地锦草 , 维吾尔名为夏塔热其尼(Xiahatereqini)、雅丽蔓
(Yalmankulake), 为大戟科植物地锦 EuphorbiahumifusaWilld.或
斑地锦 EuphorbiamaculataL.的干燥全草 , 是维吾尔医常用药材 ,
临床主要用于治疗手癣 、体癣 、足癣 、花斑癣 、银屑病 [ 1] 。研究发
现 , 地锦草提取物具有抗细菌作用 , 但其抗真菌方面的研究和文
献报道较少。为了研究地锦草提取物的体外抗真菌的作用 ,我们
参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12
真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)[ 2] ,
探讨地锦草提取物的体外抗真菌活性。
1 　材料
1.1 　药物 地锦草提取物(DJC), 由自治区维吾尔医药研究所
药剂室提供。提取方法及质量控制 , 参照《中华人民共和国药品
标准 -维吾尔药分册》中百癣夏塔热片之地锦草提取方法及质
量控制 [ 3] 。 阳性对照药特比萘酚 (Terbinafine, TBF, 商品名:
Lamisil),由诺华公司提供 , 批号 010482, 纯度 99.9%。
1.2 　菌种 红色毛癣菌(Trichophytonrubrum, T.r)20株;石膏样
毛癣菌(Trichophytonmentagrophytes, T.m)40株;质量控制菌株
为近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis, C.p)1株。本实验所采用
的菌株 , 均来自新疆医科大学真菌与真菌病研究中心菌种保藏库
(XYZ)。
1.3 　培养基 RPMI-1640培养基 ,美国 sigma公司产品;三氮吗
啡琳丙磺酸(MOPS), 美国 sigma公司产品;马铃薯葡萄糖琼脂培
养基(PDA), 批号 20070825, 北京奥博星生物科技有限公司产
品。
RPMI-1640培养基的配制:将 10.4 gRPMI-1640和 34.53
gMOPS粉末溶于 900 ml蒸馏水中 ,用 1 mol· L-1 NaOH溶液调
整其 pH至 7.0(25 ℃),加蒸馏水定容至 1 L, G-6漏斗滤过灭
菌 , 存于 4℃冰箱备用。
PDA培养基的配制:称取 PDA粉末 38g,加入 1 000ml蒸馏
水中 , 摇匀加热煮沸溶解 , 121℃高压灭菌 20 min, 分装 , 4 ℃保
存 , 备用。
2　方法
2.1　MIC的测定 根据 NCCLS推荐的《产孢丝状真菌的液基稀
释法抗真菌药物敏感性试验方案 》(M38-A)[ 2] , 测定 DJC提取
物对 T.r、T.m的最低抑菌浓度值(MIC)。
2.1.1　抗真菌药物储备液 、稀释液的制备 称取 DJC粉末 204.8
mg,用 1 ml二甲基亚砜(DMSO)溶解 , 制成浓度为 204 800 μg·
ml-1的储备液 , 存于 -20 ℃冰箱备用;称取 TBF8 mg, 用 1 ml
DMSO溶解 ,制成浓度为 8 000 μg· ml-1的储备液。从中吸取 1
μl加 RPMI-1640培养基 499 μl, 使之稀释 500倍 ,此时 TBF储
存液浓度为 16μg· ml-1 , 存于 -20℃冰箱备用。
将 DJC储备液 、TBF储备液分别用 RPMI-1640培养基倍比
稀释成 2倍终浓度。 DJC的 2倍终浓度由高向低依次为:2048,
1024 , 512, 256, 128 , 64, 32, 16, 8, 4μg· ml-1;TBF的 2倍终浓度
由高向低依次为:0.16, 0.08, 0.04, 0.02, 0.01, 0.005, 0.002 5,
0.001 25, 0.000 625, 0.000 312 5μg· ml-1。
2.1.2　菌接种液的制备
皮肤癣菌:将受试的皮肤癣菌接种于马铃薯培养基(PDA)
上 , 26℃培养 7 ～ 14 d。吸取 2 ml无菌的 0.85%的 NaCl溶液 ,冲
洗菌落表面的菌丝和孢子 ,将含有菌丝和孢子的冲洗液用血细胞
计数板记数 , 将其浓度调至 l×105 ～ 5×105 cfu.ml-1之间 , 用 RP-
MI-1640培养基稀释 50倍至 2倍终浓度。
念珠菌:将受试的念珠菌接种于马铃薯培养基(PDA)上 , 36
℃培养 48h。挑取菌落 , 加入 2 ml无菌的 0.85%的 NaCl溶液
中 , 用 0.5#McFarlandstandard比浊管比浊 ,用 RPMI-1640液基
稀释 100倍后再稀释 20倍至 2倍终浓度。
2.1.3　接种 将 100μl的 2倍终浓度的药液 , 由第 1孔至第 10
孔分别由高浓度到低浓度加入无菌 96孔细胞培养板中 , 第 11孔
为生长对照孔(仅加菌悬液 100 μl和 RPMI-1640培养基 100
μl,不加药物),第 12孔为空白对照孔(真菌 、药物都不加 , 只加
RPMI-1640培养基 200 μl)。将调好的菌接种液 100μl,分别加
入相应的微孔内 , 这将使每一梯度的抗真菌药物和菌接种液(2
倍终浓度)分别被 1∶1稀释到终浓度。
2.1.4　结果的判定 皮肤癣菌 , 26 ℃孵育 7 ～ 14 d读结果;念珠
菌 , 36 ℃孵育 48 h读结果。读取 MIC值时 , 应在不搅动的情况
下与对照孔按下列标准比较:肉眼清晰为 0;略模糊(80%受抑
制)为 1;浊度显著减低(50%受抑制)为 2;浊度轻度减低为 3;浊
度未减低为 4。本实验药物取 1(略模糊)或 2(浊度显著减低)为
判定终点。
2.1.5　质量控制 按照 NCCLS方案 , 对近平滑念珠菌 XYZ5001
进行反复测定 ,其两性霉素 B的 MIC值 0.5 ～ 4.0 μg· ml-1 , 氟
康唑的 MIC值 1.0 ～ 4.0 μg· ml-1 , 5 -氟胞嘧啶的 MIC值 0.12
～ 0.5 μg· ml-1。每次试验以此菌株为对照 ,只有当其 MIC值介
于其质控范围之内时 ,方认为实验操作准确可靠。且只有当生长
对照孔生长良好 ,空白对照无生长 , 其它孔随药物浓度升高 ,呈现
真菌生长梯度受抑制时 ,方证明试验成功。
2.2　最小杀真菌浓度(MFC)的测定 按文献方法 [ 4]取药敏实验
中肉眼判断无菌生长的培养液(同时取对照孔)接种于 PDA上 ,
继续培养。皮肤癣菌观察 14 d, 14 d后观察其是否有真菌生长。
MFC即为无菌生长所对应的最低药物浓度。
3　结果
3.1　 DJC和 TBF对 T.r, T.m的 MIC值测定结果 见表 1。
表 1　DJC和 TBF对 60株皮肤癣菌的抗真菌 MIC值
μg· ml-1
药物 红色毛癣菌(20株)MIC MIC平均值 MIC95
石膏样毛癣菌(40株)
MIC MIC平均值 MIC95
地锦草提取物 128～ 1024 446 1024 128 ～ 1024 539 1024
特比萘酚 0.0025 ～ 0.005 0.0046 0.005 0.0025 ～ 0.005 0.0042 0.005
3.2　杀菌实验结果 见表 2。从 DJC对 T.r, T.m杀菌活性的结
果可见 ,两种 6株皮肤癣菌均生长;TBF作用后 , 两种 6株皮肤癣
菌均未生长。
表 2　DJC和TBF对 6株皮肤癣菌的杀菌结果 μg· ml-1
药物 MFCXYZ40002 XYZ40003 XYZ40005 XYZ60008 XYZ60009 XYZ60010
地锦草提取物 ﹥ 512 ﹥ 512 ﹥ 512 ﹥ 512 ﹥ 512 ﹥ 512
特比萘酚 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
4　讨论
丝状真菌(皮肤癣菌)体外药敏实验方案 , 由于丝状真菌本
身的诸多特点如产孢条件难以控制 、接种量难以精确量化 、孵育
时间长等 ,使其实验方法标准化具有一定难度。迄今为止 , 国内
外尚无统一的丝状真菌药敏试验的标准化方法。 NCCLS于 1998
年推出了 《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方
案》 ,即 M38-P方案 ,该方案准确性好 、重复性高 , 在终点判定 、
结果的解释方面均有详细的规定 ,实验室间结果的一致性可以与
抗细菌的药物敏感试验相媲美 [ 5] 。 在此基础上 , NCCLS在某些
抗真菌药物的最低抑菌浓度 , 即 MIC值的判定等方面进行了广
泛深入的多中心研究 ,加上新型三唑类药物的问世和临床应用的
逐渐增多 ,于 2002年推出了新版产孢丝状真菌抗真菌药物敏感
性试验方案 ,即 M38 -A, 该方案是一个测定丝状真菌对不同抗
真菌药物敏感性的标准化程序 ,制定该方案的目的是希望经过相
同的标准化程序 ,使不同实验室获得的药物敏感性结果具有可比
性或者可重复性 [ 2] 。
本研究采用 NCCLS推荐的 M38 -A方案 , 并以特比萘酚
(TBF)为阳性对照药 , 研究了地锦草提取物对 60株皮肤癣菌的
体外抑真菌活性。 结果 , 地锦草提取物对两种皮肤癣菌的 MIC
值范围均为 128 ～ 1024 μg· ml-1 , 对 T.r, T.m的平均 MIC分别
为 446, 539μg· ml-1。阳性对照药 Terbinafine对 60株皮肤癣菌
的 MIC范围均在 0.0025 ～ 0.005 μg· ml-1之间 , 与文献报道一
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12 时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期
致 [ 6] 。从地锦草提取物对皮肤癣菌的杀菌活性结果 , 可见两种 6
株皮肤癣菌均生长 , 提示地锦草对皮肤癣菌的体外抗真菌活性 ,
主要是通过抑制真菌的生长而起作用。 TBF为新型丙烯胺类抗
真菌药 , 是一种杀真菌药 [ 7] , 从 TBF对皮肤癣菌杀菌活性结果 ,
证实 TBF是一种杀真菌药。
地锦草是维吾尔医常用药材 ,临床主要用其复方百癣夏塔热
(由地锦草 、诃子肉 、毛诃子肉 、司卡摩尼亚酯 、芦荟 、西青果等药
材组成),治疗手癣 、体癣 、足癣 、花斑癣 、银屑病等皮肤疾病 [ 3] 。
邓淑文等 [ 4] 、古力娜·达吾提等 [ 8]均采用 M38 -P方案 , 分别测
定了百癣夏塔热对 171株 、雅丽蔓(地锦草)总黄酮对 30株临床
常见皮肤癣菌的 MIC值。结果证明体外抗真菌活性 , 地锦草总
黄酮 >地锦草提取物 >百癣夏塔热。我们推测地锦草体外抗真
菌的活性成分可能是黄酮类。文献报道地锦草的化学成分主要
为黄酮 、鞣质类化合物 [ 9] 。现代药理学研究表明 , 地锦草有抑制
和杀灭细菌的作用 , 并且其抑菌和杀菌的活性与其提取物中的总
黄酮含量呈正相关 [ 10] 。但是 , 还未见地锦草总黄酮和其抗真菌
作用相关性的深入报道。因此 , 进一步研究地锦草总黄酮抗真菌
作用的机制 , 以及从地锦草中寻找新型抗真菌化合物 ,是今后研
究的方向。
致谢:新疆医科大学药学院刘发教授 , 新疆医科大学第一附
属医院真菌与真菌病研究中心邓淑文博士。
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国药鉴别
收稿日期:2008-05-26;　修订日期:2008-09-21
基金项目:湖南省科技计划项目(No.S2007F3131953)
作者简介:温俊达(1950-),男(汉族),广西贺县人 ,现任湖南省中医药研
究院副研究员 ,主要从事生药学研究工作.
＊通讯作者简介:蔡光先(1951-), 男(汉族),湖南益阳人 , 现任湖南省中
医药研究院教授 ,博士生导师 ,主要从事中医药现代化研究工作.
湖南道地药材湘西龙山百合花的生药学研究
温俊达1 ,佘高照 2 ,胡圣武 2 ,凌　翔1 ,佘高权 2 ,蔡光先1＊
(1.湖南省中医药研究院 ,湖南 长沙　410006;2.湖南省龙山县酉源现代中药饮片厂　416800)
摘要:目的 对湖南道地药材湘西龙山百合花进行系统的生药学鉴定研究 , 为其鉴别提供科学依据。方法 采用原植物 、
性状 、显微 、薄层鉴定方法。结果 通过原植物 、性状 、显微 、薄层鉴定方法能够很好地鉴定湖南道地药材湘西龙山百合
花。结论 这些方法简便易操作 ,可作为该道地药材定性鉴别方法 ,同时可为制定中药百合花质量标准提供依据。
关键词:道地药材;　百合花;　生药学
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-2960-02
ThePharmacognosticalStudyontheFlowerofLily(Liliumspp.)LivedinHunanProv-
ince
WENJun-da1 ,SHEGao-zhao2 ,HUSheng-wu2 ,LINGXiang1 , SHEGao-quan2 ,CAIGuang-xian1＊
(1.HunanAcademyofTraditionalChineseMedincine, Changsha410006, China;2.HunanLongshanXiyuan
PharmaceuticalCo.Ltd, Longshan, Hunan416800, China)
Abstract:ObjectiveTostudythepharmacognosticalidentificationoftheflowerofLily(Liliumspp.)livedinLongshanofthe
westofHunanprovince.MethodsMorphological, microscopicindentificationandthinlayerchromatography(TLC)wereadopted
inidentifyingtheoriginalplantandtheflowerofLily(Liliumspp.).ResultsTheflowerofLily(Liliumspp.)istheflowerinlily
family(Liliaceae)plantLiliumlancifoliumThunbafterindentified.ConclusionThemethodsarepracticalandspecial.These
studiescannotonlybeusedtoidentifytheflowerofLily(Liliumspp.), butalsoprovidereferenceforfurtherdevelopmentinclu-
dingqualitycontrolandidentificationofthiscrudedrug.
Keywords:Genuineherb;　Lily;　Pharnacognostic
　　百合花 , 别名逢花 、夜合花。 百合花药用始载于 《本草正
义》;“百合之花 ,夜合朝开 , 以知肝火上浮 , 夜不成寐 , 甚有捷效 ,
不仅取其夜合之义 ,盖甘凉泄降 , 固有以靖浮阳而清虚火也” [ 1] 。
《滇南本草 》载:“将百合花与蜂蜜或白糖同煎治疗老弱虚
晕” 。[ 2 , 3] 《本草纲目》载:“将百合花曝干研末 , 调以茶油 , 则治小
儿疱湿疮”。经常饮用 ,以百合花 、红茶 、杏仁 、 桂圆等制成的百
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.12