全 文 ：· 58 · Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2014 Vol． 14 No． 1 中国医院用药评价与分析 2014 年第 14 卷第 1 期
高效液相色谱法测定地锦喷雾剂中
芦丁、槲皮素和山柰酚的含量Δ
巩 伟* ，赵庆华，李兴东，王 莉，张 琨，李 鹏(济南军区联勤部药品仪器检验所，济南 250022)
中图分类号 Ｒ965 文献标志码 B 文章编号 1672 － 2124(2014)01 － 0058 － 03
摘 要 目的:建立高效液相色谱法( HPLC) 测定地锦喷雾剂中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量。方法:色谱柱为 Inertsil ODS-3 色
谱柱( 250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-0. 3%磷酸溶液( 50 ∶ 50 ) ，体积流量为 1. 0 ml /min，检测波长为 360 nm，柱温为
30 ℃ ;自动进样器进样，进样量为 10 μl。结果:芦丁质量浓度在 1. 953 ～ 39. 060 μg /ml范围内线性关系良好( Ｒ2 = 1，n = 6) ，平均
回收率为 98. 53% ( ＲSD = 1. 12%，n = 9) ;槲皮素质量浓度在 1. 976 ～ 39. 526 μg /ml范围内线性关系良好( Ｒ2 = 1，n = 6) ，平均回收
率为 98. 66% ( ＲSD = 1. 09%，n = 9) ;山柰酚质量浓度在 1. 822 ～ 36. 442 μg /ml范围内线性关系良好( Ｒ2 = 1，n = 6) ，平均回收率为
98. 91% ( ＲSD = 1. 53%，n = 9) 。结论:本法操作简便，结果准确稳定，专属性强，可用于地锦喷雾剂的质量控制。
关键词 高效液相色谱法; 地锦喷雾剂; 芦丁; 槲皮素; 山柰酚
Determination of Eldrin，Quercetin and Kaempferol in Euphorbia Humifusa Spray by HPLC
GONG Wei，ZHAO Qing-hua，LI Xing-dong，WANG Li，ZHANG Kun，LI Peng (Institute for Drug
and Instrument Control，Joint Logistics Department of Ji’nan Military Command，Ji’nan 250022，
China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish a HPLC method for determination of eldrin，quercetin and kaempferol in
Euphorbia humifusa Spray． METHODS:The separation of samples was performed on Inertsil ODS-3 (250 mm ×4. 6 mm，
5 μm)and the mobile phase consisted of methanol-0. 3% phosphoric acid solution (50∶ 50)at volumetric flow rate of
1. 0 ml /min，detection wavelength of 360 nm，column temperature of 30 ℃ and the injection volume (in automatic
sampler)of 10 μl． ＲESULTS:The linear range of eldrin was 1. 953-39. 060 μg /ml (Ｒ2 = 1，n = 6)with average
recovery of 98. 53% (ＲSD =1. 12%，n =9);the linear range of quercetin was 1. 976-39. 526 μg /ml (Ｒ2 = 1，n = 6)
with average recovery of 98. 66% (ＲSD =1. 09%，n =9)，and the linear range of kaempferol was 1. 822-36. 442 μg /ml
(Ｒ2 =1，n =6)with average recovery rate of 98. 91% (ＲSD =1. 53%，n =9)． CONCLUSION:The method is easy and
simple to operate，accurate and stable in results and specific，thus it is applicable for the quality control of Euphorbia
humifusa Spray．
KEYWOＲDS HPLC;Dijin Spray;Eldrin;Quercetin;Kaempferol
Δ 基金项目:济南军区后勤科研计划(编号:CJN12L078)
* 主管药师，博士。研究方向:药品质量分析。E-mail:gongweicn
@ foxmail． com
地锦喷雾剂为济南军区医疗机构制剂［济制字(2011)
F10675］，具有清湿热、解毒、止痛、止痒之功效，常用于治疗皮
肤、黏膜、腔道炎症、疱疹等，临床效果较好。该制剂由地锦
草、丁香、紫花地丁、白鲜皮等组成，处方中，地锦草为君药。
众所周知，地锦草具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗过敏等多种作
用，其化学成分有黄酮、三萜、香豆素、甾醇、鞣质及酚酸类等
化合物，其中以芦丁、槲皮素、山柰酚等为代表的黄酮类化合
物为主要活性成分［1-3］。该制剂质量标准中有性状、鉴别、检
查等检验项目，无含量测定。为更有效地控制该制剂的质量，
本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定地锦喷雾剂中芦丁、
槲皮素和山柰酚的含量，报道如下。
1 材料
1. 1 仪器
LC-20AT HPLC仪(包括 SPD-20A UV/VIS检测器，自动进
样器，日本岛津公司生产);AUW220D 电子分析天平(日本岛
津公司生产) ;AS-3120A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器
有限公司生产，功率 250 W，频率 40 kHz);Synergy-UV 超纯水
器(法国 Millipore公司生产)。
1. 2 药品与试剂
芦丁对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号:
100080-200707，供 HPLC法测定时含量按 90. 5%计算)、槲皮
素对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号:100081-
200907，供 HPLC 法测定时含量按 96. 5%计算)、山柰酚对照
品(中国食品药品检定研究院提供，批号:110861-200808，供
HPLC法测定时含量按 95. 9%计算);甲醇、磷酸均为色谱纯
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A 混合对照品溶液;B 供试品溶液;1 芦丁;2 槲皮素;3 山柰酚
A． mixed reference solution;B． test solution;1． eldrin;2． quercetin;3． kaempferol
图 1 HPLC图
Fig 1 HPLC chromatograms
(国药集团化学试剂有限公司生产)，水为超纯水(自制) ，其他
试剂均为分析纯。地锦喷雾剂为 2013 年本所抽验制剂品种
(批号:20120926、20121106、20121225)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:INTEＲSIL ODS3(250 mm × 4. 6 mm，5 μm);流动
相:甲醇-0. 3%磷酸(50 ∶ 50) ，体积流量:1. 0 ml /min;检测波
长:360 nm;柱温:30 ℃;自动进样器进样，进样量:10 μl;理论
板数按槲皮素峰计应不低于 4 000。色谱图见图 1。
2. 2 对照品混合溶液的制备
精密称取芦丁对照品 10. 79 mg，置 10 ml 量瓶中，加甲醇
溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为 976. 495 μg /ml 的芦丁对
照品贮备液;精密称取槲皮素对照品 10. 24 mg、山柰酚
9. 50 mg，同法制成质量浓度为 988. 160 μg /ml 的槲皮素对照
品贮备液和质量浓度为 911. 050 μg /ml 的山柰酚对照品贮备
液。精密量取上述 3 种对照品贮备液各 2 ml，置 50 ml 量瓶
中，加甲醇制成混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
取精密吸取地锦喷雾剂内容物 10 ml，置 25 ml量瓶中，加
甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
2. 4 线性关系考察
精密量取“2. 2”项下的混合对照品溶液各 0. 5、1. 0、2. 0、
5. 0、8. 0、10. 0 ml，分别置 10 ml 量瓶中，加甲醇制成不同质量
浓度的混合对照品溶液。取上述对照品混合溶液各 10 μl，注
入 HPLC 仪，记录峰面积。以质量浓度(μg /ml)为横坐标、峰
面积为纵坐标，绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为 Y =
39 450X － 4 007(Ｒ2 = 1，n = 6)，槲皮素的回归方程为 Y =
84 789X － 15 125(Ｒ2 = 1，n = 6)，山柰酚的回归方程为 Y =
82 904X －14 602(Ｒ2 = 1，n = 6)，表明芦丁质量浓度在 1. 953 ～
39. 060 μg /ml范围内线性关系良好，槲皮素质量浓度在 1. 976 ～
39. 526 μg /ml 范围内线性关系良好，山柰酚质量浓度在
1. 822 ～ 36. 442 μg /ml范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液，进样量为 10 μl，连续进样
6 次。结果表明，芦丁、槲皮素和山柰酚峰面积的 ＲSD 分别为
0. 41%、0. 52%和 0. 48%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验
取地锦喷雾剂(批号:20120926)内容物 10 ml，按“2. 3”项
下方法制备，平行试验 6 份。结果芦丁的平均含量为
37. 190 μg /ml，ＲSD = 0. 58% (n = 6);槲皮素的平均含量为
38. 536 μg /ml，ＲSD = 0. 91% (n = 6) ;山柰酚的平均含量为
35. 005 μg /ml，ＲSD = 0. 41% (n = 6) ，表明方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号:20120926)10 μl，于 0、2、
4、8、12、24 h分别测定峰面积。结果显示，芦丁、槲皮素、山柰
酚峰面积的 ＲSD 分别为 0. 87%、1. 07%、1. 21%，表明供试品
溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验
精密量取已知含量的样品(批号:20120926)9 份，每份 5
ml，置 25 ml量瓶中，分别精密加入“2. 2”项下的混合对照品溶
液(芦丁:39. 060 μg /ml，槲皮素:39. 526 μg /ml，山柰酚:
36. 442 μg /ml)各 4、5、6 ml，按“2. 3”项下方法制备，测定峰面
积并计算回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n =9)
Tab 1 Ｒesults of recovery tests (n =9)
对照品
样品中含量 /
μg
对照品加入量 /
μg
实测值 /
μg
回收率 /
%
平均值 /
%
ＲSD/
%
芦丁 185. 950 156. 240 338. 191 97. 44 98. 53 1. 12
185. 950 156. 240 342. 265 100. 05
185. 950 156. 240 338. 476 97. 62
185. 950 195. 300 379. 123 98. 91
185. 950 195. 300 381. 896 100. 33
185. 950 195. 300 376. 815 97. 73
185. 950 234. 360 417. 783 98. 92
185. 950 234. 360 416. 432 98. 35
185. 950 234. 360 414. 346 97. 46
槲皮素 192. 680 158. 104 348. 123 98. 32 98. 66 1. 09
192. 680 158. 104 347. 891 98. 17
192. 680 158. 104 352. 109 100. 84
192. 680 197. 630 389. 561 99. 62
192. 680 197. 630 386. 458 98. 05
192. 680 197. 630 384. 993 97. 31
192. 680 237. 156 427. 893 99. 18
192. 680 237. 156 424. 569 97. 78
192. 680 237. 156 426. 765 98. 71
山柰酚 175. 025 145. 768 317. 478 97. 73 98. 91 1. 53
175. 025 145. 768 322. 012 100. 84
175. 025 145. 768 317. 109 97. 47
175. 025 182. 210 354. 569 98. 54
175. 025 182. 210 359. 782 101. 40
175. 025 182. 210 352. 873 97. 61
175. 025 218. 652 391. 187 98. 86
175. 025 218. 652 388. 471 97. 62
175. 025 218. 652 393. 892 100. 10
2. 9 样品含量测定
取 3 个批号的地锦喷雾剂内容物，按“2. 3”项下方法制
备，分别精密吸取供试品溶液各 10 μl，注入 HPLC仪，测定，计
算含量，结果见表 2。
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櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵
表 2 样品含量测定结果(n =3)
Tab 2 Ｒesults of content determination of samples (n =3)
批号 芦丁 /(μg /ml) 槲皮素 /(μg /ml) 山柰酚 /(μg /ml) 总含量 /(μg /ml)
20120926 37. 190 38. 536 35. 005 110. 731
20121106 36. 446 38. 151 34. 012 108. 609
20121225 37. 098 38. 413 34. 694 110. 205
3 讨论
本制剂处方中，地锦草为君药，其主要有效活性成分为以芦
丁、槲皮素和山柰酚为代表的黄酮类化合物。结合《中华人民共
和国药典》中地锦草的含量测定方法［4］和文献报道［5-6］，本试验
采用 HPLC法测定芦丁、槲皮素和山柰酚的含量，并用三者的总
含量来表示制剂中黄酮类化合物的含量。本试验测定的 3 个批
号样品中，3种黄酮类成分的总含量均在110 μg /ml左右，这为地
锦喷雾剂的含量限度的确定提供了数据支持。下一步需要进一
步扩大试验，从而确定该制剂中总黄酮的含量限度。
选择测定波长时，用二极管阵列检测器扫描色谱图，发现
黄酮类成分在测定波长为 360 nm 时峰形和分离度均良好，选
用 360 nm为测定波长。
选择流动相时，对比考察了乙腈-0. 2%醋酸溶液(50∶ 50)、
甲醇-0. 3%磷酸溶液(50∶ 50)、甲醇-0. 3%磷酸溶液(40∶ 60)等
3 种流动相，并考察了梯度洗脱模式。结果表明，选择甲醇-
0. 3%磷酸溶液(50∶ 50)为流动相时目标成分的响应值好，峰
形良好，理论板数、分离度、拖尾因子等均符合要求，且目标成
分的保留时间合适。
* 副主任护师。研究方向:泌尿外科临床工作。 E-mail:
1027371267@ qq． com
本试验选用了不同厂家的色谱柱进行比较:SHIMADZU
VP-ODS 色谱(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)、Agilent ZOＲBAX
Extend C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)、Kromasil KＲ100-5-C18
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)以及 Inertsil ODS-3(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm)。结果显示 Inertsil ODS-3(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm)色谱柱响应值最好，样品各组分分离度好，故选用其进
行方法学考察和样品含量测定。
参考文献
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1994，42(9) :1803-1807．
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2010 年版．北京:中国医药科技出版社，2010:118．
［5］ 雷鹏，刘韶，李新中，等． HPLC 测定地锦草中槲皮素、
山柰素的含量［J］．中药材，2005，28(8):666-667．
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酸、槲皮素及山柰素含量［J］． 中国实验方剂学杂志，
2012，18(7):100-102．
(收稿日期:2013-09-03)
·临床用药·
尖吻蝮蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的疗效观察
周玉梅* ，周 舰，张景宇(武汉市第三医院，武汉 430060)
中图分类号 Ｒ973 + ． 1 文献标志码 B 文章编号 1672 － 2124(2014)01 － 0060 － 03
摘 要 目的:研究尖吻腹蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的价值。方法:将前列腺增生患者 147 例、膀胱肿瘤患者 33 例按照可比
性的原则分为 A、B、C 3组进行研究，给予注射用尖吻蝮蛇血凝酶( 1 U/支)，A组给予 3支，B组给予 2支，C组给于安慰剂，观察 3组
患者的止血效果与血凝指标。结果: 在 3 组患者之间具有可比性的前提下，患者凝血酶原时间( PT)、活化部分凝血活酶时间
( APTT)、凝血酶时间( TT)、纤维蛋白原定量( FIB) 以及 D-二聚体( DD) 方面比较，A组与 B 组患者之间的差异无统计学意义( P ＞
0. 05) ; 但是 A、B 2组与 C组之间的差异均具有统计学意义( P ＜0. 05)。A组和 B组患者之间的止血时间、切口出血时间以及凝血异
常比较，差异无统计学意义( P ＞0. 05) ; 但是 A、B 2组与 C组之间的差异均具有统计学意义( P ＜0. 05)。结论:尖吻蝮蛇血凝酶在泌
尿外科手术中具有较好的止血作用和安全性，疗效不随药物剂量增加而增加，一般情况下，使用 2 U即可达到良好的效果。
关键词 尖吻蝮蛇血凝酶; 止血; 疗效观察
Hemostatic Efficacy of Haemocoagulase Agkistrodon in Patients Undergoing Urologic Surgery
ZHOU Yu-mei，ZHOU Jian，ZHANG Jing-yu(Wuhan Third Hospital，Wuhan 430060，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To evaluate the hemostatic efficacy of hemocoagulase agkistrodon in patients undergoing